FHIT抑癌基因在乳腺癌组织中的表达缺失

              作者：金春亭 李海军 张林西 李玉珍 范婕 武欣 白美玲

【摘要】  目的：探讨FHIT基因蛋白在乳腺癌中的表达特点及其与临床病理参数的关系。方法：采用免疫组织化学S?P法，检测62例乳腺癌组织中FHIT蛋白的表达情况。结果：乳腺癌组织中FHIT蛋白阳性表达率为54.84%，其表达缺失率为45.16%。FHIT蛋白在导管内癌局部浸润组的阴性表达率为30%，明显低于浸润性导管癌组（48.08%），但是没有统计学差异；临床Ⅰ～Ⅱ期阴性表达率为38.30%，明显低于Ⅲ～Ⅳ期阴性表达率（66.67%）（P=0.055）。FHIT蛋白在有淋巴结转移组表达缺失率为64.00%，显著高于无淋巴结转移组（32.43%）（P=0.014）。FHIT蛋白的表达缺失与患者年龄、癌的左右乳分布没有显著性差异。结论：乳腺癌组织中有FHIT蛋白的表达缺失，可能参与或促进乳腺癌的形成。

【关键词】  FHIT；乳腺癌；免疫组织化学

    【ABSTRACT】  Objective: To investigate the expression characteristics of FHIT protein in breast carcinomas and its relationship with clinicopathological parameters. Methods: Expression of FHIT protein in breast carcinoma tissues of 62 cases was detected by SP immunohistochemistry. Results: The positive rate of FHIT protein expression in breast carcinoma tissues was 54.84%, and about 45.16% cases lost FHIT expression. Negative rate of FHIT expression in early invasive ductal carcinoma in situ group was obviously lower than that in invasive ductal carcinomas group (48.08%), but the difference wasn?t significant. Also, loss of FHIT expression in stage Ⅲ～Ⅳ was higher than that in stage Ⅰ～Ⅱ(P=0.055). There was 64.00% breast carcinomas with lymph node metastasis lossing FHIT expression, the lossing rate was significantly higher than that in carcinomas without metastasis (P=0.014). FHIT expression had no relationship with patients? age, distri?

    bution of cancers in right or left breast. Conclusion: There was remarkable loss of FHIT protein expression in breast carcinomas. Loss of FHIT expression may be involved in the carcinogenesis of breast or progression of breast carcinomas.

    【KEY WORDS】  FHIT; Breast carcinoma; Immunohistochemistry

    脆性组氨酸三联体(Fragile histidine triad, FHIT)基因是位于染色体3p14.2上的一个候选抑癌基因，其改变主要见于上皮起源的人类恶性肿瘤。研究已发现FHIT基因在多种肿瘤[1～5]中均有改变且以缺失为主。为了明确FHIT蛋白表达缺失与乳腺癌患者的临床病理参数的相关性及其可能的预后，我们应用免疫组织化学方法对62例乳腺癌组织中FHIT蛋白的表达情况进行了检测。

    1  材料与方法

    1.1  标本来源  收集我院病理教研室2002.1～2004.4月乳腺癌术后送检标本62例，年龄25～73岁，平均年龄50.89岁。临床分期Ⅰ期16例，Ⅱ期31例，Ⅲ期10例，Ⅳ期5例。所有标本均经10%福尔马林液固定，石蜡包埋，4μｍ连续切片，HE染色，资深病医师重新光镜下观察确诊。

    1.2  免疫组织化学染色  采用S?P法，主要步骤为：二甲苯脱蜡、梯度酒精脱水，3%双氧水室温处理10min，PBS缓冲液洗涤，专用微波炉进行抗原修复，正常山羊血清37℃封闭、一抗4℃冰箱过夜，次日顺序滴加二抗及三抗，DAB显色10～15min，苏木素复染胞核，脱水透明并用中性树胶封片。同时以已知阳性切片作为阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。所有试剂均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。光镜下观察切片，以胞浆内出现棕黄色颗粒视为FHIT表达阳性细胞，以阳性细胞数所占比例>10%视为阳性表达。

    1.3  统计学处理  应用SPSS11.0统计软件进行统计分析，组间比较采用χ2检验。当P<0.05时认为差异具有显著性。

    2  结果

    FHIT蛋白在乳腺癌细胞胞质中表达，62例乳腺癌组织中有34例FHIT蛋白呈阳性表达，其阳性表达率为54.84%。但是在部分乳腺癌组织中呈阴性表达，其表达缺失率为45.16%。FHIT蛋白在导管内癌局部浸润组的阴性表达率为30%，明显低于浸润性导管癌组（48.08%），但是没有统计学差异；临床Ⅰ～Ⅱ期阴性表达率为38.30%，明显低于Ⅲ～Ⅳ期阴性表达率（66.67%）（P=0.055）。FHIT蛋白在有淋巴结转移组表达缺失率为64.00%，显著高于无淋巴结转移组（32.43%）（P=0.014）。FHIT蛋白的表达缺失与患者年龄、癌的左右乳分布没有显著性差异（P>0.05）（见表1）。2007年2月金春亭等：FHIT抑癌基因在乳腺癌组织中的表达缺失第1期2007年2月河北北方学院学报（医学版）第1期表1  FHIT基因的表达与临床病理特征的关系

