时间分辨荧光免疫法检测乙肝E抗体阳性及PCR定量阴性的意义

【摘要】  目的：阐述时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)在乙型肝炎血清学E抗体阳性检测中的临床意义。方法：收集50例乙型肝炎血清学E抗体阳性且PCR定量结果<1.00×103 copies/ml及肝功正常的血清标本，用时间分辨荧光免疫分析技术进行定量检测，然后进行结果分析。结果：用TRFIA方法检测，有18例血清标本HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性，而且HBsAg、HBeAb、HBcAb的滴度都很低，HBsAb的滴度都超出范围。32例HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性血清标本，HBsAg、HBeAb、HBcAb的滴度都比较高。结论：HBVM定量和定量PCR技术充分的互补。长期E抗体阳性且PCR定量结果<1.00×103 copies/ml及肝功能正常的患者。通过TRFIA定量，其数据能直观的观察患者病情，能预示患者的恢复情况。

【关键词】  时间分辨荧光免疫分析 乙型肝炎病毒 临床意义

    乙肝病毒(Hepatits B veius HBV)感染是我国最常见的感染性疾病之一，而应用免疫技术测定HBV特异性抗原抗体是HBV感染诊断的主要手段。由于免疫学技术的不断，抗原抗体检测灵敏度明显提高，使低水平HBV感染得以检出，对临床诊断及流行病学有重要意义［1］。

　　1  材料与方法

　　1.1  材料 
　
　　收集50例乙型肝炎血清学E抗体阳性且PCR定量结果<1.00×103 copies/ml及肝功正常的血清标本；TRHA试剂盒由上海新波生物技术有限公司提供；DDR-M6601型时间分辨荧光分析仪。

　　1.2  方法 

　　TRFIA 严格按产品说明书进行。在最后一步比色时间分辨免疫荧光测定仪测定发光度。

　　2  结果

    用ELISA方法检测出50例乙型肝炎血清学E抗体阳性的标本(HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性)，再用TRFLA方法定量检测，有18例血清标本HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性，而且HBsAg、HBeAb、HBcAb的滴度都很低，HBcAb的滴度都超出参考范围。32例HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性血清标本，HBsAg、HBeAb、HBcAb的滴度都比较高。表1  某患者1 ELISA检测结果（略）表2  某患者2 ELISA检测结果（略）

　　3  讨论

    TRFIA是一种非同位素免疫分析技术，是用三价稀土离子铕(Eu3+)及其螯合剂作为示踪物，代替传统的荧光物质、放射性同位素、酶和化学发光物质来标记抗体、抗原、多肽、激素、核酸探针或生物活性细胞，待反应体系［如抗原抗体免疫反应、生物素(链)亲和素反应、核酸探针杂交反应、靶细胞与效应细胞的杀伤反应等］发生后，用时间分辨荧光仪测定最后产物中的荧光强度，根据荧光强度和相对荧光强度比值，判断反应体系中分析物的浓度，达到定量分析的目的。TRFIA灵敏度高(1018mol/L)，特异性强，酶联免疫灵敏度(10?9 mol/L～10?10 mol/L)。

    从表1可以看出，该患者恢复情况比较好。其HBsAg、HBeAb、HBcAb的滴度都很低，HBcAb的滴度都超出范围。更一步说明HBV在肝细胞中的组装和复制能力下降。用ELISA定性的方法只能看出该患者是个E抗体阳性(1，4，5阳性)。 不能预示患者的恢复情况。从表2可以看出该患者是E抗体阳性(1，4，5阳性)。从定量结果看，该患者的病情恢复情况不如“表1”，其HBsAg、HBeAb、HBcAb的滴度都相对较高。用ELISA定性的方法只能看出该患者是个E抗体阳性(1，4，5阳性)。不能预示患者的恢复情况。

    TRFIA定量和定量PCR技术能充分的互补。血清HBV?DNA荧光定量PCR测定可以直接反映血液中病毒复制状态，具有很多临床应用价值，但不能完全反映病毒复制静息期肝细胞内HBV病毒状态。HBV?DNA阴性并不完全代表体内HBV已被清除，结合“两对半定量”各项指标更能客观反映体内HBV病毒状态。由于可进行定量分析，这对药物疗效观察和病情监测具有重要意义［2］。

【参考】
  　　［1］魏来，陶其敏.努力规范肝脏疾病的免疫学诊断［J］.中华检验杂志，2003，26：69?71.

　　［2］Heijtink RA,Kruining J,Honkoop P, et al. Serum HbeAg quantitation during antiviral therapy for chronic hepatitis B［J］. J Med Virol,1997,53:282?287.