仪器法与手工法网织红细胞计数对比分析
【摘要】 目的：比较仪器法与手工法网织红细胞（Ret）计数差异情况。方法：EDTA?K2抗凝全血标本分别采用仪器法和手工法（显微镜）作Ret计数。结果：仪器法和手工法Ret计数结果差异均无显著性（P＞0.05），但Hb含量在90 g/L～110 g/L之间的血液标本采用仪器法Ret计数时，有35%的患者超过正常范围，有2.4%的患者低于正常参考范围。结论：仪器法较手工法Ret计数方便、快捷、重复性好、准确性高、结果稳定，在大、中型医疗机构中可广泛应用。另外应加大临床上轻度贫血患者Ret检查的力度，以防漏诊。
【关键词】 仪器法；手工法；网织红细胞
目前，基层大多数的网织红细胞(Ret)计数，仍然使用传统的显微镜计数方法，此方法操作较烦琐，影响结果的因素较多，既费时，又费精力，工作量大，而仪器法操作简单，时间短，重复性好，结果准确，笔者就仪器法与手工法计数Ret作比较分析，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 仪器与试剂 日本希森美康公司生产的Sysmex SE?9000全自动血液分析仪及进口配套Ret试剂及质控物，所有试剂均在有效期内使用。
1.1.2 标本来源 本病例均为我院2006年7月至8月间的住院患者，其中有血液内科、肾内科、妇科、产科、消化内科、肝肠科等各科住院患者标本。
1.2 方法 患者标本用EDTA?K2真空抗凝管抽血2 ml。仪器在测定前自动校准，待各项检测参数在允许的范围之内应进行室内质控物监控，最后测定Ret，结果备用。作仪器法Ret计数的同时，用珠海贝索生物技术有限公司提供的10 g/L煌焦油蓝染液与血液1∶1比例于刻度离心管中进行20 min的染色后推片备用。显微镜计数前，目镜放置米勒窥盘，以提高计数速度和准确性。本镜检实验由5位技术熟练工作人员操作，统一计数方法和计数标准，要求涂片均匀，厚薄适宜，每份标本选2张血膜片，血膜长约3 cm，选择染色深浅适中。遇有异常细胞须经多人共同商议确定。计数时选择涂片体尾相交处细胞展开良好，分散较均匀的部位，由近边到中心顺序计数，避免重复或遗漏。人工显微镜测定油镜下计数1 000个红细胞中的Ret数，以百分率表示［1］。
1.3 统计方法 采用t检验。
2 结果
2.1 计数人员间差异性比较 取20份Hb在111 g/L～150 g/L之间的全血标本作Ret计数，选7名工作人员计数，从中选取5名人员计数结果差异较小的参与手工法与仪器法Ret比较，结果见表1。
表1 人与人之间Ret计数差异比较（略）
注：1～5之间比较P＞0.05；6、7与1～5比较P＜0.05。
2.2 仪器法与手工法Ret计数重复性比较 仪器法与手工法对质控物，患者全血标本作平行实验，质控物为A组，Ret在0.5%～1.5%范围为B组，Ret计数＞1.5%为C组，仪器法A、B、C各检测20份标本，手工法相对应的编为A、B、C组，5位工作人员操作每份标本各工作人员操作2张血膜片结果取均值。将5位人员各自的均值去掉最高值和最低值后再均值作为手工法结果A、B、C。仪器法与手工法Ret数据基本接近差异无显著性（P＞0.05），不过手工法的CV值大于仪器法CV值，说明仪器法测定结果重复性更好，其结果见表2。
表2 仪器法与手工法Ret重复性比较（略）
注：仪器法与手工法Ret结果两组比较P＞0.05。
2.3 选Hb在90 g/L～110 g/L之间235例作Ret计数，有35%的人超过正常值，约有2.4%人低于正常参考值。
3 讨论
仪器法Ret计数与一般血细胞分析仪原理一样，均为流式细胞术中的鞘流技术，射频技术。由于激光束可摄入红细胞内容物的分析，而Ret是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间尚未成熟的红细胞，其胞浆内含有一定量RNA，经染色后可显示网织结构，且与形式和RNA含量有关［2］。根据这一原理可将Ret分为：早期Ret（HFR）、中期Ret（MFR）和晚期Ret（LFR），它们比率的高低，组合比例的高低对贫血的诊断和鉴别诊断，贫血的疗效观察，肿瘤过程中起着决定性的重要作用。Ret计数仪可得出Ret结果的相对值和绝对值，计数速度快、时间短、重复性好、结果准确可靠。通过对40份全血标本作仪器法与手工法Ret计数结果比较差异无显著性（P＞0.05），质控物结果也在允许范围之内。当然存在不足的是，此仪器成本高，价格贵，基层医疗单位投入较为困难。手工Ret计数以试管法重复性较好，容易掌握，被列为手工法Ret计数的参考方法［3］。近年来使用了米勒窥盘计数，规范了计数区域，减少了实验误差，使结果的准确性有所提高。本次实验手工法结果较仪器法结果稍有偏低，究其原因可能是，计数区域误差，染色深浅判断Ret误差，染色液与血液的比例不恰当等因素所致。Ret的网织物质随成熟程度增加而减少，接近完全成熟的Ret中，只有极少量的点状或细丝物质，如不细心，往往被忽略［4］，这也是造成手工法较仪器法结果偏低的原因之一。因此，手工法Ret计数操作烦琐，影响结果的因素较多。严格把关每一个环节，克服上述诸多问题是确保Ret计数法结果准确的根本保证。临床上Ret计数只注重患者中度、重度贫血的情况，而忽视了一大批轻度贫血的患者。我们通过本院住院患者235例Hb在90 g/L～110 g/L之间的全血标本用仪器法检测结果有35%的患者Ret超过正常参考范围，有2.4%的患者低于正常参考范围，临床上的漏检对患者的诊断、治疗以及观察带来一定的困难，应引起广大医务工作者的足够重视。
【参考】
［1］ 叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程［M］.第2版.南京：东南大学出版社，1997：14.
［2］ 丛玉隆.临床医学临床诊断、护理及健康进展—检验学分册［M］.北京：技术文献出版社，2006，10：58.
［3］ 赵桂芝.临床检验［M］.北京：人民卫生出版社，2002：44.
［4］ 陈华明，柴辉，马增煌.实用检验医学质量控制［M］.武汉：武汉出版社，2002：64.
