KGF在乳腺癌的表达与临床意义

         作者：王秀梅 黎莉 郝静 张芳 王妍 刘友德

【摘要】目的：探讨KGF蛋白在人乳腺癌的表达与意义，与临床病理因素及生物学指标的相关性。方法：采用免疫组化方法检测KGF在63例乳腺癌组织中的表达，并与正常乳腺组织对照。结果：63例乳腺癌组织中34例肿瘤细胞表达KGF（54.0%），正常乳腺上皮细胞未表达（P＜0.01），在乳腺癌间质细胞和正常乳腺组织间质细胞表达率分别为34.9%和16.7%（P＞0.05）。其在肿瘤细胞中的表达与低分化相关，与ER、PR呈负相关，与Ki67呈正相关，与Ki67的协同表达与淋巴结转移正相关。结论：KGF在乳腺癌肿瘤细胞的表达可能促进乳腺癌的发生，并且与低分化、预后不良有关。

    【关键词】角质细胞生长因子・乳腺肿瘤・病，临床

     Expression of KGF in human breast cancer and its clinical significance

     【ABSTRACT】Objective:To investigate expression of keratinocyte growth factor(KGF)and its clinical significance in human breast cancer and their correlations with clinicopathological features and biomarkers.Methods:The expression of KGF in 63 cases of breast cancer and 30 cases of normal breast tissue were detected by immunohistochemistry.Results:Of the 63 cases of breast cancer,KGF was expressed in tumor cells in 34 cases(54.0%).While it was not detected in epithelial cells in normal breast tissue.The difference between them had remarkably statistical significance.The expression rate of KGF in mesenchymal cells in breast cancer and normal breast tissue was 34.9% and 16.7%.The difference between them was not remarkable.The expression of KGF in tumor cells had correlation with low differentiation degree,had a negtive correlation with ER and PR and a positive correlation with Ki67.The coexpression of KGF and Ki67 had a positive correlation with lymph node metastasis.Conclusion:The expression of KGF in tumor cells was possibly involved in the development of breast cancer,and had correlations with low differentiation degree and bad prognosis.

    【KEY WORDS】Keratinocyte growth factor・Mammary neoplasms・Pathology,clinical

    近年来发现，角质细胞生长因子（keratinocyte growth factor,KGF）与癌症如肺癌［1］、乳腺癌［2，3］、卵巢癌［4］、前列腺癌［5，6］、结直肠癌［7］、宫颈癌［8］的发生发展密切相关。已证实［2］重组人KGF以剂量依赖模式明显地刺激正常乳腺和乳腺癌上皮细胞的增生，鼠成纤维细胞来源的KGF可促进ER（+）乳腺癌细胞（MCF7和T47D）增生和迁移［3］。本实验采用免疫组化的方法检测63例乳腺癌组织中KGF的表达以及其表达与ER、PR、CerbB2、Ki67表达的相关性，结合临床病理因素，分析其临床意义。

    1  资料与方法

    1.1  标本来源  山东大学齐鲁经病理检查确诊的乳腺癌63例，均为女性。年龄29~82岁，中位年龄49岁。Ⅰ期19例，Ⅱ期37例，Ⅲ期7例。浸润性导管癌44例，浸润性小叶癌7例，粘液腺癌2例，导管内癌8例，小叶原位癌2例。组织学分级采用Nottingham改良方案，低分化、中分化和高分化分别为9例、32例、22例。30例正常乳腺组织作为对照。

    1.2  主要试剂  KGF抗体（原液）购自美国SantaCruze公司，ER、PR、CerbB2、Ki67抗体（工作液）、SP免疫组化试剂盒及DAB显色试剂盒均购自北京中杉公司。

    1.3  检测方法  组织标本常规石蜡包埋，切片，烤片。SP免疫组织化学染色方法，按试剂盒说明进行染色，DAB显色，苏木素复染。用已知阳性切片作阳性对照，对PBS代替一抗作阴性对照。

    1.4  结果判断  每张切片随机取10个高倍视野，每个视野观察100个细胞，阳性结果呈棕黄色或棕褐色颗粒，以阳性细胞比例的平均值定义为该肿瘤的阳性细胞百分比。KGF阳性细胞为细胞的胞质呈棕黄色，其比例在10%以上为阳性。ER、PR、Ki67阳性细胞为细胞核呈棕黄色，CerbB2阳性细胞为膜着色，以阳性细胞＞10%计作阳性。

    1.5  统计学处理  采用SPSS12.0 for Windows 统计软件包进行数据处理，采用卡方检验和Spearman相关分析。

    2  结  果

    2.1  KGF在乳腺癌及正常乳腺组织的表达  63例乳腺癌组织中34例呈阳性表达，阳性率54.0%（图1A）；30例正常乳腺组织中上皮细胞均不表达，阳性表达率差异有统计学意义（P＜0.01）。KGF在乳腺癌组织间质细胞的表达率为34.9%(图1B），在正常乳腺组织间质细胞为16.7%，两者差异无统计学意义（P＞0.05）。

    2.2  KGF在肿瘤细胞的表达与临床病理因素的关系  KGF在乳腺癌肿瘤细胞中的表达与患者的年龄、肿瘤大小、浸润程度、淋巴结转移及TNM分期均无明显相关（P＞0.05），与分化程度呈显著负相关（P＜0.01）。见表1。表1  KGF在肿瘤细胞中的表达与临床病理因素的关系临床病理

