在安全输血中应用丙型肝炎病毒核心抗原检测技术的初步探索
作者：姚仁南，张建辉，黄晓静，杨钦，曹琴，江学成
【摘要】 本研究探讨用丙型肝炎病毒(HCV)核心抗原酶联免疫吸附技术(HCV-cAg ELISA)筛查献血员感染HCV的可行性。 对我2003年1月-2005年12月间的8 677份献血者血清标本进行抗-HCV初检和复检。将仅初检阳性的15份血清标本和仅复检阳性的14份血清标本，分别再做HCV-cAg ELISA和HCV RT-PCR检测。结果表明：经HCV-cAg ELISA检测，29份仅初检（15份）和仅复检（14份）抗-HCV阳性血清标本中只有5份结果为阳性，阳性率为17.24%。经HCV RT-PCR检测，29份仅初检和仅复检抗-HCV阳性血清标本中同样也只有5份阳性结果，阳性率也为17.24%。结论：HCV-cAg ELISA检测技术的敏感性与HCV RT-PCR技术类似，但成本明显降低，有可能作为HCV感染的辅助确证试验，或作为抗-HCV检测技术的更新换代技术用于安全输血中献血者血液的筛查。
【关键词】 丙型肝炎病毒
Technique of Detection of Hepatitis C Core Antigen Used in Safety Blood Transfusion
Abstract This study was purposed to investigate the feasibility to screen donor with HCV infection by means of HCV-cAg ELISA. The first and repeat assays were performed for detection of serum anti-HCV in 8677 donor′ s serum specimens from January 2003 to December 2005. All serum anti-HCV speciments with positive anti-HCV from first and repeat assays were finally identified by using HCV-cAg ELISA and HCV RT-PCR methods. The results showed that only 5 serum speciments were positive anti-HCV by HCV-cAg ELISA identification in 29 speciments including 15 speciments with positive ant-HCV in first assays and 14 speciments with positive anti-HCV in repeat assays，the positive rate detected by HCV cAg ELISA was 17.24%. 5 serum speciments were positive anti-HCV by HCV RT-PCR detection also in 29 speciments mentioned above，the positive rate detected by HCV RT-PCR was 17.24% too. It is concluded that sensitivity of HCVcAg ELISA is similar to HCV RT-PCR and may be useful for the early diagnosis of hepatitic C or used as a reliable method to screen donor with HCV infection in blood transfusion medicine.
Key words hepatitis C virus; hepatitis C virus core antigen; HCV-cAg ELISA; HCV RT-PCR
目前临床上主要用抗-HCV ELISA技术筛检献血者的HCV感染状况。尽管使用的抗-HCV ELISA试剂盒均为国家“批批检”合格产品，但由于厂家之间使用HCV基因重组抗原质量及各抗原片段包被比例的不同，各厂家试剂间的灵敏度和特异性存在着一定差异，从而导致抗-HCV检测结果不一致，易产生假阳性或漏检等情况。我们从2003年1月-2005年12月采用两家厂商生产的抗-HCV ELISA试剂对8677份献血者血清标本进行了初检和复检，对仅初检或复检抗-HCV阳性血清标本又用HCV-cAg ELISA技术和HCV RT-PCR技术进行了检测，以探讨HCV-cAg ELISA技术作为临床HCV感染的辅助确证试验，或作为抗-HCV检测技术的更新换代技术用于安全输血中献血员筛查的可行性，现将结果报告如下。
