射频和自体肿瘤疫苗联合治疗肝癌临床研究

            作者：李荣 梅方雄 白瑞球 刘宁江 高焱明 巩平  

【摘要】目的：探讨射频（RF）和新城鸡瘟病毒（NDV）修饰自体肿瘤疫苗（ATV）联合肝癌效果。方法：治疗组28例进行RF联合ATVNDV治疗，对照组22例进行RF治疗。RF共治疗50例75个瘤体，其中3个瘤体8例，2个瘤体9例。术中切取肿瘤组织，进行免疫测定、病理检查，治疗组加作ATVNDV制备。根据瘤体大小设计射频治疗靶点，实施治疗。结果：RF治疗15d后75个瘤体57个完全坏死，12瘤体仅部分坏死，6例囊性变。两组治疗前AFP升高者治疗后降至正常。治疗组治疗后2月CD4+降低、NK、CD3+、CD4+/CD8+升高，生存率1、3、5年分别为72.2%、50.1%、40.4%，对照组为60.5%、43.6%、29.8%。结论：RF联合ATVNDV治疗肝癌瘤体缩小、AFP下降、免疫功能提高均较单纯RF治疗快，生存率提高，可能与ATVNDV应用延迟肿瘤复发有关。

    【关键词】肝肿瘤・射频・癌症疫苗

      The clinical study on hypatocellular carcinoma treatment with radiofrequency combined with autologous tumor vaccine modified Newcastle disease

    【ABSTRACT】Objective:To compare the therapeutic efficacy of radiofrequnecy(RF)combined with Autologous Tumor Vaccine modified by Newcastie Diseas(ATVNDV)on the hepatocarcinomar.Methods:50 cases of patients with hepatocarcinoma treated with the procedure in our hospital since 1999 were studied According to the hospitalization order,28 cases whose hospitalization order number is odd received RF combined with ATVNDV,22 cases whose hospitalization order number is even treated with RF only;There were 75 tumor bodies treated.There were 8 cases with 3 tumor bodies,9 cases with tumor bodies.In the operation,we cut enough tumor tissue for immunoassay and pathological examination.We produced ATVNDV additionally in the therapy group,designed the RF therapeutic target according to the tumor body size,then executived treatment.Results:After 15 days of RF therapy,57 tumor bodies were completely necrotic,12 bodies with partial necrosis,6 tumor bodies were cystic degeneration.The high alpha fetoprotein(AFP)levels decreased to normal in both groups.After 2 months,the levels of NK、CD3+、CD4+/CD8+ increased while CD4+ level decreased in the therapy group 1,3,5year survival rate were 72.3%,50.1%,40.4%,respectively,in the combined therapeutic group and 60.5%,43.6%,29.8%,respectively,in the control group.Conclusion:Compared with the only RF treatment group,the size of the hepatocarcinoma tumor body diminuted,the level of AFP decrease and the immunological function improve in the RF combined with ATVNDV group is faster.The survival rate in the RF combined with ATVNDV group is longer than that in the only RF therapy group,which may be associated with the ATVNDV delaying the recurence or regeneration of the tumor.

    【KEY WORDS】Liver neoplasms・Radiofrequency・Cancer vaccines    目前不能切除肝癌仍占相当比例，多采用各种姑息治疗方法。1999年我们采用射频（radiofrequency,RF）和新城鸡瘟病毒（Newcastle Disease Virus,NDV）修饰自体肿瘤疫苗（Autologous Tumor Vaccine,ATV）(ATVNDV)联合治疗肝癌，现报告如下。

    1  资料与方法

    1.1  一般资料  肝癌50例，男38例，女12例，年龄25~78岁，分为两组。治疗组28例，其中瘤体＜5cm 5例，5~10cm 15例，＞10cm 8例，进行RF联合ATVNDV治疗。对照组22例，其中瘤体＜5cm 6例，5~10cm 11例，＞10cm 5例，只进行RF治疗。50例共治疗75个瘤体，其中3个瘤体8例，2个瘤体9例，治疗组44个，对照组31个。肿瘤均不能切除，其中剖腹手术39例，腹腔镜手术11例。术中切取部分肿瘤组织，送实验室进行免疫测定、病理检查，治疗组制备ATVNDV。

    1.2  仪器和试剂  美国产RF2000TM射频发射仪，功率100W，频率500kHz。机与射频发射仪连接，内设射频功率发射、阻抗和时间反馈系统，以数字或曲线显示和控制时间、输出功率及阻抗变化，另配高清晰度超声仪。细胞因子抗体由Pharingbn公司提供。瘤苗制备液由医药生物技术协会科技部提供。

    1.3  方法  手术前和治疗后2月测肝功能、NK、CD3+、CD8+、CD4+/CD8+比值、AFP和彩色B超或CT、MRI。

    根据肿瘤大小设计射频治疗靶点，按肿瘤大小三维立体覆盖病变设计，在直视下将射频针穿刺置入肿瘤中心张开多电极，分次多点进行治疗。射频输出功率由20W每隔2min增加20W，加至90W治疗时间设定为15min，计算机自行探测组织阻抗达999时自动停止，在监视屏幕下观察治疗过程，可见围绕肿瘤的球形回声光团，回声光团应超过肿瘤边缘0.5cm。

