宫颈癌与HLA等位基因DQB1*03、DR15的相关性研究
【Abstract】AIM： To investigate the relationship between the susceptibility to cervical cancer and HLADQB1*03 and DR15 alleles in Shaanxi Province. METHODS: The target DNA fragments of HLADQB1*03 and DR15 alleles (79 and 197bp respectively) were amplified by using polymerase chain reaction of sequence specific primers（PCR-SSP）in cervical cancer patients and healthy control in Shaanxi Province. RESULTS: The frequency of the DQB1*03 allele was significantly higher in cervical cancer patients than that in normal controls, while no significant difference was found in the frequency of the DR15 allele between the patient group and the control group. CONCLUSION: There may be some correlation between the development of cervical cancer and HLA-DQB1*03, and no correlation between the development of cervical cancer and HLA-DR15.
【Keywords】 cervix neoplasms；HLA antigens
【摘要】目的： 探讨我国陕西地区宫颈癌的发生与人类白细胞抗原（HLA）DQB1*03、DR15等位基因的相关性.方法： 采用序列特异性引物的聚合酶链式反应（PCRSSP）方法，扩增HLA等位基因DQB1*03、DR15的目的DNA片段（分别为79、197 bp），分析两对等位基因在陕西地区宫颈癌患者和正常人中分布频率的差异.结果： 45名宫颈癌患者组中DQB1*03等位基因频率显著高于50名健康对照组，DR15等位基因频率在两组中的分布无显著差异.结论： HLA等位基因DQB1*03可能与宫颈癌的发生具有相关性，DR15可能与宫颈癌的发生不存在关联.
【关键词】 宫颈肿瘤；HLA抗原
0引言
宫颈癌在全世界范围内已成为威胁女性生命的第二大恶性疾病，仅次于乳腺癌.已证实人乳头瘤病毒（human papillomavirus ,HPV）的感染是宫颈癌的重要致病原因，但并非所有感染HPV的妇女都为宫颈癌，因此认为其他因素在宫颈癌的发生、发展过程中也可能起着促进作用.因此我们选择HLA等位基因DQB1*03、DR15进行研究，探讨其在陕西地区妇女中的分布特征及对宫颈癌易感性的影响.
1对象和方法
11对象
宫颈癌患者组为西京妇产科经病检查确诊的宫颈癌患者45例，年龄30~74（平均464）岁；正常对照组为西京医院住院的非宫颈癌患者50例，年龄32 ~71（平均421）岁.
12方法
121基因组的提取酚氯仿三步法抽提研究对象外周血白细胞基因组DNA.
122序列特异性引物（SSP）参照Olerup等［1,2］设计合成DQB1*03、DR15等位基因序列特异性引物，引物序列如下： DQB1*03： 上游引物5′GAG AGG ACC CGG GCG GAG T3′，下游引物 5′CTC GCC GCT GCA AGG TCG T3′，扩增片段大小为79 bp；DR15： 上游引物5′TCC TGT GGC AGC CTA AGA G3′，下游引物5′CCG CGC CTG CTC CAG GAT3′；扩增片段大小为197 bp.
123特异性PCR扩增选人生长激素（hGH）的保护序列，扩增作内对照引物.引物序列为： 上游引物5′GCC TTC CCA ACC ATT CCC TTA3′，下游引物5′TCA CGG ATT TCT GTT GTG TTT C3′.扩增片段大小为429 bp.PCR反应总体积为25 μL；25 mmol/L dNTP 15 μL，25 mmol/L MgCl2 15 μL，Taq酶15 U，10×Buffer 25 μL，等位基因序列特异的及内参上下游引物各10 pmol/L，DNA模板20 μL，去离子水132 μL.混匀、瞬时离心，按如下程序扩增： DQB1*03反应体系：94℃预变性5 min后，94℃变性45 s，68℃退火30 s，72℃延伸30 s，循环30次后于72℃过延伸10 min.DR15反应体系： 94℃预变性5 min后，94℃变性45 s，60℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，循环30次后于72 ℃过延伸10 min.
124特异性扩增产物的检测PCR产物于15 g/L琼脂糖凝胶电泳，电压10 V/cm，时间20 min，电泳结束后，在紫外灯下观察并拍摄扩增产物电泳照片.
2结果
检测样本HLADQB1*03和DR15等位基因扩增产物电泳照片如Fig1、245例宫颈癌患者组HLADQB1*03基因频率为689%（62/90），50例正常对照组HLADQB1*03基因频率为340%（34/100），提示HLADQB1*03等位基因可能增加对宫颈癌的易感性，与宫颈癌的发生具有关联性； 宫颈癌患者组HLADR15基因频率为356 %（32 /90），对照组为310%（31/100），两组之间差异不大，提示DR15等位基因与宫颈癌之间可能不存在关联.
3讨论
HLAⅡ类基因与宫颈癌关系的研究目前主要集中于以下3组HLAⅡ类等位基因／单体型： ① DQB1*03等位基因（DQB1*0301，DQB1*0302和DQB1*0303）； ② DRB1*1501和DQB1*0602等位基因（这两等位基因存在连锁不平衡现象，因此常出现于同一单体型中）； ③ DRB1*13（由DRB1*1301－5等位基因组成）和 DQB1*0603（DRB1*1301 和DQB1*0603也存在连锁不平衡）.各种研究结果最一致的发现是DRB1*13和／或DQB1*0603对宫颈癌的保护性作用［3］.对DQB1*03和DRB1*1501／DQB1*0602等位基因与宫颈癌关系的研究结果则显示出一定的差异，不同种族人群甚至同一种族的研究结果可能不相同.Madeleine等［4］对美国妇女，Cuzick等［5］对英国妇女进行的研究报道了DQB1*03与宫颈癌呈正相关，但也有一些研究未发现有关联性［6-8］.对DRB1*1501／DQB1*0602的研究也未达成定论.这些不一致的研究结果可能是由于不同国家和种族的妇女的遗传特征不一样或患者选择标准不一致，检测方法等因素存在差异而造成的.
本研究对陕西地区妇女HLADQB1*03、DR15等位基因的分布特征作了初步探索，频率数值与欧美国家相比有差异，说明了HLA等位基因分布的种群多态性.研究结果支持HLA DQB1*03等位基因与宫颈癌的发生具有相关性这一结论，而未发现DR15等位基因与宫颈癌之间存在关联.但由于样本数量有限，结论仅具有意义.国外也有一些研究发现特定的HLAⅡ类等位基因与HPV感染阳性的宫颈癌呈正相关［9-11］，提示特定的HLAⅡ类等位基因通过影响机体对HPV抗原的免疫应答而增加宫颈癌患病的风险性.宫颈癌的发生是一个多因素多步骤作用的过程，高危HPV的感染在宫颈癌的发生过程中起着不可忽视的作用，而宿主自身的遗传因素对疾病的进展也有着决定性的影响.目前各种研究报告的结果不尽相同，说明影响宫颈癌发生的因素的复杂性，因此值得进一步对HLAⅡ类基因多态性和HPV感染在宫颈癌发生中的联合作用进行深入探讨.
【参考】
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