盐酸小檗碱脂质体的稳定性考察
作者：谭丽蓉，李国强，陈俊威，苏炜，何丽庭
【摘要】 目的：考察盐酸小檗碱脂质体的稳定性。方法：采用离心?分光光度法测定稳定性参数(ＫE)值；经典恒温加速试验法在25℃、30℃、40℃恒温条件测定盐酸小檗碱脂质体的包封率和含量；在(25±2)℃和(4±2)℃下留样观察，考察供试品外观及KE值，并通过测定酸值和过氧化值考察膜材磷脂的稳定性。结果：在4℃、25℃、30℃、40℃和(20±2)℃、光照条件下放置10 d的KE值较0 d分别增加了1.27、3.72、5.53、7.14和5.12倍，脂质体在高温条件下，包封率和含量变化很大，而4℃、90 d内性质比较稳定。结论：盐酸小檗碱脂质体的稳定性与温度有关，温度越高，稳定性越差，制成冻干粉保存较好。
【关键词】 盐酸小檗碱；脂质体；稳定性；恒温加速试验法
脂质体作为一种新型药物载体，具有体内降解、无毒性、无免疫原性和定向分布的靶向特点，可提高指数，降低毒副作用，减少药物剂量，但脂质体自身稳定性差，在贮存过程中脂质体易产生聚集、降解、沉降、融合等作用，造成被包封药物的渗漏，极大地抑制了脂质体作为药物转运系统的应用。因此提高脂质体的稳定性是其商品化必须解决的一个重要问题。我们采用经典恒温加速实验法［1］对盐酸小檗碱脂质体的稳定性进行了研究，现将结果报道如下。
1 仪器和试药
1.1 仪器 UV?2401型紫外分光光度计(日本岛津)［TGL?16 G型离心机(上海安亭仪器总厂)［隔水式电热恒温培养箱(上海医疗器械七厂)；GB 204梅特勒天平(瑞士)。
1.2 试药 盐酸小檗碱脂质体(自制)；其他试剂均为分析纯。
2 方法和结果
2.1 盐酸小檗碱脂质体的物理稳定性考察 脂质体在放置过程中会发生聚集而沉降，为了进一步了解脂质体的物理稳定性，以稳定系数(KE)［2］作为评价指标，采用离心?分光光度法测定KE值，KE值越小，脂质体越稳定。经过预试，选择实验温度为25 ℃、30 ℃、40 ℃，试验期为10 d。自制3批盐酸小檗碱脂质体，分成5组，分别放置在4 ℃、25 ℃、30 ℃、40 ℃以及(20±2)℃、光照为(4 500±500)lx的条件下，分别于0 d、5 d、10 d取样，每式2份，1份取0.5 ml，另1份取1 ml于5 000 r/min离心10 min，从上部吸取离心后的脂质体0.5 ml，分别加蒸馏水稀释至5 ml，以蒸馏水为空白，分别于344 nm处测定其吸收度，按下式KE值，结果见表1。KE= (Ａ0?Ａ)/ Ａ0(Ａ0和Ａ分别为脂质体离心前后吸收度值)
表1 不同温度及时间下的KE值（略）
结果显示，脂质体随着放置时间的延长，不断聚集，表现为浊度及KE值不断增大。4 ℃、25 ℃、30 ℃、40 ℃和(20±2)℃、4 500 lx时放置10 d的KE值较0 d分别增加了1.27倍、3.72倍、5.53倍、7.14倍和5.12倍。
2.2 盐酸小檗碱脂质体的化学稳定性预测
2.2.1 盐酸小檗碱脂质体的包封率和含量测定方法［3］ 精密吸取盐酸小檗碱脂质体1 ml，上样于用磷酸盐缓冲液饱和24 h的Sephadex G?50柱，用磷酸盐缓冲液洗脱，流速为0.8 ml/min分离，分别收集盐酸小檗碱脂质体与游离盐酸小檗碱的洗脱液，在344 nm处测定吸收度，标准品对照法计算脂质体中盐酸小檗碱的含量。标准曲线方程为A=6.412×10?2C+2.540×10?3(r＝0.999 2),线性范围0.25 mg/L～16.0 mg/L，包封率＝［(C总?C游离)/C总］×100％(其中C总为盐酸小檗碱的总量，C游离为脂质体包封盐酸小檗碱的量)
