子宫内膜异位症患者基质金属蛋白酶-2的表达及其临床意义

【摘要】  　　目的 探讨基质金属蛋白酶-2（MMP-2）在子宫内膜异位症(EM)发生中的作用及其临床意义。方法 SP法检测EM36例异位内膜组、EM32例在位内膜组和22例正常子宫内膜组中MMP-2的表达。结果 MMP-2在正常内膜组、在位内膜组和异位内膜组中阳性率分别为36.36%、65.63%和86.11%，异位内膜组MMP-2阳性率高于在位内膜组和正常内膜组（P<0.05或P<0.01）。在位内膜组中，分泌期MMP-2表达强于增生期（P<0.05）；正常内膜组和异位内膜组中，分泌期与增生期MMP-2表达差异无显著性（P均>0.05）。结论 MMP-2的表达异常与EM的发病有关。

【关键词】  子宫内膜异位症 明胶酶A 免疫组织化学

　　子宫内膜异位症(Endometriosis， EM) 是生育期妇女的常见病，特点是子宫内膜在子宫腔被覆面以外的地方种植生长，包括内膜间质和上皮细胞在子宫腔以外部位的异位生长［1］，其发病机制尚不明了。本研究检测EM患者异位及在位子宫内膜组织、正常子宫内膜组织中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）的表达，以探讨MMP-2在EM发生发展中的作用及其临床意义。

　　1  资料和方法

　　1.1  一般资料 

　　选择2005年12月～2007年5月期间在广西田阳县人民及右江民族医学院附属医院就诊，经开腹手术后病理检查证实为EM的患者。其中异位内膜组织36例（异位内膜组），年龄(36.3±4.5)岁，增生期22例，分泌期14例。同时通过刮宫或切开手术取EM患者的在位子宫内膜组织共32例（在位内膜组），年龄(35.8±6.2)岁，增生期16例，分泌期16例。选择同期因子宫肌瘤行子宫切除术的22例正常子宫内膜组织作为对照（正常内膜组），年龄(36.1±5.8)岁，增生期12例，分泌期10例。所有病例均无内分泌和感染性疾病，术前3个月无激素史，手术均在增生期或分泌早期进行。三组年龄比较差异无显著性(P＞0.05)。

　　1.2  实验试剂 

　　兔抗人MMP-2单克隆抗体、SP免疫试剂盒和山羊血清、DAB显色试剂盒均购自深圳晶美生物工程有限公司。

　　1.3  标本制备
 
　　所有组织术后立即取材，经4%多聚甲醛溶液固定，石蜡包埋，5μm连续切片5张，1张行常规HE染色进行病理形态学观察，其余用于免疫组织化学染色。

　　1.4  免疫组织化学检测 

　　切片常规二甲苯脱蜡，梯度乙醇至水。采用St reptavidin Peroxdase Conjugated Method 免疫组化方法，即SP法进行免疫组织化学染色，实验操作严格按说明书进行。以0.01M PBS代替一抗作为阴性对照，以已知阳性标本为阳性对照。

　　1.5  结果判定 

　　MMP-2阳性信号为腺上皮细胞胞浆呈棕黄色着色，间质中也有表达。按［2］半定量的方法评定每一张标本：随机选取高倍镜(×400)下至少5个视野，计数阳性细胞的百分率，并按以下方法进行计分: 阳性细胞百分数为0%～4%者记为0分，5%～24%者记为1分，25%～49%者记为2分，50%～74%者记为3分，75%～100%者记为4分。阳性细胞免疫染色强度按如下方法计分: 无色为0分、浅黄色为1分、棕黄色为2分、棕褐色为3分；阳性细胞百分率评分和染色强度评分相乘产生每个病例的加权分数，即免疫组化染色评分=阳性细胞百分率评分×染色强度评分。0分为阴性(-)，1～2分为弱阳性(+)，3～4分为中等阳性(++)，4分以上为强阳性(+++)。

　　1.6  统计学方法 

　　应用SPSS11.0软件进行统计学处理，计数资料采用χ2检验。

　　2  结果

　　2.1  三组内膜中MMP-2的表达情况 

　　免疫组织化学检测结果显示，在正常内膜组、在位内膜组和异位内膜组中均可检测到MMP-2的表达。三组阳性率比较：异位内膜组高于在位内膜组和正常内膜组（P<0.05或0.01）；在位内膜组高于正常内膜组（P<0.05），见表1。表1  三组内膜中MMP-2的阳性率比较（略）

　　2.2  MMP-2的表达与月经周期的关系 

　　正常内膜组中，分泌期与增生期MMP-2表达较低，两者差异无显著性(P>0.05)；在位内膜组中，分泌期MMP-2表达强于增生期（P<0.05）；异位内膜组中，分泌期与增生期MMP-2表达较强，两者差异无显著性(P>0.05)，见表2。表2  MMP-2的表达与月经周期的关系（略）