材料和方法
标本来源
血清标本均来自本院血站献血者，经抗-HCV ELISA试剂初、复检后，将所需标本分装并置-80℃条件下存放，确保被检标本仅冻融一次。
质控品
抗-HCV质控血清由卫生部临床检测中心提供（批号0412，0503等），2 NCU/ml。
试剂
用于初检和复检的抗-HCV ELISA
诊断试剂分别由厦门新创公司（批号为2004095805和2005025801）和上海科华公司（批号为20041203和20050317）提供，HCV-cAg ELISA试剂由湖南景达基因公司提供（批号为050920）；HCV RT-PCR荧光定量试剂由上海科华公司提供（批号为20050920）。
主要仪器
洗板机（ST-３６Ｗ）和酶标仪（ST-３６０）均为上海科华实业有限公司生产。PCR扩增仪型号为Light Cycler II。
方法
8 677份献血者血清标本经抗-HCV ELISA试剂初、复检后，将仅初检或复检阳性的血清标本用同批号试剂做双孔复查，确定阳性结果的标本再用HCV-cAg ELISA技术和HCV RT-PCR技术检测。具体操作方法和结果判断，严格按照说明书要求进行。
统计学处理
采用χ2 检验。
结 果
8 677名献血者的血清标本经抗-HCV ELISA技术检测后，结果见表1。
Table 1. Results of anti-HCV in donor’s serum samples detected by ELISA（略）
对其中15份仅初检和14份仅复检抗-HCV阳性血清标本分别进行HCV-cAg ELISA检测和HCV RT-PCR检测。结果表明，在29份仅初检和仅复检抗-HCV阳性血清标本中，抗原检测阳性为5份，核酸检测阳性也为5份，两种方法检测结果基本相符（表2）。Table 2. Results detected by HCV-cAg ELISA and HCV RT-PCR （略）
讨 论
在第三代抗-HCV ELISA技术中的包被抗原主要包括HCV-core，NS3，NS4和NS5等，其中大部分为基因工程表达抗原，虽然其特异性和灵敏度都比较高［1］，但由于各厂商所用抗原质量和各抗原片段包被比例的不同，因此生产的试剂在灵敏度和特异性方面存在一定差异，从而导致抗-HCV结果的不一致，易产生漏检和假阳性等情况［2］。为提高检出的准确性，有必要寻找一种快速、便捷的辅助确证诊断技术。
HCV侵入人体后，血液中首先出现的是HCV抗原，经过一段时间后才可能产生相应的抗体。国内外近几年来探索应用HCV-cAg检测HCV的报道较多［4，5］。本研究应用的HCV-cAg ELISA法对仅初检阳性的15份和仅复检阳性的14份血清标本分别进行了检测。结果显示，抗原检测阳性率比报道的在抗-HCV阳性标本中HCV-cAg阳性率（为34.48%）明显要高［5］。
应用 RT-PCR技术对仅初检或仅复检抗-HCV阳性的29份血清标本的检测结果与HCV-cAg ELISA法结果相同。虽然PCR技术特异性强，灵敏度高，是HCV感染辅助确证技术之一，但该方法操作复杂、费用高。比较而言，HCV-cAg ELISA法快速、便捷，较适用于安全输血中献血者的血液筛检。
HCV-cAg ELISA技术与抗-HCV有互补作用，二者同时检测能提高HCV检出结果的准确性，可明显降低抗-HCV检测的假阳性，减少血液资源的浪费，当然这还有待进一步研究。
【文献】
1Colin C，Lanoir D，Touzets，et al. Sensitivity and specificity of third-generation hepatitis C virus antibody detetion assay :an analysis of the literature. J Hepat，2001; 8: 87-95
2谢立，吴晓东.丙型肝炎病毒检测方法的研究进展及其临床意义.世界华人消化杂志，2005; 13： 884-886
3汪国华，张贺秋，李少波等.丙型肝炎病毒核心抗原检测试剂的研制及初步应用. 输血杂志，2004; 17：299-301
4孟淑芳，李秀华，尹红章等.丙型肝炎病毒抗原检测方法的建立.中华实验和临床病毒学杂志，2001;15：287-230
5Muerhoff A，Jiang L，Shah D，et al. Detection of HCV core antigen in human serum and plasma with an automated chemiluminescent immunoassay. Transfusion，2002; 42:349-356
