Syk基因的表达与大肠癌关系的研究

          作者：万伟 吴小鹏 王建平 刘长兴

【摘要】目的：探索Syk基因的表达与大肠癌生成及转移的关系。方法：应用RTPCR技术检测40例大肠癌组织及癌旁正常组织中Syk基因的表达，通过正常组织与癌组织、有无淋巴结转移、浸润深度、临床分期、病理分级进行比较，观察Syk基因的表达与大肠癌生成及转移的关系。结果：40例大肠组织都有Syk基因的表达，而40例大肠癌组织中只有13例表达(32.5%)（χ2=40.755,P＜0.05）；28例有淋巴结转移的大肠癌组织，4例Syk基因表达（14.3%），12例无淋巴结转移，有9例表达（75.0%）（χ2=14.155,P＜0.05）。Syk基因表达与淋巴转移、浸润深度、临床分期有关，与年龄、肿瘤分化等级、大小无关。结论：Syk基因表达缺失与大肠癌生成及转移、浸润深度有关。

    【关键词】大肠肿癌・基因，Syk・病，临床

    Research on the expression of the Syk gene in human colon Carcinoma

    【ABSTRACT】Objective:To evaluate the effects of the Syk gene expression in human colonic carcinoma on tumor growth and metastasis.Methods:The expression of Syk gene in the 40 fresh freezed tissues of colonic carcinoma patients(tumor tissues,adjacent normal tissues) was detected by RTPCR technique.Results:All normal colonic tissues were detected the expression of the Syk gene.Compared to normal tissues,27 out of 40 colonic carcinoma did not show any detectable Syk expression.And there were significant difference between the two groups(χ2=40.755,P＜0.05);only 4 colonic carcinoma tissues in 28 patients with lymph node metastasis had the Syk gene expression.9 colonic carcinoma tissues in 12 patients without lymph node metastasis had the Syk gene expression.The Syk gene expression was negatively correlated to lymph node metastasis(χ2=14.155,P＜0.05).Furthermore,the expression of Syk gene was correlated with tumor,lymphnode metastasis ,and infiltration,but no correlation was observed with tumor size differentiation degree,clinical period.Conclusions:Normal colonic tissues have expression of Syk gene.The silencing of Syk gene is correlated to growth and metastasis of colonic carcinoma.The Syk gene expression deletion may play an important role in tumor infiltration and metastasis in colonic cancer.

    【KEY WORDS】Colonic neoplasms・Genes,Syk Pathology,clinical    Syk（Spleen tyrosine kinase）被认为是一种候选抑癌基因，该基因表达与恶性肿瘤发生有关，本研究探讨结直肠癌中Syk的表达情况及其影响因素。

    1  资料与方法

    1.1  标本来源  我院手术切除并经病理证实的结直肠癌标本40例，同时取距瘤体5cm外正常结肠组织，置-70℃保存。患者年龄36~78岁，平均58岁。

    1.2  总RNA的提取  采用Roche公司Trizol RNA提取试剂，按说明书提取总RNA。RT及PCR在PE2400型PCR仪上进行。引物：正义链：5’CATGTCAAGGATAAGAACATCATAGA3’14721497=26bp,反义链：5’AGTTCACCACGTCATAGTAGTAATT3’19611985=25bp，扩增片段为514bp。甘油醛3磷酸脱氢酶（GAPDH）作内对照，GAPDH引物正义链为：5’ACCCCCACTGAAAAAGATGA3’，反义链为：5’CAAAACGTCATAGTAGTAATTG3’，扩增片段为115bp。取5.6μl总RNA，采用逆转录酶MMLV按20μl体系42℃逆转录60min,75℃5min灭活MMLV酶。PCR反应系统：总体积25.0μl。10xbuffer 2.5 μl,MgCl22.5μl,dNTP2.0μl，引物1、2各0.25μl,TaqDNA酶0.3μl,RT反应产物5.0μl,三蒸水12.2ml。94℃预变性5min,94℃变性40s，55℃退火40s，72℃延伸1min，30个循环后72℃延伸5min。

