反义ＣｌＣ-３寡核苷酸对ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ触发的Ｃａ２＋ 运动的影响
【摘要】 研究反义ＣｌＣ-３寡核苷酸对Ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ （ＴＧ）触发的Ｃａ２＋ 运动的影响。【方法】 在ＰＣ１２ 细胞中转染反义ＣｌＣ-３寡核苷酸，利用生物荧光影像分析系统测定胞浆Ｃａ２＋ 技术探讨ＣｌＣ-３寡核苷酸对ＴＧ触发的Ｃａ２＋ 运动的影响。【结果】 与对照组相比，反义寡核苷酸转染对ＴＧ触发的ＰＣ１２细胞静息［Ｃａ２＋］ｉ的Ｒａｔｉｏ值和Ｃａ２＋ 释放量的Ｒａｔｉｏ值无显著影响（Ｐ＞０．０５）。但使Ｃａ２＋ 内流量明显升高（Ｐ＜０．０５）。Ｃａ２＋ 池操纵性Ｃａ２＋ 通道（ｓｔｏｒｅ-ｏｐｅｒａｔｅｄ Ｃａ２＋ ｃｈａｎｎｅｌｓ， ＳＯＣＣ）阻断剂ＳＫ＆Ｆ９６３６５可以浓度依赖的抑制ＴＧ触发的ＰＣ１２细胞Ｃａ２＋ 内流，但与随义、正义寡核苷酸转染组相比， ＳＫ＆Ｆ９６３６５对反义转染组细胞Ｃａ２＋ 内流的抑制作用明显增强（Ｐ＜０．０５）。【结论】 ＣｌＣ-３蛋白参与ＴＧ触发的Ｃａ２＋ 池操纵的Ｃａ２＋ 内流（ｓｔｏｒｅ-ｏｐｅｒａｔｅｄ Ｃａ２＋ ｅｎｔｒｙ，ＳＯＣＥ），但对细胞静息钙水平及钙释放过程没有影响。
【关键词】 反义ＣｌＣ-３寡核苷酸 钙离子； Ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ 氯通道
Ａｂｓｔｒａｃｔ： 【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】 Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＣｌＣ-３ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ｃｈａｎｎｅｌｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｃａ２＋ ｍｏｖｅｍｅｎｔ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ （ＴＧ） ｉｎ ＰＣ１２ ｃｅｌｌｓ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ＣｌＣ-３ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ． 【Ｍｅｔｈｏｄｓ】 Ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｆｒｅｅ ｃａｌｃｉｕｍ （［Ｃａ２＋］ｉ ） ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ａｓ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｖａｌｕｅ （Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ３４０ ／ Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ３８０） ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｗｉｔｈ Ｆｕｒａ-２／ＡＭ ｐｒｏｂｅ． 