系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞亚群的变化

【摘要】  目的：研究系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血T淋巴细胞亚群变化及其临床意义。方法：对30例患者和20例健康者，采用特异性荧光抗体标记，流式细胞检测T淋巴细胞亚群的变化。结果：SLE活动组CD4+细胞数明显降低（P<0.05）；CD4+/CD8+比值明显降低（P<0.05）。结论：T淋巴细胞亚群在SLE的发病机制中起重要作用。

【关键词】  系统性红斑狼疮；T淋巴细胞亚群;流式细胞术

　　The Change of Peripheral Blood T Lymphocyte Subsets in Patients with Different Clinical Types of Systemic Lupus Erythematosus

　    Abstract: Objective To study the change of T lymhocyte subsets with systemic lupus erythematosus. Methods 30 patients with systemic lupus erythematosus and 20 cases of healthy subjects were investigated and the change of T Lymphocyte subsets were counted by flow cytometer. Results Decrease in CD4+ cells and was observed in SLE patients(P<0.05). Conclusion T lymphocyte isplay an important role in the development of SLE.

    Key words: Systemic lupus erythematosus; T lymphocyte; Flow cytomety

    系统性红斑狼疮（SLE）是一种自身免疫性疾病，存在免疫功能的紊乱，但其发病机制及机体内免疫调节细胞的具体变化尚未完全明确。本研究采用特异性荧光抗体标记流式细胞术，探讨SLE患者在疾病的不同阶段外周血CD3+、CD4+、CD8+淋巴细胞的变化，为阐述SLE患者存在的免疫功能紊乱、揭示SLE的发病机制提供实验依据。

　　1  资料与方法

　　1.1  临床资料 

　　SLE患者30例，其中女29例，男1例，年龄17岁~54岁，平均年龄31.8岁，所有病例均符合1982年美国风湿病学会（ARA）修订的SLE诊断标准［1］。采用1992年欧洲SLE活动性评分标准判断SLE的病情活动性［2］。其中活动期SLE 18例（活动期患者未用糖皮质激素），非活动期SLE 12例,正常对照组为20例健康志愿者。

　　1.2  主要试剂和仪器 

　　双色标记单抗CD3+、CD4+分别与FITC、PE荧光素结合；含beads的TrueCount管;CaliBRITEbeads;FACS溶血素（均为美国BD公司产品）。FACS Calibur流式细胞仪（美国BD公司）。

　　1.3  实验方法 

　　标本处理：抽患者外周血2 ml,用肝素钠抗凝管保存，6 h内分析;向TrueCount管中分别加入20 μl抗体和50 μl的抗凝全血,振荡混匀3 s，避光放置15 min；加入FACS（1X）溶血素2 ml，充分混匀，室温避光10 min；1 000 rpm/min离心5 min,弃上清；加入2 ml PBS洗一次;800 rpm/min离心5 min,弃上清；流式细胞仪上机检测。数据获取与分析使用CaliBRITE标准微球、FACSComp软件调节FACS Calibur流式细胞仪PMT电压、荧光补偿、灵敏度，应用SimulSET分析软件对处理好的标本进行CD3+、CD4+、CD8+相对计数。

　　1.4  统计学分析 

　　采用SPSS 8.0统计软件，所有数据以均数标±准差（±s）表示，组间比较采用t检验进行数据分析。

　　2  结果

    SLE患者外周血T细胞亚群检测结果见表1，SLE活动期患者与正常组比较CD4+细胞数明显降低（P<0.05）；CD4+/CD8+比值降低（P<0.05）。SLE活动期患者与正常组比CD8+细胞数差异无显著性（P>0.05）。表1  SLE患者与正常人T淋巴细胞亚群比较（略）注：*与正常对照组比较，P<0.05；Δ与正常对照组比较，P>0.05。

　　3  讨论

    正常免疫应答过程有依赖于各种免疫细胞，特别是各T细胞亚群之间的相互协作和相互制约。若某一T细胞亚群的数量和功能发生异常，机制就出现免疫紊乱，并发生一系列病理变化。SLE是一种自身免疫性疾病，存在免疫调节功能紊乱。国内外对SLE患者T细胞亚群的研究有很多，但结果不太一致。过去多数研究认为［3］在SLE活动期，CD4+（辅助/诱导T细胞）升高，CD8+（抑制/杀伤T细胞）下降，CD4+/CD8+比值升高，认为SLE的发病与上述T细胞亚群的改变有关，尤其是CD8+下降引起B细胞多克隆抗体激活及体液免疫异常。但近年的研究［1，5］却发现SLE 活动期CD8+细胞变化不大，或者反向升高。本实验结果也显示：活动期SLE患者的CD8+细胞与正常对照组比较差异无显著性（P>0.05），CD4+细胞数明显降低（P<0.05）；CD4+/CD8+比值降低（P<0.05）；CD3+、CD8+在SLE活动期、SLE非活动期、正常对照组之间差异无显著性（P>0.05）。有进一步研究发现CD8+细胞亚群具有明显的异质性,活动期SLE患者的CD8+细胞几乎全部反抑制性T细胞（CD8+VV+）取代，不能显示抑制功能,因而阻断了CD8+细胞对CD4+细胞的抑制作用［5］,另一方面CD4+细胞减少，主要原因是CD4+亚群中的抑制诱导T细胞(CD4+2H4+ )降低T细胞不能诱导CD8+细胞对B细胞产生抑制作用［6］，因此活动期SLE患者中,CD4+细胞降低, CD8+细胞正常或升高,仍然表现为体液免疫的亢进B细胞增殖并产生大量的抗体。

    可见，T细胞亚群的改变在SLE的发病中起到很大的作用，检测SLE患者外周血T淋巴细胞表型，对全面地了解机体的免疫状态，正确判断病情和指导临床有重要的意义。

【】
  　　［1］Tam EM,Cohen AS,Fries JF,et al.The 1982 revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus(SLE)［J］.Arthritic Rheum,1982,25:1271.

　　［2］VitaliC,Bencivelli W,Lsenberg DA,et al.Disease zctivity in systemic lupus erythematosus:report of consensus study group of the European workshop for rheumatology research. II.Identification of the variables indicative of diseaseactivity and their use in the development of an activity score［J］.Clin Exp Rheumatol,1992,10:341.

　　［3］Raziuddin S,Nur MA,Al?Wabel AA.Increased circulating HLA?DR+CD4+ Tcells insystemic lupus erythematosus:alterations associated with prednisolone therapy［J］.Scand J Immunol，1990,31(2):139?145.

　　［4］Maeda N,Sekigawa I,Iida N,et al.Relationship between CD4+/CD8+ T cellratio and T cell activation in systemic lupus erythematosus［J］.Scand Rheumatd，1999,28(3):166.

　　［5］张冬春，王林军，马安伦，等.SLE中的反抑制细胞与γδTCR阳性T细胞［J］.风湿病学杂志，1997，2(4):1.

　　［6］蒋明，孙华瑜，朱立平，等.系统性红斑狼疮患者外周血中的T4+2H4+细胞的研究［J］.中华内科杂志，1991，30(7):426.