    3  讨论

    1996年Ohta等克隆了一种新的抑癌基因，cDNA序列长约1.1kb，此基因编码的蛋白质属于三组氨酸家族(histidine triad family, HIT)，而且此基因易于断裂，故命名为脆性组氨酸三联体基因(fragile histidine triad, FHIT)，它定位于人类染色体3p14.2上。在正常情况下，FHIT基因表达于几乎所有的正常人体组织，在人类组织中均有低水平的表达，以肾脏的表达水平最高[6]。它的作用主要为调控细胞周期和诱导细胞凋亡，其结构和表达的异常见于包括乳腺癌在内的多种类型肿瘤细胞株和原发癌组织[7]。脆弱位点发生断裂，则会使包含脆弱位点的FHIT断裂、失活，引起细胞基因变异，最终会导致细胞的异常增生。

    研究发现，人体多种肿瘤组织中FHIT蛋白表达存在频繁地降低或丢失，与FHIT基因转录及缺失有关。本研究发现，FHIT蛋白阳性表达率为54.84%，与[1]报道一致。说明有明显的蛋白表达缺失。另有多项研究发现约有50%的乳腺癌出现FHIT表达水平明显降低[8]。FHIT基因表达缺失在从癌前病变至原位癌以至于浸润癌的进展过程中可能是一个重要步骤。本研究中FHIT蛋白在浸润性导管癌组的阴性表达率（48.08%）高于导管内癌局部浸润组（30%），临床Ⅲ～Ⅳ期阴性表达率（66.67%）高于Ⅰ～Ⅱ期阴性表达率（38.30%）。提示FHIT表达缺失可能发生在乳腺癌形成的早期，FHIT蛋白表达缺失与乳腺癌的浸润进展有关[9]。

    研究发现多种肿瘤组织中FHIT蛋白表达存在频繁的降低或缺失，并与FHIT基因转录及缺失有关[10]，FHIT基因能降低或阻止种植在裸鼠的肿瘤细胞形成实体肿瘤[11]，提示FHIT基因为多种肿瘤的候选抑制基因。本研究中FHIT蛋白在有淋巴结转移组表达缺失率为64.00%，显著高于无淋巴结转移组（32.43%），进一步提示FHIT蛋白可能在乳腺癌的进展和演化中起着重要的作用。FHIT在乳腺癌中的表达缺失与患者预后较差有关[8]。FHIT蛋白用免疫组化方法易于检测，因此，它可能成为一种新的用于临床监测患者预后的分子指标。

    总之，FHIT蛋白在乳腺癌组织中表达缺失，可能参与乳腺癌的早期形成及进展，乳腺癌组织中FHIT蛋白表达水平的检测对于乳腺癌患者的及估计预后具有一定的指导意义。

【文献】
  1 Arun B, Kilic G, Yen C, et al. Loss of FHIT expression in breast cancer is correlated with poor prognostic markers/[J/]. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev, 2005,14(7):1681?1685

2 Nan KJ, Ruan ZP, Jing Z, et al. Expression of fragile histidine triad in primary hepatocellular carcinoma and its relation with cell proliferation and apoptosis/[J/]. World J Gastroenterol, 2005,11(2):228?231

3 Yuge T, Nibu K, Kondo K, et al. Loss of FHIT expression in squamous cell carcinoma and premalignant lesions of the larynx/[J/]. Ann Otol Rhinol Laryngol, 2005,114(2):127?131

4 Zhao P, Liu W, Lu YL. Clinicopathological significance of FHIT protein expression in gastric adenocarcinoma patients/[J/]. World J Gastroenterol, 2005,11(36):5735?5738

5 Sarli L, Bottarelli L, Azzoni C, et al. Abnormal Fhit protein expression and high frequency of microsatellite instability in sporadic colorectal cancer/[J/]. Eur J Cancer, 2004,40(10):1581?1588

6 Xiao GH, Jin F, Klein?Szanto AJ, et al.The FHIT gene product is highly expressed in the cytoplasm of renal tubular epithelium and is down?regulated in kidney cancers/[J/]. Am J Pathol, 1997,151(6):1541?1547

7 Ohta M, Inoue H, Cotticelli MG, et al.The FHIT gene, spanning the chromosome 3p14.2 fragile site and renal carcinoma?associated t(3;8) breakpoint, is abnormal in digestive tract cancers/[J/]. Cell, 1996,84(4):587?597

8 Ingvarsson S, Agnarsson BA, Sigbjornsdottir BI, et al. Reduced Fhit expression in sporadic and BRCA2?linked breast carcinomas/[J/]. Cancer Res, 1999,59(11):2682?2689

9 Guler G, Uner A, Guler N, et al.Concordant loss of fragile gene expression early in breast cancer development/[J/]. Pathol Int, 2005,55(8):471?478

10Croce CM, Sozzi G, Huebner K. Role of FHIT in human cancer/[J/]. J Clin Oncol, 1999,17(5):1618?1624

11Druck T, Hadaczek P, Fu TB, et al. Structure and expression of the human FHIT gene in normal and tumor cells/[J/]. Cancer Res, 1997,57(3):504?512