反相HPLC测定注射用乳糖酸阿奇霉素含量

【摘要】  目的 建立用高效液相色谱法（HPLC）测定注射用乳糖酸阿奇霉素含量的方法。方法 色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶（phenomenex luna 5μm,250mm×4.6mm）；流动相为乙腈-0.02mol/L磷酸氢二钾（pH9.0）（60：40）；流速 1.0ml/min，进样量20μl；检测波长 210nm。结果 乳糖酸阿奇霉素在20～100μg/mg范围内浓度与峰面积具良好线性的关系(r=0.9996)，回收率平均值为99.5%，RSD=0.7% ，精密度为RSD = 0.85%。结论 HPLC法简便，快捷，准确，适用于对中间体含量的控制。

【关键词】  阿奇霉素; 高效液相色谱法

    【Abstract】  Objective  To build the method of measuring the content of azithromycin lactobionate for injection with high-performance liquid chromatography (HPLC).Methods  Chromatographic column is 18-alkyl silicane bonding silicone rubber (phenomenex luna 5μm,250mm×4.6mm),flow phase is acetonitrile-0.02mol/L K2HPO3(pH9.0)(60:40),the flow rate 1.0 ml/min,the inflow 20μl,the detected wave lenth 210nm.Results  The concentration and peak area of azithromycin lactobionate have a good linear relationship (r = 0.9996) within the range of 20～100μg/mg, recovery ratio average is 99.5%,RSD = 0.7%, the precision is RSD = 0.85%.Conclusion  HPLC method is simple and convenient, quick and precise, which is suitable for the enterprise to control the content of intermediate compound.

    【Key words】  azithromycin;high-performance liquid chromatography

    乳糖酸阿奇霉素是一种新型的注射用大环内酯类广谱抗生素。其法定含量测定采用微生物测定法［1］，操作繁琐费时。本文研究了用反相HPLC测定乳糖酸阿奇霉素的含量，并与微生物法进行了比较。本法简便、快速、准确。

　　1  仪器与试剂

    1.1  仪器  高效液相色谱仪（美国WATERS公司）检测器 UV2487， 泵 1525。

    1.2  试剂  阿奇霉素标准品（药品生物制品检定所）纯度：99.5% ，水为超纯水，乙腈为色谱纯，磷酸氢二钾为分析纯。样品乳糖酸阿奇霉素（黑龙江省齐齐哈尔鼎恒升药业有限公司提供，批号050602）。

　　2  色谱条件

    2.1  色谱柱  十八烷基硅烷键合硅胶（phenomenex luna  5μm,250mm×4.6mm），广州菲罗门仪器公司提供。

    2.2  流动相  乙腈-0.02mol/L磷酸氢二钾（pH9.0）（60：40），流速：1.0ml/min，进样量20μl，检测波长：210nm，温度：30，理论塔板数：按阿奇霉素应不低于3000。

    2.3  阿奇霉素标准品谱图和乳糖酸阿奇霉素样品谱图  如图1,2,3。

    在上述色谱条件下，乳糖酸对阿奇霉素测定无干扰，且乳糖酸和阿奇霉素的分离良好，分离度为2.6；保留时间为8.6min;理论塔板数：按阿奇霉素4600；结果见图1～3。

    2.4  样品测定及方法比较  取注射用乳糖酸阿奇霉素适量，配制成每1ml含0.06mg的溶液。按2.2色谱条件在高效液相色谱仪上进样，记录色谱图用外标法计算含量测定结果见表1，同时与微生物法进行含量测定两种方法的比较见表1。 表1  样品测定结果

    3  结果与结论

    3.1  工作曲线与线性范围  精密称取阿奇霉素标准品约50mg，置25ml容量瓶中，以流动相溶解并稀释制成每1ml含阿奇霉素0.02mg、0.04mg、0.06mg、0.08mg、0.10mg的标准品溶液系列，分别在高效液相色谱仪进样20μl，以标准品峰面积与浓度做回归方程：Y=0.3692X-0.1526， r=0.9996（n＝5）。结果表明阿奇霉素在20～100μg/mg范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系。

    3.2  回收率试验  按处方工艺精密量取不加阿奇霉素的乳糖酸溶液适量，分别精密加入阿奇霉素原料240mg，以次制备5份取上述0.06mg的溶液，作为对照品溶液，在高效液相色谱仪上测定峰面积，以外标法计算含量，得回收率平均值为99.5%，RSD为0.79%。

    3.3  精密度试验  取每1ml含0.06mg的阿奇霉素标准品溶液，连续进样10次，得峰面积的RSD为0.85%。

    4  讨论

    注射用乳糖酸阿奇霉素是冻干粉针剂，中间体含量控制采用微生物测定法实验周期太长，约24h，不利于半成品的保存，采用高效液相色谱法15min即可分离测定完毕。由测定结果可知，高效液相色谱法间接控制中间体及成品的含量，与微生物法基本符合质量标准规定的90%～110%范围，本法具有一定的实际意义。

【】
  1 国家药品标准WS-601（X-520）-2000.