　　2.3  KGF在肿瘤细胞的表达与ER、PR、CerbB2及Ki67的关系  KGF在肿瘤细胞的表达与ER、PR表达呈负相关（P＜0.05），与CerbB2表达无明显相关（P＞0.05)，与Ki67表达呈正相关（P＜0.05）。见表2。表2  KGF在肿瘤细胞中的表达与生物学指标的关系生物学指标

　　2.4  KGF在肿瘤细胞表达与ER或Ki67的协同表达与淋巴结转移的关系  KGF在肿瘤细胞表达与ER的协同表达与淋巴结的转移无明显相关（P＞0.05），与Ki67的协同表达与淋巴结的转移呈正相关（P＜0.05）。见表3。表3  KGF在肿瘤细胞的表达与ER或Ki67的协同表达与淋巴结转移的关系淋巴结转移

　　3  讨  论

    KGF是在1989年由Rubin等人从人胚胎性肺成纤维细胞的生长培养液中分离出来的，KGF的cDNA序列表明它属于成纤维细胞生长因子（FGF）家族，即FGF7［9］。KGF来源于间质细胞，与上皮细胞表面KGFR特异性地结合，以旁分泌的方式刺激上皮细胞有丝分裂。间质细胞和上皮细胞的这种相互作用参与多种组织、器官如皮肤、胃肠、呼吸道、生殖系统的形成、发育及其预防与修复损伤［10，11］。诸多实验结果显示，KGF表达与肿瘤的发生发展存在密切关系，是影响预后的因素之一，寻找和探讨乳腺癌的预后因素和复发风险，是提高乳腺癌疗效的重要环节之一。本实验用免疫组化方法证实KGF在部分乳腺肿瘤细胞胞质中表达，与Tamaru［12］的报道符合，而正常乳腺上皮细胞无表达，符合KGF刺激上皮细胞分裂增生的推理，以及作为影响预后和复发风险的因素之一。

    本实验KGF在乳腺癌组织间质细胞与正常乳腺组织间质细胞的表达率无显著性差异，结合KGF在乳腺癌细胞中 高表达与正常乳腺上皮的不表达，推测在正常的乳腺组织KGF以旁分泌的方式发挥作用，而在乳腺癌组织中KGF自分泌和旁分泌同时存在，提示乳腺癌的发生发展在一定程度上与KGF的自分泌有关。

    KGF在肿瘤细胞的表达与肿瘤细胞的分化程度呈显著负相关，分化程度越差，KGF的表达率越高，与在喉癌［13］、非小细胞肺癌［14］的研究结论一致。与ER、PR的表达呈负相关（P＜0.05），提示肿瘤细胞表达KGF的患者预后较差。KGF的表达与Ki67的表达呈正相关（P＜0.05），与Y Zhang［2］等体外实验证实KGF可促进乳腺癌细胞增生一致，此外KGF与Ki67的协同表达与淋巴结的转移呈正相关，提示预后较差。体外实验显示鼠成纤维细胞来源的KGF［3］和重组人KGF［14］可促进ER（+）乳腺癌细胞增生和迁移，本实验KGF与ER的协同表达与淋巴结转移无明显相关。

    本实验证实了KGF蛋白在乳腺癌肿瘤细胞胞质中表达，推测乳腺癌的发生可能与KGF的自分泌有关，而且KGF在乳腺癌肿瘤细胞的表达与低分化、预后不良有关。因此临床上检测KGF表达情况有利于乳腺癌分化程度及转归的评估，KGF及其受体有可能成为新的靶点，为预防转移和改善预后提供指导。

    参  考  文  献

    ［1］Yamayoshi T,Nagayasu T,Matsumoto K,et al.Expression of keratinocyte growth factor/fibroblast growth factor7 and its receptor in human lung cancer:correlation with tumour proliferative activity and patient prognosis［J］.J Pathol,2004,204(1):110118.

    ［2］Zhang Y,Sugimoto Y,Kulp SK,et al.Estrogeninduced keratinocyte growth factor mRNA expression in normal and cancerous human breast cells［J］.Oncol Rep,1998,5(3):577583.

    ［3］Nguyen TN,Zang XP,Pento JT.Keratinocyte growth factor stimulates the migration and proliferation of breast cancer cells in a culture wounding model［J］.Pharmacol Res,2002，46（2）：179183.

    ［4］Parrott JA,Kim G,Mosher R,et al.Expression and action of keratinocyte growth factor (KGF) in normal ovarian surface epithelium and ovarian cancer［J］.Mol Cell Endocrinol,2000,167(12):7787.

    ［5］Crescioli C,Maggi M,Luconi M,et al.Vitamin D3 analogue inhibits keratinocyte growth factor signaling and induces apoptosis in human prostate cancer cells［J］.Prostate,2002,50(1):1526.

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    ［7］Watanabe M,Ishiwata T,Nishigai K,et al.Overexpression of keratinocyte growth factor in cancer cells and enterochromaffin cells in human colorectal cancer［J］.Pathol Int,2000,50(5):363372.

    ［8］Kurban G,Ishiwata T,Kudo M,et al.Expression of keratinocyte growth factor receptor (KGFR/FGFR2Ⅲb) in human uterine cerivical cancer［J］.Oncol Rep,2004,11(5):987991.

    ［9］Rubin JS,Osada H,Finch PW,et al.Purification and characterization of a newly identified growth factor specific for epithelial cells［J］.PNAS,1989,86(3):802806.

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    ［14］刘领，笪冀平，孙春荣.KGF在人NSCLC中的表达及意义［J］.中国癌症杂志，2004，14（3）：234.