重组荞麦胰蛋白酶抑制剂对HL?60细胞的促凋亡作用
作者：高丽 李玉英 张政 王转花 王宏伟 张丽 朱镭
【摘要】 为研究多发性骨髓瘤（MM）的细胞遗传学特征及其与临床预后的关系，收集了68例临床病例并将患者的骨髓细胞进行了24小时短期培养，用常规方法制备染色体，G显带技术进行核型分析。结果表明：68例MM患者的异常检出率为19.1%(13/68)。异常克隆多与正常克隆呈嵌合形式存在。染色体数目异常为非整倍体，以超二倍体和亚二倍体克隆常见。结构畸变可见 t(11;14),累及1号染色体和多种标记染色体等。4例染色体具有高度复杂畸变的患者预后差。结论：MM的细胞遗传学多为复杂畸变，涉及多条染色体的数目和结构异常；初诊或疾病进展时应做染色体检查，以评估预后。
【关键词】 多发性骨髓瘤 细胞遗传学 染色体畸变
Cytogenetic Study of Multiple Myeloma
Abstract To investigate the cytogenetic characteristics of multiple myeloma and its relationship with clinical prognosis, 68 cases were collected and chromosome specimens of bone marrow cells were prepared by 24-hour culture, and G?banding technique was used for karyotype analysis. The results showed that the detected chromosome aberration rate was 19.1% (13/68). The abnormal clones existed mosaically with normal clones. Numerous aberrations were manifested by aneuploidy, mainly by hyperdiploidy or hypodiploidy. Structural aberrations involved t(11;14),chromosome 1 and various kinds of marker chromosomes. Cases which had very complex aberrations revealed poor prognosis. It is concluded that chromosome complex aberration is the mainly cytogenetic characteristics of multiple myeloma，and multiple numerous and structural aberrations are involved. Cytogenetic detection should be performed both at diagnosis and at disease progression so as to evaluate prognosis.
Key words multiple myeloma; cytogenetics；chromosome aberration
多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）是骨髓中单克隆浆细胞异常增生的恶性肿瘤，临床上患者的预后不一，中位生存时间为3年。近年来的研究表明，细胞遗传学分析结果在MM的预后评估中具有重要的作用。由于骨髓中异常浆细胞的比例低，并且浆细胞的分裂指数也低，MM的细胞遗传学分析有一定难度，目前国内尚无关于MM的大样本细胞遗传学分析的报道。我们对1990年1月至2005年5月在初诊或病程中于我院行染色体检查的68例患者的细胞遗传学和相关临床情况进行了分析。
材料和方法
病例
68例为1990年1月至2005年5月在我院行染色体检查的MM患者。诊断和分型参照张之南等主编的《血液病诊断及疗效标准（第二版）》。男性41例，女性27例，中位年龄57（25-74）岁。化疗方案主要为MP、VAD和改良M2方案等。
染色体标本制备和分析
采用骨髓细胞24小时（少数病例为72小时）短期培养，按［1］报道的制片和G显带技术进行染色体分析。核型分析和异常克隆描述按《人类细胞遗传学国际命名体制（ISCN， 1995）》进行。简单畸变为所分析的中期分裂相涉及1-2条染色体克隆性畸变；复杂畸变系指涉及3-5条染色体克隆性畸变； 高度复杂畸变系指涉及 6 条以上染色体克