    剖腹或腹腔镜手术切取肿瘤组织在无菌条件放液氮罐内送实验室制备疫苗。ATVNDV制备方法：取肿瘤组织1~2g剪成5mm3碎块，用100目钢网挤滤，混悬液离心，置5%CO2培养箱制备。接种100μl瘤苗于瓶中液体，37℃培养3d，检测无细菌生长可分装备用。RF后1周选择上肢前臂或三角区皮肤，三点注射，每点相距3~5cm。皮内一点约0.2ml，皮下两点约0.4ml，也可臀部皮肤注射。射频10d后静脉滴注环磷酰胺400mg进行免疫调动。免疫调动1周后开始第1次注射，每周1次，共4次。依病情及免疫学指标变化2~3月后可进行强化免疫，方法同上。

    1.4  统计处理  第四军医大学Splm软件，治疗前后数据比较用配对t检验。

    2  结  果

    2.1  两组治疗效果  两组治疗15d后，实时超声或CT检测病灶回声较治疗前不同程度增强，彩色多普勒血流现象能量图病灶内无血流信号，57个病灶完全坏死。增强CT/ MRI检查显示病灶较治疗前稍大，病灶周围肝组织有强化带，为治疗后肝组织炎性充血所致。治疗1月后病灶缩小，其中治疗组32个病灶完全坏死，4个病灶部分囊性变，8个病灶部分坏死；对照组25个病灶完全坏死，2个病灶囊性变，4个病灶部分坏死。两组病例均再次行治疗，病灶完全坏死。8例治疗完成后失访。生存率治疗组1、3、5年分别为72.2%、50.1%、40.4%，对照组为60.5%、43.6%、29.8%。

    2.2  两组AFP变化  治疗前后AFP变化见表1，NK、CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+变化见表2。 表1  两组治疗前后AFP变化治疗前

　　3  讨  论

    肝癌病人免疫功能低下以细胞免疫功能为主，因癌组织及宿主血清中存在某些可溶性抑制因子，能广泛地抑制杀伤细胞群NK等活性［1］，导致机体抗癌能力下降，从而有利于肿瘤。近年来国内外认为NDV感染机体可以诱导产生干扰素、白细胞介素、坏死因子等细胞因子，具有增强瘤细胞对淋巴细胞的黏附力，刺激淋巴细胞分化和改变肿瘤细胞的免疫原性等作用，同时NDV可以激活患瘤机体的免疫细胞，使免疫细胞发挥细胞毒性功能，防止肿瘤细胞生长、复发和转移，提高生存率，故可利用NDV感染灭活的肿瘤细胞制作瘤苗应用于临床。1983年，Cassel等［2］报告辅助治疗恶性黑色素瘤35例，35个月后90%无转移病变，而单纯手术患者48例，90%以上发生多个转移扩散。Batliwall等［3］报告，NDV溶瘤剂术后治疗恶性黑色素瘤患者，15年追踪观察生存率达55%，同时发现患者CD8+T淋巴细胞数量明显升高。抗肿瘤免疫主要是T细胞介导的细胞免疫，一般认为肿瘤患者免疫功能受到抑制表现为CD4+升高，CD4+/CD8+比例倒置。本组患者ATVNDV治疗后CD4+降低，CD8+和CD4+/CD8+比值明显升高。说明ATVNDV有改善肿瘤病人细胞免疫功能作用。RF治疗肝癌也是近年来应用的新技术，其工作原理是由非绝缘的电极流出的交流电进入组织，造成离子振荡摩擦生热、热能使组织变性引起凝固坏死，是一种安全、有效、微创性治疗方法［5］。而射频本身对机体功能干扰小，产生热能也可增强免疫力。本组资料提示RF联合ATVNDV治疗肝癌肿瘤缩小、AFP下降、免疫功能提高均较单纯RF治疗快。生存率也较单纯RF提高，这可能与ATVNDV应用延迟肿瘤复发或再发有关。

    参  考  文  献

    ［1］邢雪.肝癌患者免疫功能的临床研究［J］.中华实验外科杂志，1996，13：333.

    ［2］Cassle WA,Murray DR,Phillips H.A phaseⅡ study on the postsurgical management of stage Ⅱ malignant melanoma with a Newcasstle discase vilus oncolysaic［J］.Cancer,1989,52;856.

    ［3］Ratliwall FM,Bateman BA,Serrane D,et al.A 15year followup of AJCC stage 111 malignam melanoma patients treated postsurgically with Newcastle discase virus(NDA)oncolysaite and determination of alterations in the CD8 T cell repertoire［J］.Mol Med,1998,4:783.

    ［4］马宽生，董家鸿，陈敏,等.多电极射频治疗肝肿瘤的安全性和可靠性分析［J］.中华肝胆外科杂志，2001，7：198.

    ［5］樊薇，袁孟彪.超声引导射频治疗肝脏肿瘤［J］.普通外科进展，2003，6（2）：119.