癌基因C?erbB?2的表达与周围型肺癌生物学行为和CT征象的关系
作者：温翠玲 张志华 张志林
【摘要】 目的：探讨癌基因C?erbB?2在周围型肺癌发生、中的作用。方法：采用免疫组化和流式细胞术、聚合酶链反应三种方法检测基因表达是否一致及与生物学行为、CT征象的关系。结果：癌基因C?erbB?2蛋白表达与患者的年龄、性别、TNM分期无关，在肺腺癌中的表达明显高于鳞癌(P<0?05)，肺癌的分化程度低、有肺门或纵隔淋巴结转移C?erbB?2蛋白表达明显增高(P<0?05)。C?erbB?2蛋白表达与深分叶征、棘突征有关；而与肿瘤的大小、短细毛刺征、胸膜凹陷征无关。三种方法检测C?erbB?2蛋白及mRNA表达水平一致。结论：癌基因C?erbB?2在肺癌发生、发展、CT征象中起重要作用，检测这种基因并结合CT征象可作为临床诊断及评估预后的有效指标。
【关键词】 周围型肺癌；生物学行为；癌基因C?erbB?2；CT征象；免疫组化；流式细胞术；聚合酶链反应
肺癌是目前导致人类死亡的主要恶性肿瘤之一，且是全球发病率和死亡率增长最快的恶性肿瘤。本研究采用免疫组化和流式细胞术、聚合酶链反应三种方法检测癌基因C?erbB?2表达是否一致，并探讨其与周围型肺癌的生物学行为和CT征象的关系。
1 资料与方法
1?1 一般资料 收集2006年在河北北方学院附属第一胸外科行手术切除且术前均经CT多层扫描，术后均经病诊断，术前未化疗及放疗的周围型肺癌患者62例,其中男性42例，女性20例;年龄25~72岁，平均年龄59?1岁。各病例的病历均详细记录患者的年龄、性别、组织类型、分化程度、肿瘤TNM分期、纵隔淋巴结转移情况，放射科CT室均存储了所有患者术前检查CT检查的影像学资料。
1?2 分组 根据1999年WHO肺癌分类方法进行组织学分类，其中鳞癌21例，腺癌36例，小细胞未分化癌5例;组织学分类（按组织结构、异型性、及核分裂相等）分为高、中、低分化组，肿瘤TNM分期（1997年UICC）分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期，CT征象按肿瘤大小（3cm为界）、深分叶征、棘突征、短细毛刺征、胸膜凹陷分别分为两组。
1?3 CT扫描采用东芝Asteion/VR型螺旋CT机，先至肺尖到膈顶以层厚10mm、Pitch1?5行常规螺旋CT扫描，再对病灶局部行高分辨扫描，层厚2mm，层间距4mm，共扫3~4层。其中40例病灶及肺门行增强扫描，CT图像由两位放射科副主任医师分别阅片、记录，如意见不一致，由第三位副主任医师参与，共同讨论，统一结果。
1?4 62例患者手术切除标本均用10%的福尔马林溶液固定、石蜡包埋。以4μm层厚,连续切片两张，一张行HE染色，参照1999年WHO肺癌分类方法进行病理组织学分类；另一张用免疫组织化学技术S?P方法，具体操作方法按试剂盒说明书，以乳腺癌和大肠癌阳性标本作阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。染色结果判断:阳性信号均为棕黄色，呈弥漫或颗粒性改变，C?erbB?2蛋白的表达位于细胞膜或部分细胞浆。根据阳性细胞占肿瘤细胞的比例，分为阴性、弱阳性、阳性等。
1?5 将免疫组化检验结果与临床生物学行为、肿瘤CT征象进行比较，对所得数据采用χ2检验进行统计学分析。
2 结果
2?1 C?erbB?2蛋白表达与周围型肺癌临床生物学行为的关系，见表1。
表1 C?erbB?2蛋白表达与周围型肺癌临床生物学行为的关系 略
2?2 C?erbB?2蛋白表达与周围型肺癌CT征象的关系，见表2。
