蛋白芯片检测肿瘤标志物的临床应用
作者：范公忍, 任永强, 邓 涛,陈天宝,胡大荣 /
【关键词】 恶性肿瘤；肿瘤标志物; 蛋白芯片; 检测
早期诊断与早期是防治肿瘤与降低死亡率的最有效方法。寻找具有早期诊断价值的肿瘤标志物（TM）长期以来为人们所关注。生物芯片具有可并行检测多种肿瘤标志物的特点；为探讨其在临床肿瘤中检测上的价值。本文应用上海数康生物有限公司新开发的HD?2001A型生物芯片检测仪和深圳威康生物蛋白芯片试剂对168例健康体检者和211例已知的各期各种肿瘤患者进行检测。追踪观察了36例肿瘤患者手术前后血清中的肿瘤标志物，现将结果报告如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料
本组恶性肿瘤患者211例，男126例，女85例，中位年龄18～84岁，临床分期II～IV期，以手术所见和病理检验结果为诊断各类肿瘤金标准;健康对照组168例，其中男96例，女72例，中位年龄23～69岁，为我院健康体检者各项化验指标均正常。
1.2 标本收集
空腹采集静脉血2ml,不抗凝;1 000r/min, 离心5min;取血清转移至另一干净的EP管内放置-20℃冰箱内保存,一周内统一检测。
1.3 仪器与试剂
采用HD?2001A生物芯片检测仪（上海数康生物有限公司产品）主要包括控制器和器，HDC?12/48型肿瘤标志物蛋白芯片试剂购自深圳威康生物有限公司，操作按诊断系统说明书进行。
1.4 结果判定
按照试剂盒使用说明书，检测项目及正常值范围确定为: AFP<20μg/L,CEA<5μg/L,NSE<13μg/L,CA125<20ku/L,CA153<35ku/L,CA 242<20g/L,CA 19?9<20Ku/L,PSA<5μg/L,free?pSA<1ng/L,ferritin<219μg/L,β?HCG<3 Iu/L HGH<7.5μg/L。
1.5 统计学处理
检验结果以均数±标准差表示，采用t检验和χ2检验，P<0.05为有显著性意义之界值。
2 结果
2.1 蛋白芯片检测临床常见肿瘤的检测例数和阳性率
肝癌41例（87.8%）、肺癌35例（80.0%）、胃癌46例（80.4%）、结肠癌19例（84.2%）、食道癌40例（22.5%）前列腺癌12例（66.7%）乳腺癌7例（71.4%）、卵巢癌3例（66.7%）、胰腺癌3例（100.0%）、胆囊癌5例（80.0%），蛋白芯片检测肿瘤患者有385个数据超过临界值； 健康对照组仅有6 个数据超过临界值。
2.2 蛋白芯片检测结果与病理诊断结果比较
经χ2检验蛋白芯片检出例数少于病理诊断（χ2=12.36，P<0.01），两种方法的符合率为96.32%，芯片法对肿瘤标志物的敏感性为95.87%,特异性为92.11%。
2.3 36例原发性肝癌患者手术前后及转移复发相关指标检测结果比较
术后7种肿瘤相关标记物水平明显低于手术前(P<0.05)，有显著性差异；而当术后转移复发时,其检测结果则于术前比较差异无显著性(P>0.05)。
2.4 精密度检验
同一标本在同一条件下做20次平行测定，其批内误差，CV值为1.72%～3.85%。将20个不同批次的内标数据统计分析计算批内误差求其变异系数值, CV值为3.47%～6.37%。
3 讨论
肿瘤标志物在临床上已应用了多年，尽管为肿瘤的诊断和疗效观察起了很大的作用，但在应用过程中，单指标检测存在着特异性不强、阳性率低等不足。为了提高诊断的准确性，临床上常将几项相关的标志物组成联合标志物检测谱，同时对某一肿瘤进行检测，以提高肿瘤诊断的准确性[1，2]。蛋白质芯片是近年来在生命领域中迅速起来的一项高新技术，它能同时对12种肿瘤标志物进行检测。该系统原理是基于双抗夹心法的化学发光检测方法，在固相基质上吸附有包被12种肿瘤标志物单克隆抗体，捕捉被检者血清中对应的肿瘤标志物，然后结合第二代抗体（携带有示踪标记物），通过催化化学反应产生光信号，用配套的生物芯片阅读仪读取光信号，对肿瘤标记物含量进行定量检测[3，4]。本文对211例常见肿瘤患者血清样本中的肿瘤标志物含量进行了检测分析,结果显示:该系统对肝癌的诊断率为87.8%, 对肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌及胆囊癌的诊断率均达到80%以上；比较蛋白芯片与病理诊断两种方法的符合率为96.32%(χ2=12.36, P<0.01)。蛋白质芯片法对肿瘤标志物的敏感性为95.87%, 特异性为92.11%。与以往报道基本一致[5]。初步研究结果显示该系统对各种肿瘤的诊断和效果的评价有一定的帮助。
本文还追踪观察了36例原发性肝癌患者手术前后相关肿瘤标志物水平的变化。肿瘤切除后,其标志物水平随之降低,术后7种肿瘤相关标记物水平明显低于手术前(Ｐ<0.05)有显著性差异；而当术后转移复发时,其检测结果则于术前比较差异无显著性。结果提示，动态监测肿瘤标志物对肝癌术后的复发和预后具有重要意义。
肿瘤标志物是肿瘤组织和细胞由于癌基因或抑癌基因和其他肿瘤相关基因异常表达所产生的抗原或生物活性物质,它反映了肿瘤的发生发展过程及肿瘤相关基因激活或失活程度，故检测血清中的相关特异性标志物有可能对肿瘤作出早期诊断[6，7]。蛋白芯片联合检测多种肿瘤标志物，所用标本量少，费用低，且可同时完成十多种实体肿瘤、多个肿瘤标志物检测的优点[8]。本文对我院211例住院肿瘤患者检测结果表明蛋白芯片检测具有较高的阳性检出率，对恶性肿瘤的早期诊断具有重要价值。
【文献】
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