【Ｒｅｓｕｌｔｓ】 Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ＰＣ１２ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｔｏ ＣｌＣ-３ ｃａｕｓｅｄ ａ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｉｎ ＴＧ-ｉｎｄｕｃｅｄ Ｃａ２＋ ｉｎｆｌｕｘ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈａｔ ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｃｅｌｌｓ， ａｎｄ ｃｅｌｌｓ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ， ｍｉｓｓｅｎｓｅ ｏｒ ｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ， ｗｈｅｒｅａｓ ｔｈｅ ［Ｃａ２＋］ｉ ａｔ ｒｅｓｔｉｎｇ ｌｅｖｅｌ ａｎｄ ａｔ ｐｅａｋ ｌｅｖｅｌ ｗｅｒｅ ｎｏｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｍｏｎｇ ａｌｌ ｇｒｏｕｐｓ（Ｐ＞０．０５）． ＳＫ＆Ｆ９６３６５， ａ ｂｌｏｃｋｅｒ ｆｏｒ ｓｔｏｒｅ-ｏｐｅｒａｔｅｄ ｃａｌｃｉｕｍ ｃｈａｎｎｅｌｓ （ＳＯＣＣ）， ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｔｈｅ Ｃａ２＋ ｉｎｆｌｕｘ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ １．０ ?滋ｍｏｌ／Ｌ ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ ｉｎ ＰＣ１２ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ａ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ-ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｍａｎｎｅｒ． Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＳＫ＆Ｆ９６３６５ ｏｎ Ｃａ２＋ ｉｎｆｌｕｘ ｗａｓ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｂｙ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ａｓ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ， ｓｅｎｓｅ ｏｒ ｍｉｓｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｏｔｉｄｅ． 【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】 ＣｌＣ-３ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ｃｈａｎｎｅｌｓ ｗａｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ＴＧ-ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｔｏｒｅ-ｏｐｅｒａｔｅｄ Ｃａ２＋ ｅｎｔｒｙ（ＳＯＣＥ）， ｂｕｔ ｈａｄ ｎｏ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ ｔｈｅ ［Ｃａ２＋］ｉ ａｔ ｒｅｓｔｉｎｇ ｌｅｖｅｌ ａｎｄ Ｃａ２＋ ｒｅｌｅａｓｅ ｆｒｏｍ Ｃａ２＋ ｓｔｏｒｅｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ＣｌＣ-３ ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ； Ｃａ２＋； Ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ； ｃｈｌｏｒｉｄｅ ｃｈａｎｎｅｌ
