荷移分光光度法测定卡那霉素
【摘要】 研究了卡那霉素与茜素红的荷移反应，测定了荷移络合物在不同条件下的吸光度值，确定了最佳条件和络合物的组成。荷移络合物的最大吸收波长是516nm，表观摩尔吸光系数为9.5×103L/(mol·cm)，卡那霉素浓度在1.0～20mg/L范围内与其吸光度值呈线性关系，检出限为0.7mg/L。此法用于硫酸卡那霉素的测定，得到满意结果。
【关键词】 分光光度法 荷移反应 卡那霉素 茜素红
Spectrophotometric determination of kanamycin sulfate based
ABSTRACT The content of kanamycin sulfate was determined by charge tranfer reactions between kanamycin sulfate and alizarin red. The optimum condition and ratio of the complex component were decided. Beer′s law was obeyed in the range of 1.0～20mg/L of kanamycin sulfate. The apparent molar absorptivity of complex at 516nm was 9.5×103L/(mol·cm). The relative standard deviation was 2.7% (n=5), the recovery was in the range of 95.5%～98.1% and the detection limits was 0.7mg/L. The method was applied to the determination of kanamycin sulfate in tablets with satisfactory results.
KEY WORDS Spectrophotometry; Charge transfer reaction; Kanamycin sulfate; Alizarin red
卡那霉素是一种临床上常用的氨基糖苷类抗生素。目前，此类抗生素的测定方法有分光光度法［1］、瑞利散射光谱法［2］和液相色谱法［3，4］等，利用荷移光度法测定卡那霉素未见报道。本文研究了卡那霉素与茜素红发生荷移反应的条件，建立了荷移光度法测定卡那霉素的新方法，并用于硫酸卡那霉素的测定，得到满意结果。
1 实验部分
1.1 主要仪器与试剂
722型分光光度计为上海精密仪器有限公司产品；PHS?3T(0.01级)数显酸度计为上海天达仪器有限公司产品；AB204?N分析天平由Mettler?Toledo Group生产。
卡那霉素(标准品)由药品生物制品检定所提供。称取卡那霉素标准品0.0584g配制浓度为1.0×10-3mol/L的储备液，使用时稀释。茜素红(AR)由上海化学试剂采购供应站提供，配置茜素红溶液浓度为2.8×10-4mol/L。
1.2 实验方法
移取适量(≤20mg/l)的卡那霉素溶液于10ml比色管中，加茜素红溶液4.0ml，摇匀后，以试剂空白作参比，用1cm比色管在516nm处测量吸光度。
2 结果与讨论
2.1 吸收光谱
按实验方法1.2，分别测定茜素红和卡那霉素?茜素红络合物的吸光度值，荷移络合物的最大吸收波长为516nm，茜素红的最大吸收波长为423nm(图1)。
2.2 反应时间的影响 1：茜素红(2.8×10-4mol/L)；
2：茜素红+卡那霉素(1.0×10-3mol/L)
图1 吸收光谱
在7支10ml比色管中分别加入相同体积的茜素红4.0ml和卡那霉素(C=1.0×10-3mol/L)2.0ml，摇匀，分别放置不同时间，测吸光度值。结果表明，荷移络合物吸光度值基本不随时间变化，并且可以稳定24h以上，因此配制好溶液后可直接测定。
2.3 温度的影响
在10ml具塞比色管中加入茜素红与卡那霉素溶液，振荡摇匀，放置于不同温度的水浴锅中，加热30min。取出后以流水冷却使反应终止，分别测定其吸光度值。结果表明，吸光度值随着温度变化的幅度不大，所以选择室温下测定。
2.4 溶液酸度的影响
在混合体系分别加入不同量0.1mol/L的氢氧化钠溶液和盐酸溶液，发现随着酸碱的加入，吸光度不断减小。实验条件下测得络合物溶液的pH为6.46时效果最好。
2.5 试剂用量的影响
在11支具塞比色管中分别加入1.0ml的卡那霉素(C=1.0×10-3mol/L)和不同体积的茜素红C=2.8×10-4mol/L)溶液，另取1支比色管加入2.0ml卡那霉素溶液和1.0ml茜素红，振荡摇匀后测络合物的吸光度值。结果表明，随着茜素红体积的加大，络合程度不断加强，当卡那霉素的量大于茜素红的体积时，吸光度值降低幅度最大。因此，茜素红用量必须大于卡那霉素的量才能完全络合。本试验选择茜素红用量为4.0ml。
2.6 溶剂的影响
分别用40%的甲醇，75%的乙醇作溶剂配置浓度为C=1.0×10-3mol/L的卡那霉素溶液，比较采用水、甲醇和乙醇三种不同溶剂时络合物的吸光度值，结果表明，甲醇作溶剂不理想，乙醇与水作溶剂时络合物的吸光度值变化不大，所以选重蒸水作溶剂。2.7 络合物组成的测定
茜素红与卡那霉素发生荷移反应，茜素红是受体，卡那霉素是电子给体，用等摩尔连续变化法确定其荷移络合物的组成比为1∶1。结果见图2。
2.8 工作曲线
在最佳条件下绘制工作曲线，卡那霉素浓度在1.0～20mg/L范围内与吸光度成线性关系，其线性回归方程为A=0.62C-0.0036，相关系数r=0.9981，表观摩尔吸光系数为9.5×103L/(mol·cm)。当卡那霉素浓度为20mg/L时，5次测定的相对标准偏差为2.7%。
3 样品测定
取标示量为0.1g/ml的硫酸卡那霉素注射液1支(2ml)，在100ml容量瓶中定容，再取该溶液10ml于100ml的容量瓶中，稀释至刻度备用。
取适量上述试样溶液于10ml的比色管中，加茜素红4.0ml，用重蒸水稀释至刻度，摇匀后以试剂空白为参比测吸光度，同时用标准加入法作回收实验，测量结果满意(表1)。 表1 样品测定结果
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