    PCR产物于1.5%的琼脂糖凝胶电泳，于紫外分析仪下分析结果。

    1.3  统计学分析  应用SPSS 10.0统计分析软件包，用χ2检验分析不同组别Syk基因表达的差异，P＜0.05为有统计学意义。

    2  结  果

    2.1  Syk基因在结直肠癌组织和正常组织中表达  见表1和图1。表1  Syk 基因在结直肠癌和正常组织中的表达分类

    2.2  Syk基因表达与临床病理特征的关系  见表2。Syk基因表达与肿瘤临床分期、淋巴结转移、浸润深度有关，与年龄、肿瘤大小、病理分级无明显关系。表2  40例结直肠癌Syk基因的表达与临床病理特征病理特征

　　3  讨  论

    Syk是近来较受关注的抑癌基因，一些研究表明Syk的表达与多种细胞功能及恶性肿瘤的发病机制有关，是控制多种细胞生理功能的关键分子［1］。

    Syk广泛表达在造血细胞、淋巴细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞上的蛋白质酪氨酸激酶，长期以来一直作为信号传导过程中一个影响因子而被广泛研究。Syk基因的表达缺失会致T、B淋巴细胞活化障碍，失去了对异化细胞的监测作用，从而导致肿瘤的形成和转移［2，3］。

    本研究表明，Syk基因在结直肠正常组织中表达率高于结直肠癌组织，说明Syk基因的表达缺失可能与结直肠癌的发生有关，与Coopman的研究结果相似，他们用RTPCR法检测到正常乳腺组织中有Syk基因的表达，而浸润性乳腺癌组织中没有Syk基因的表达。Sada等认为Syk是一种候选抑癌基因，Syk的表达缺失会致免疫细胞发育、成熟障碍，重者会导致重症联合免疫缺陷病（SCID），由于机体免疫细胞的成熟障碍，机体的免疫监测力下降，对突变、异常增生的细胞失去免疫力，从而导致肿瘤易发［4，5］。

    Coopman等研究认为，Syk基因可能有抑制恶性肿瘤转移的作用，我们研究证实了这一点，本组25例有淋巴结转移的结直肠癌组织中只有3例Syk基因表达，远低于无淋巴结转移组，浸润深度为全层的结直肠癌组织Syk基因表达率低于粘膜下、深肌层，表明Syk基因的表达可能与结直肠癌的浸润、转移、恶性表形有关。

    肿瘤组织Syk基因表达缺失、水平低下的原因尚不清楚，Syk基因的沉寂有无其它基因（癌、抑癌基因）、生物因子的参与，还有待进一步研究。Syk在结直肠癌中的作用机制、表达缺失的原因以及Syk如何抑制肿瘤细胞侵袭生长与转移的具体机制等尚不清楚，Syk基因的导致结直肠癌的易发还是结直肠癌发生导致Syk基因的缺失仍不清楚。近来的研究认为，Syk是内皮细胞生长的重要调控因素，非受体型蛋白酪氨酸激酶在结直肠癌及其他肿瘤的生成、转移过程中的作用尚需进一步探索，以明确Syk的信号传导途径，为将来防治结直肠癌及其他肿瘤提供了新的分子学靶位。

    参  考  文  献

    ［1］GoodmanPA,JuranaB,WoodCM,et al.Genomic studies of the spleen protein tyrosine locus reveal a complex promoter structure and several genetic variants［J］.Leuk Lymphoma,2002,43:16271635.

    ［2］Goodman PA,Wood CM,Vassilev A,et al.Spleen tyrosine kinase(Syk) deficiency in childhood proB cell acute lymphoblastic leukemia［J］.Oncogene,2001，20：39693978.

    ［3］Zhu D,Tibbles H,Vassilev A,et al.SYK and LYN mediate Bcell receptorindependent calciuminduced apoptosis in DT40 lymphoma Bcells［J］.Leuk Lymphoma,2002,43:21652170.

    ［4］Sada K,Takano T,Yanagi S,et al.Structure and function of Sykproteintyrosine kinase［J］.J Biochem(Tokyo),2001，130：177186.

    ［5］Djeu J,Jiang K,Wei S.A view to a kill:signals triggering cytotoxicity［J］.Clin Cancer Res,2002,8:636640.