作为胞内重要的第二信使，Ｃａ２＋ 及其介导的Ｃａ２＋ 信号在体内参与细胞分泌、分化、增殖、收缩、凋亡等多种生理过程的调节。多种信号刺激可以引发胞内Ｃａ２＋ 水平的改变。胞内Ｃａ２＋ 池的Ｃａ２＋ 释放和胞外的Ｃａ２＋ 内流都可以引起［Ｃａ２＋］ｉ的升高；但胞外的Ｃａ２＋ 内流是引起［Ｃａ２＋］ｉ持续升高的关键因素。而细胞膜上不同种类的Ｃａ２＋ 通道是控制Ｃａ２＋ 内流的主要途径。细胞膜的Ｃａ２＋ 通道主要分为电压依赖性Ｃａ２＋ 通道（ｖｏｌｔａｇｅ-ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ Ｃａ２＋ ｃｈａｎｎｅｌｓ；ＶＤＣＣ）和受体操纵性Ｃａ２＋ 通道（ｒｅｃｅｐｔｏｒ-ｏｐｅｒａｔｅｄ Ｃａ２＋ ｃｈａｎｎｅｌｓ；ＲＯＣＣ）两大类［１］。ＶＤＣＣ是指能随着膜电位的变化而开闭的一类Ｃａ２＋ 通道。ＲＯＣＣ则是指与膜受体激活有关的Ｃａ２＋ 通道。在ＲＯＣＣ的钙内流中，与Ｃａ２＋ 池耗竭有关的Ｃａ２＋ 内流方式称之为Ｃａ２＋池操纵性Ｃａ２＋内流（ｓｔｏｒｅ-ｏｐｅｒａｔｅｄ Ｃａ２＋ ｅｎｔｒｙ， ＳＯＣＥ），其相应的Ｃａ２＋ 内流通道称为Ｃａ２＋ 池操纵性Ｃａ２＋通道（ｓｔｏｒｅ-ｏｐｅｒａｔｅｄ Ｃａ２＋ ｃｈａｎｎｅｌｓ，ＳＯＣＣ）［２，３］。多种因素参与对Ｃａ２＋ 内流的调节，近年来的研究显示， Ｃｌ－通道通过对膜极化状态的调节参与了ＶＤＣＣ、ＲＯＣＣ的开放过程。本室近年的研究也表明，Ｃｌ－通道也与ＳＯＣＣ的Ｃａ２＋内流有关。ＰＣ１２细胞属于兴奋性细胞，胞膜上存在ＲＯＣＣ及多种类型的ＶＤＣＣ［４］。研究显示，耗竭胞内Ｃａ２＋ 池在该细胞上也可以引起经ＳＯＣＣ的Ｃａ２＋ 内流［５］。Ｃｌ－通道是否参与此ＳＯＣＥ尚不清楚。本实验观察了反义ＣｌＣ-３寡核苷酸对ＴＧ触发的Ｃａ２＋ 运动的影响。
１ 材料和方法
１．１ 药品、试剂及仪器
ＲＰＭＩ １６４０、 ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ ２０００购于Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司。马血清、小牛血清分别购于Ｈｙｃｌｏｎｅ和杭州四季青公司。胰蛋白酶、ＨＥＰＥＳ、ｔｈａｐｓｉｇａｒｇｉｎ购于Ｓｉｇｍａ公司。Ｆｕｒａ-２／ＡＭ、牛血清白蛋白（ＢＳＡ）购自Ｂｏｒｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ公司。硫代磷酸化修饰的ＣｌＣ-３寡核苷酸片段由上海生物工程公司合成并纯化。
ＣＯ２培养箱（Ｆｏｒｍａ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，ＵＳＡ），倒置相差显微镜（重庆光学仪器厂），高速低温离心机（Ｈｅｒａｅｕｓ），生物荧光影像分析系统，影像捕获和处理用Ｍｅｔａｆｌｕｏｒ软件（美国Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ｉｍａｇｉｎｇ公司）。
１．２ 细胞培养及药物处理
ＰＣ１２细胞常规培养于含１００ ｍＬ／Ｌ马血清、５０ ｍＬ／Ｌ小牛血清，青霉素、链霉素各２５ ｋＵ／Ｌ的ＲＰＭＩ １６４０培养基，置于３７ ℃、饱和湿度、体积分数５％ ＣＯ２培养箱中培养。实验时细胞以７０％ ～ ９０％密度接种于Ｐｏｌｙ-Ｌ-Ｌｙｓｉｎｅ包被的３５ ｍｍ培养皿，接种２４ ｈ后细胞分别用５０ ｍｇ／Ｌ 的反义、正义、随义ＣｌＣ-３寡核苷酸及Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ２０００进行转染，转染４８ ｈ进行指标测定。
１．３ Ｆｕｒａ-２／ＡＭ荧光测定单细胞［Ｃａ２＋］ｉ变化