表2 C?erbB?2蛋白表达与周围型肺癌CT征象的关系 略
3 讨论
肺癌患者术后局部复发和远处转移是其死亡的主要原因。因此如何准确估计其术后复发转移的可能性，使其在复发转移前即得到及时，是近年来临床研究的热点，在这方面C?erbB?2表达有重要作用。C?erbB?2为原癌基因，位于17号染色体的q21区带上，其功能可以激活信使系统将外界信号传递到细胞内部，C?erbB?2主要通过基因扩增而被激活,该基因扩增或过表达见于某些肿瘤组织,提示参与肿瘤的发生/发展过程[1]。
3?1 C?erbB?2蛋白表达与周围型肺癌临床生物学行为的关系本组资料显示，C?erbB?2蛋白的表达与患者的年龄、性别、TNM分期无关，这与有关报道[1]不一致。C?erbB?2蛋白在周围型肺腺癌、鳞癌、小细胞癌表达有显著性差异，在周围型小细胞未分化癌中无表达[2]，在周围型肺腺癌中的表达明显高于鳞癌，这种差异的存在，可能是导致这三种类型肺癌出现不同影像学特点的一个重要因素。C?erbB?2蛋白的过度表达与肺癌的分化程度呈负相关，与肺门或纵隔淋巴结转移呈正相关，这与有关文献报道[3]相一致。以上资料表明，C?erbB?2基因在周围型肺癌的发生、中起重要作用，检测C?erbB?2基因对判断肺癌患者的预后有重要价值。
3?2 C?erbB?2蛋白表达与周围型肺癌CT征象的关系本组资料还显示，C?erbB?2蛋白表达与深分叶征、棘突征有关；而与肿瘤的大小、短细毛刺征、胸膜凹陷征无关。CT检查是目前评价肺癌形态和密度特征的最佳影像学手段之一，肺癌CT表现的多形性是由肿瘤的不同生长方式决定的，这与原癌基因C?erbB?2的表达有着密切的关系。本组资料中有深分叶征30例，C?erbB?2的表达水平明显高于无深分叶征，表明深分叶征具有更高的恶性程度，同时也说明深分叶征作为周围型肺癌基本征象之一，具有重要的诊断价值。从表2可以看出，具有棘突征的周围型肺癌其C?erbB?2蛋白过度表达明显高于无棘突征者，而有短细毛刺征者与无短细毛刺征者之间C?erbB?2蛋白表达率无明显差异，这提示在判断周围型肺癌的恶性程度、转移潜能等方面，棘突征比短细毛刺征价值更大。我们认为这种差异可从其形成的病理机制不同得到解释。
3?3 三种检测方法的比较免疫组化是不同酶来标记抗体，在酶的催化下催化外加底物发生化学反应，生成有色物质。免疫组化检测蛋白的表达，定位准确，但定量不精确。流式细胞术是采用流式细胞仪对细胞悬液进行快速分析，通过对流动液体中排列成单列的细胞进行逐个检测，分析蛋白质的表达，具有检测速度快，方法灵活、准确的特点。PCR是一项在短时间内大量扩增特定的DNA片段的分子生物学技术。PCR是检测和分析少量DNA的较有效的方法，再结合RT步骤，可应用和分析mRNA，敏感性和特异性得到了提高。本实验通过免疫组化、流式细胞术和聚合酶链反应三种方法，检测了62例周围型肺癌原发灶和癌旁正常肺组织，结果显示C?erbB?2蛋白及mRNA表达水平均与纵隔淋巴结转移有关。
【文献】
1 牟兆新,候振江.C?erbB?2基因在恶性肿瘤中的研究进展/[J/].煤炭医学杂志,2006,9(1):4?6
2 周涛,叶明,千灵红，等.癌基因C?erbB?2在肺癌及癌旁组织中的表达研究/[J/].实用肿瘤杂志,1994,9(4):224
3 窦迎利,郑晓芙,赵庆夏.bcl?2,p53,C?erbB?2蛋白在肺癌及意义/[J/].中国肿瘤临床与康复,2000,7(3):27?29
4 赵川,普苹,付红梅,等.C?erbB?2,bcl?2和nm23?H1在原发性肺癌组织中的表达/[J/].昆明医学院学报,2004,25(2):53?55