2.2.2 加速试验 制备3批盐酸小檗碱脂质体，在25 ℃、30 ℃和40 ℃条件下，分别于0 d、5 d、10 d取样，测定盐酸小檗碱脂质体的包封率和标示百分含量，结果见表2。
表2 不同温度及时间下的包封率和含量变化（略）
加速实验显示，脂质体在高温条件下，包封率和含量变化很大。
2.2.3 长期试验 3批脂质体在(4±2)℃和(25±2)℃下留样观察，分别放置0 d、30 d、60 d、90 d后取样，考察供试品外观及KE值，结果见表3。
表3 不同温度及时间下的供试品外观及ＫE值（略）
留样观察结果表明，盐酸小檗碱脂质体在4 ℃、90 d内性质比较稳定。
2.3 膜材磷脂的稳定性
2.3.1 酸值的测定［4］ 量取盐酸小檗碱脂质体1.0 ml于锥形瓶中，加无水乙醇5.0 ml溶解，滴加酚酞1滴，用1.0 mol/L氢氧化钠(NaOH)溶液滴定至粉红色，用新制备脂质体样品做空白，公式如下:H=MKOH×N×F×VNaOH，其中H：酸值(g/g)，MKOH：KOH相对分子质量(g/mol)，N：NaOH浓度(1.0 mol/L)，F：NaOH校正系数(1.082/g)，VNaOH：NaOH体积(Ｌ)。结果：在低温时，脂质体的酸值变化不大，而在高温和光照时，酸值变化很大，说明脂质体在低温、避光条件下贮存，能较长时间保持稳定。
2.3.2 过氧化值的测定［4］ 精密量取脂质体溶液1.0 ml于10 ml离心试管中，加入20 g/ml的三氯醋酸水溶液1.6 ml，5 000 r/min离心10 min。吸取上清液1.6 ml于10 ml具塞试管中，加入0.67 g/ml硫巴比妥酸溶液1.0 ml，混匀，于沸水浴中加热10 min，冷却后于532 nm处测定吸收度。根据标准曲线:ｃ(mol/L)=-2.688×10?3+8.035 Ａ求出丙二醛浓度，进而求出磷脂氧化的量。结果：低温时，制剂的过氧化值变化不大，而在高温和光照时,制剂的过氧化值变化很大，说明盐酸小檗碱脂质体应在低温、避光条件下贮存。
3 讨论
恒温加速试验是预试药物稳定性的常用方法，在试验前，一般都要进行预试以选定适当的温度和试验期限［2］。温度太低或试验期限太短，则多因含量变化小而难于进行计算，温度过高又可能出现其他变化，影响试验结果。本试验采用25 ℃、30 ℃、40 ℃，试验期限为10 d。由上述试验可见，温度对盐酸小檗碱脂质体的稳定性影响最大，温度越高，脂质体越不稳定，而在4 ℃条件下相对较稳定，同时膜材磷脂的稳定性也受温度的影响较大。综上所述，盐酸小檗碱脂质体宜于低温避光保存，因此可考虑制成冻干脂质体，至于冻干脂质体的制备及稳定性考察，将作进一步研究。
【】
［1］ 崔福德.药剂学［M］.第5版.北京：人民卫生出版社，2003：281?282.
［2］ 张晓云，倪京满，乔华.鬼臼毒素脂质体的稳定性研究［J］.生化药物杂志，2006，27(3)：141?144.
［3］ 徐丽君，陆付耳，魏世超，等.盐酸小檗碱脂质体的制备方法及质量研究［J］.中国药学杂志，2004，24(6)：325?326.
［4］ 张奇，邓英杰，罗国安.均匀设计法制备5?氟尿嘧啶脂质体及其稳定性［J］.北京大学学报(医学版)，2002，34(1)：64?67.