取正常及转染细胞，弃去培养液，用ＢＳＳ缓冲液（ｍｍｏｌ／Ｌ：ＮａＣｌ １３０．０， ＫＣｌ ５．０， ＭｇＣｌ２ １．０， ＣａＣｌ２ １．５，ＨＥＰＥＳ ２０．０，Ｇｌｕｃｏｓｅ １０．０，ｐＨ ７．４）冲洗１次，以Ｆｕｒａ-２／ＡＭ荧光染料（终浓度２ ?滋ｍｏｌ／Ｌ，用ＢＳＳ缓冲液配制）室温下避光负载３０ ｍｉｎ。恒温用生物荧光双波长影像分析系统进行荧光测定。激发波长为３４０和３８０ ｎｍ，发射波长为５１０ ｎｍ，采集数据的时间间隔为１ ｓ。用ＭｅｔａＦｌｕｏｒ软件自动分析每个细胞的荧光强度变化并记录，单个细胞内Ｃａ２＋浓度的变化以Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ３４０／Ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ３８０（Ｉ３４０／Ｉ３８０）的比值（Ｒａｔｉｏ值）来表示，此比值与细胞［Ｃａ２＋］ｉ变化成正相关。所有试剂在有效剂量范围内都经证明不产生荧光干扰。
１．４ 统计分析
结果用ｘ±ｓ表示，用方差分析进行统计判断。由ＳＰＳＳ１１．５软件完成。
激动剂对Ｃａ２＋ 释放的增强率（％）＝（加药后峰的Ｒａｔｉｏ值－静息Ｒａｔｉｏ值）／ 静息Ｒａｔｉｏ值×１００％
激动剂对Ｃａ２＋ 内流的增强率（％）＝（加药后平台的Ｒａｔｉｏ值－静息Ｒａｔｉｏ值）／ 静息Ｒａｔｉｏ值×１００％
阻断剂对Ｃａ２＋ 内流的抑制率（％）＝（加阻断剂后的Ｒａｔｉｏ值－加阻断剂前平台的Ｒａｔｉｏ值）／（加阻断剂前平台的Ｒａｔｉｏ值－静息Ｒａｔｉｏ值）×１００％
２ 结 果
２．１ 反义ＣｌＣ-３寡核苷酸对ＴＧ触发的ＰＣ１２细胞Ｃａ２＋ 运动的影响
２．１．１ 正常有钙液中，反义ＣｌＣ-３寡核苷酸对ＴＧ触发的ＰＣ１２细胞Ｃａ２＋运动的影响
在正常含钙液中，１．０ ?滋ｍｏｌ／Ｌ ＴＧ可引起［Ｃａ２＋］ｉ从静息状态上升至峰值（Ｃａ２＋ 释放相），随后维持在较高水平（Ｃａ２＋内流相）。未转染和转染了１０ ｍｇ／Ｌ空脂质体、５０ ｍｇ／Ｌ的随义、正义和反义寡核苷酸的ＰＣ１２细胞静息［Ｃａ２＋］ｉ的Ｒａｔｉｏ值和Ｃａ２＋ 净释放量的Ｒａｔｉｏ值相互间无显著性差异（ｎ＝３０， Ｐ＞０．０５）。各组细胞Ｃａ２＋ 内流量的Ｒａｔｉｏ值分别为０．８７９±０．０４２、 ０．８７６±０．０３６、 ０．８７６±０．０４０、 ０．８８１±０．０３８和０．８９４±０．０４６。Ｃａ２＋ 内流量分别增加９．２％±２．３％、 ９．２％±３．１％、 ９．３％±２．８％、 ９．２％±２．９％和１０．９％±２．４％，反义组与其它组相比Ｃａ２＋ 内流量有所升高（ｎ＝３０，Ｐ＜０．０５；图１，表１）。
２．１．２ 无钙液中，反义ＣｌＣ-３寡核苷酸对ＴＧ触发的ＰＣ１２细胞Ｃａ２＋ 运动的影响
在无钙液中，１．０ ?滋ｍｏｌ／Ｌ ＴＧ可引起［Ｃａ２＋ ］ｉ升高，随后降低到基线水平，复Ｃａ２＋ 后引起一持续Ｃａ２＋ 内流过程。未转染和转染了１０ ｍｇ／Ｌ空脂质体、５０ ｍｇ／Ｌ随义、正义和反义寡核苷酸的ＰＣ１２细胞Ｃａ２＋ 释放量相互间无显著性差异（ｎ＝３５，Ｐ＞０．０５）。Ｃａ２＋ 内流量分别为１１．９％±１．２％、 １２．０％±２．３％、 １１．８％±３．７％、 １１．９％±３．６％和２２．２％±４．３％。反义组与其它组相比，Ｃａ２＋内流量明显升高（ｎ＝３５，Ｐ＜０．０１；图２，表２）。
２．２ ＳＫ＆Ｆ９６３６５对反义ＣｌＣ-３寡核苷酸转染的细胞Ｃａ２＋内流的影响
为了进一步证实内源性ＣｌＣ-３氯通道蛋白表达改变对胞外Ｃａ２＋内流产生的影响，采用ＲＯＣＣ和ＳＯＣＣ的阻断剂ＳＫ＆Ｆ９６３６５，观察其对细胞Ｃａ２＋内流的作用。结果如表３所示，在未转染和转染了１０ ｍｇ／Ｌ空脂质体、５０ ｍｇ／Ｌ随义、正义和反义寡核苷酸的ＰＣ１２细胞上，５ ～２０ ?滋ｍｏｌ／Ｌ ＳＫ＆Ｆ９６３６５可以浓度依赖性地抑制１．０ ?滋ｍｏｌ／Ｌ ＴＧ引起的Ｃａ２＋内流，最大抑制率依次为４１．０％±９．１％、４１．１％±９．８％、４０．８％±８．０％、４１．６％±７．１％和４６．３％±７．４％，ＳＫ＆Ｆ９６３６５在反义组的抑制作用明显高于其它４组（ｎ＝３０， Ｐ＜０．０５）。
３ 讨 论