　　3  讨论

　　EM病因和发病机制至今尚不完全清楚，目前内膜种植学说为大多数研究者推崇的理论，即脱落的内膜细胞经血逆流入腹腔并种植，完成粘附—侵袭—血管形成过程。

　　MMP是一锌离子依赖的中型蛋白酶家族，可以降解细胞外基质和基底膜成分，其活性可被TIMP和α-巨球蛋白抑制，MMP的活性调节在组织重建、炎症及肿瘤生长、侵袭、转移等过程中起重要作用［3］。子宫内膜细胞的侵袭与转移需要降解细胞外基质，其中MMP起重要作用。MMP-2又称明胶酶A，被活化的MMP-2可降解IV、V和X型胶原及纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、蛋白聚糖、弹性蛋白，并影响新生血管形成，调节细胞粘附，促使异位内膜细胞与腹膜接触，有利于种植。内异症的形成与MMP-2对细胞外基质和基底膜的降解密切相关［4］。目前的研究显示［5，6］，在EM患者的病灶组织中，异位内膜比在位内膜表达更高的MMP-2、MMP-3、MMP-9，同时MMP-3在异位病灶的表达不具有正常妇女在位内膜表达的周期性变化，而是呈持续性高表达。另外的研究则表明［7］，间质细胞中的MMP-2可能在EM的进展中起重要作用。Braundmeier等［8］从内膜重塑的角度来研究MMP，研究者用免疫组化和RT-PCR 的方法在异位和在位内膜中均检测到细胞外MMP诱导剂（EMMPRIN）的表达，同时用EMMPRIN来刺激子宫内膜成纤维细胞，发现有MMP-1、MMP-2的mRNA水平的升高，并发现EMMPRIN的mRNA水平在整个月经周期中随着雌二醇的变化而变化，认为EMMPRIN促进了子宫内膜成纤维细胞分泌MMP，从而介导内膜的重塑及异位内膜的形成。本研究采用免疫组织化学检测，结果显示：在正常内膜组、在位内膜组和异位内膜组中均可检测到MMP-2的表达，其阳性率分别为36.36%、65.63%和86.11%。三组阳性率比较：异位内膜组高于在位内膜组和正常内膜组，在位内膜组则高于正常内膜组（P<0.01或P<0.05）。此外，在MMP-2的表达与月经周期关系的研究中，正常内膜组分泌期与增生期MMP-2表达较低，而异位内膜组表达较强，但两组分泌期与增生期表达差异无显著性（P均>0.05）；在位内膜组分泌期MMP-2表达强于增生期（P<0.05）。
       
　　总之，EM的发病机制复杂，参与的细胞因子多种多样。有关EM血管生成的研究应进一步从分子水平和基因水平进行研究，以阐明其发病机制，也为从分子水平或基因水平EM提供理论基础。

【】
  　　［1］乐杰.妇产［M］.6版.北京:人民卫生出版社,2003：354.

　　［2］Krajewska M, Krajewski S, Epstein JL, et al. Immunohistochemical analysis of bcl-2, bax, bcl-X and mcl-1 expression in prostate cancers ［J］. Am J Pathol,1996,148(5)：1567-1576.

　　［3］齐漩,辛晓燕.基质金属蛋白酶及其抑制剂与子宫内膜异位症［J］.国外医学：妇幼保健分册,2002,13(1)：14-16.

　　［4］曲银娥,杨梅,王毅峰.基质金属蛋白酶-2和血管内皮生长因子在子宫内膜异位症中的表达［J］.妇幼保健,2007，22(20):2839-2841.

　　［5］Uzan C, Cortez A, Dufournet C, et al. Eutopic endometrium and peritoneal, ovarian and bowel endometriotic tissues express a different profile of matrix metalloproteinases-2, -3 and-11, and of tissue inhibitor metalloproteinases-1 and -2 ［J］. Virchows Arch, 2004, 445(6)：603-609.
　　
　　［6］Kaylon L, Bruner-Tran. Steroid and cytokine regulation of matrix metalloproteinase expression in endometriosis and the establishment of experimental endometriosis in nude mice ［J］. Clin EndocrinolMetab, 2002, 87(10)：4728-4791.

　　［7］Kim HO, Yang KM, Kang IS, et al. Expression of CD44s, vascular endothelial growth factor, matrix metalloproteinase-2 and Ki-67 in peritoneal, rectovaginal and ovarian endometriosis ［J］. Reprod Med, 2007, 52(3)：207-213.

　　［8］Braundmeier AG, Fazleabas AT, Lessey BA, et al. Extracellular matrix metalloproteinase inducer regulates metalloproteinases in human uterine endometrium［J］. Clin Endocrinol Metab, 2006, 91(6)：2358-2365.