结 果
细胞遗传学结果
68例均行染色体检查，其中1例失败，54例为正常核型，13例检出异常核型（表1），异常检出率为19.1%。13例中异常克隆与正常克隆呈嵌合形式存在的是11例（84.6%）。13例中除2例外其余的11例均有染色体数目的异常，表现为非整倍体，以超二倍体（49、50条）或亚二倍体（39、42-43条）异常克隆常见。染色体的增加累及1号、7号、9号、18号等，染色体的丢失累及X染色体、8号、13号、14号等。检出的结构畸变有1号易位/1p-、12p-、累及14号染色体的易位和多种标记染色体等。13例中染色体具有复杂和高度复杂畸变的是7例（53.8%），涉及多条染色体的增加、丢失、缺失、易位等数目和结构的畸变。本研究的13例异常核型中也检出1例在MM中较为特异的畸变t(11;14)(q13;q32), 该例为超二倍体异常克隆（50条），同时伴有4号、9号、18号的三体，检出异常后5个月进展为浆细胞白血病。本研究还在这68例MM中检出1例具有t(9;22)的异常克隆。
具有异常核型的MM患者的临床情况
13例具有异常核型的患者中除1例表现为鼻衄、牙龈出血外， 其余均以骨痛为主要症状。 免疫球蛋白类型最常见的为IgG型共7例，其次为IgA、IgE型各1例，有2例为λ轻链型,1例为κ轻链型，1例为IgD型。患者分期均为Ⅲ期。骨穿检查骨髓瘤细胞的比例较高，中位40%（19%-67%）。4例患者血清β2微球蛋白显著升高，病例No.15 VAD化疗5个疗程后骨痛、贫血、肾功能不全等临床症状改善不明显，病例No.43和病例No.65分别于确诊后7月、5月为浆细胞白血病，病例No.68正在随访中。4例具有高度复杂异常核型的患者预后很差：病例No.35确诊后2年继发急性白血病，病例No.37确诊后1月由于肺部感染和尿毒症死亡（核型见附图），病例No.43进展为浆细胞白血病，死于肺部感染和白血病浸润，存活仅7个月，病例No.65于确诊后5月进展为浆细胞白血病。
讨 论
本研究中异常克隆的检出率为19.1%,而报道MM初诊时染色体异常克隆的检出率为18%-35%，疾病进展期的检出率是40%-60%，到浆细胞白血病阶段约85%的患者可检出异常克隆，平均检出率为35%-40%［2，3］。本研究中的异常率低于文献报道，这可能与本组病例以初诊患者为主有关。此外，在培养体系中加入了相关的生长因子，这是否可提高异常克隆的检出率，还有待在今后的研究中设立随机对照试验进行分析。
本研究中异常核型以复杂和高度复杂畸变为主，涉及多条染色体的数目和结构的异常，这体现了MM的细胞遗传学特点，与文献的报道是一致的［2-5］。异常克隆多以超二倍体和亚二倍体形式存在，整二倍体很少见，这说明了在MM异常克隆可能有两种起源形式。涉及14q32的易位是MM中较为特异的畸变，该易位累及位于14q32的免疫球蛋白重链（IgH）基因，在MM的发生发展中具有重要作用，可以表现为t(11;14)，t(4;14),t(14;16)等，但其作用机制并未完全阐明，因为有25%的MM患者并不能检出该异常［5，6］。本研究的检出率低于文献报道，可能与病例数少有关。
近年来的研究认为，MM的13号染色体的异常，包括13号单体或13号染色体长臂1区4带的缺失（del(13q14)）提示预后差，尤其合并血清β2微球蛋白升高者［5，7］。本研究中最常见的染色体丢失也是13号，共有4例，其中2例均在确诊后短期死亡（分别为1月和7月）。但是，本研究未检出1例del(13q14)，可能与常规G显带技术难以识别此异常有关。Harrison 等［5］在37例MM患者中检出11例有异常核型，同时应用针对13q14的特异探针进行间期荧光原位杂交，检出20例（54%）患者有del(13q14)，提高了异常的检出率。
20世纪90年代以后发展起来的多色荧光原位杂交技术，可以对全套染色体进行分析，分辨MM复杂的结构畸变和常规显带中来源不清的标记染色体［8］。因此，今后对MM进行细胞遗传学研究，应在常规显带的基础上结合间期荧光原位杂交，有条件的可做多色荧光原位杂交，以提高异常的检出率，明确其复杂的数目和结构畸变。
我们的研究表明，MM的细胞遗传学多为复杂畸变，涉及多条染色体的数目和结构的异常。其细胞遗传学结果和临床预后密切相关，在疾病诊断之初或进展时应做染色体检查，以评估预后。
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