由Ｃａ２＋ 池耗竭引起的Ｃａ２＋ 内流一般认为是非兴奋性细胞Ｃａ２＋ 内流的主要途径。近几年来研究发现，多种兴奋性细胞也存在这种Ｃａ２＋ 内流方式。生理情况下，Ｃａ２＋ 池耗竭引发的ＳＯＣＣ开放由受体所介导，即细胞膜上与Ｇ-蛋白偶联的受体激活后活化磷脂酶Ｃ（ＰＬＣ），分解肌醇磷脂，产生第二信使ＩＰ３和二酰基甘油（ＤＡＧ）。ＩＰ３与肌浆网／内质网上的ＩＰ３受体结合，引起Ｃａ２＋ 池Ｃａ２＋ 释放，导致Ｃａ２＋ 池耗竭，使细胞膜上的ＳＯＣＣ开放。此外，研究表明内质网／肌浆网Ｃａ２＋-ＡＴＰａｓｅ选择性抑制剂ＴＧ能不可逆地抑制Ｃａ２＋-ＡＴＰａｓｅ，可以在不涉及受体激活和磷脂酰肌醇代谢的条件下直接因漏系统而耗竭Ｃａ２＋ 池，引起这种经ＳＯＣＣ的Ｃａ２＋ 内流。
本实验研究了内源性ＣｌＣ-３蛋白表达降低对静息钙及ＴＧ诱导的ＰＣ１２细胞Ｃａ２＋ 运动的影响。由于缺乏特异性的氯通道阻断剂，我们用反义ＣｌＣ-３寡核苷酸抑制内源性ＣｌＣ-３蛋白表达。 以往的研究结果显示［６］，５０ ｍｇ／Ｌ的反义寡核苷酸转染细胞，在转染后４８ ｈ可以明显降低内源性ＣｌＣ-３蛋白的表达。本次结果表明，在正常含Ｃａ２＋ 测定液中，ＣｌＣ-３寡核苷酸转染ＰＣ１２细胞后对静息钙及ＴＧ引起的Ｃａ２＋ 释放均无明显影响；而反义ＣｌＣ-３寡核苷酸转染使ＴＧ引起的Ｃａ２＋ 内流增加。提示，ＣｌＣ-３氯通道对静息Ｃａ２＋、Ｃａ２＋ 释放过程无影响，但可以影响经ＳＯＣＣ的Ｃａ２＋ 内流过程。在正常浓度的胞外Ｃａ２＋ 测定液中，ＴＧ触发的Ｃａ２＋ 释放往往伴随Ｃａ２＋ 内流过程，为了进一步观察ＣｌＣ-３氯通道对Ｃａ２＋ 内流的参与程度，实验在不含Ｃａ２＋并加有５０ ?滋ｍｏｌ／Ｌ ＥＧＴＡ的无Ｃａ２＋ 液中进行测定，结果与上相符，ＣｌＣ-３氯通道不参与ＴＧ引起的Ｃａ２＋ 释放过程，但可以明显影响Ｃａ２＋ 内流过程。ＳＫ＆Ｆ９６３６５是目前普遍应用的ＲＯＣＣ和ＳＯＣＣ阻断剂，对多种细胞受体操纵的Ｃａ２＋ 内流均有阻断作用。以其为工具药对ＴＧ引起的Ｃａ２＋ 内流的抑制实验也进一步说明ＣｌＣ-３氯通道对经ＳＯＣＣ的Ｃａ２＋ 内流过程的参与。
胞内Ｃａ２＋ 稳态的维持，是靠细胞膜上的钙通道、交换体及细胞膜和内质网／肌浆网上的钙泵共同完成的。胞外Ｃａ２＋ 内流和胞内 Ｃａ２＋ 池的Ｃａ２＋ 释放引起胞浆游离Ｃａ２＋ 浓度升高，可以通过激活胞浆膜、内质网／肌浆网上的Ｃａ２＋ 泵主动地将胞浆中的游离Ｃａ２＋ 转运出细胞或贮存到肌浆网／内质网的Ｃａ２＋ 池中，使［Ｃａ２＋］ｉ恢复到静息水平。本次实验结果显示ＣｌＣ-３蛋白表达水平的改变不影响静息Ｃａ２＋ 水平，只影响了ＴＧ触发的Ｃａ２＋ 内流过程，表明ＣｌＣ-３氯通道对Ｃａ２＋ 泵及转运系统无影响，也不影响胞浆内Ｃａ２＋ 池Ｃａ２＋ 释放和Ｃａ２＋ 池的功能，但它参与了Ｃａ２＋ 池的Ｃａ２＋ 释放和耗竭引起的胞外Ｃａ２＋ 内流过程。
近年来，本实验室对氯通道参与Ｃａ２＋ 运动的调节作了广泛研究。研究结果表明，氯通道阻断剂对不同刺激引起的经ＶＤＣＣ、ＲＯＣＣ、ＳＯＣＣ的Ｃａ２＋内流普遍有调节作用，并且在不同细胞上，参与Ｃａ２＋ 运动调节的氯通道种类和参与程度可能也不尽相同。由于缺乏特异性的氯通道阻断剂，尚不能确定哪些氯通道与多种Ｃａ２＋ 内流通路有关。在ＨＥＫ２９３细胞、脑血管平滑肌细胞上的研究结果显示，ＣｌＣ-３氯通道也参与了ＨＥＫ２９３细胞、脑血管平滑肌细胞经ＳＯＣＣ的Ｃａ２＋ 内流调控，但与本次实验结果不同的是，反义ＣｌＣ-３寡核苷酸转染抑制了内源性ＣｌＣ-３蛋白表达后，可明显抑制ＨＥＫ２９３细胞、脑血管平滑肌细胞经ＳＯＣＣ的Ｃａ２＋内流。此不一致的结果可能与不同组织细胞ＣｌＣ-３氯通道不同的细胞定位，及参与的不同的生理功能有关。研究表明，在血管平滑肌上，ＣｌＣ-３氯通道主要分布于细胞膜，与细胞容积的调节有关［７］。Ｃｌ－通道开放可以影响膜电位的极化状态，影响Ｃａ２＋ 内流；而在神经细胞，ＣｌＣ-３氯通道主要定位于核内体及囊泡上［８］，很可能作为一个胞内氯通道参与囊泡的酸化作用，其功能缺陷则使递质的摄取过程受到抑制，推测与兴奋性氨基酸介导的病理过程有关。这些差异提示在不同的组织、器官，ＣｌＣ-３氯通道对Ｃａ２＋ 运动的调节存在复杂的机制，有待于做深入的研究。
【】
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