基底细胞鸡尾酒标记法在前列腺穿刺组织中的应用价值

【关键词】  前列腺肿瘤；免疫组织化学；基底细胞鸡尾酒；P63；34βE12

　　［摘要］ 目的：评价基底细胞鸡尾酒抗体P63/34βE12在前列腺穿刺组织中的应用及价值。方法：应用免疫组化Envision二步法，检测70例良性前列腺增生及28例前列腺腺癌中P63/34βE12的表达情况，并同时用P63、34βE12单标记法作为对照。结果：P63/34βE12鸡尾酒及P63、34βE12标记前列腺基底细胞的强阳性率分别为87.1%、60%和41.4%，鸡尾酒法与单标记法相比具差异有显著性，(P＜0.01)，且P63与34βE12的强阳性率二者差异具有显著性意义(P＜0.05)。结论：鸡尾酒标记法能明显提高对基底细胞免疫反应的强度和敏感性，且特异性强，可作为前列腺疾病诊断及鉴别诊断的一种有效辅助手段，具有重要的临床应用价值。

　　［关键词］ 前列腺肿瘤；免疫组织化学；基底细胞鸡尾酒；P63；34βE12

　　Value and Application of Basal Cell Cocktail(P63/34βE12)in Prostate Needle Biopsy Specimens

　　Abstract:Objective To evaluate the application and value of basal cell cocktail antibodies(P63/34βE12)in prostate needle biopsy tissue.Methods Immunohistochemistry Envision 2step techniques was used to detect the expression of P63/34βE12 in 70 cases of benign prostatic hyperplasia and 28 cases of prostatic adenocarcinoma,in contrast to P63 and 34βE12 single mark methods.Results The strong positive rates of the basal cells marked by P63/34βE12 cocktail,P63 and 34βE12 methods are respectively87.1%,60.0% and 41.4%.There is significantly difference between cocktail and single mark methods.The P values are both less than 0.01,with notable significance in the difference of strong positive rates of P63 and 34βE12(P＜0.001).Conclusion Cocktail marking can significantly raise the intensity and sensitivity of reaction to the immunoreaction of the basal cells.With its notable specificity,it can be used as an effective supplementary means in the diagnosis and discrimination and thus has significant application value.

　　Key words:Prostatic neoplasms;Immunohistochemistry;Basal cell cocktail;P63;34βE12

　　前列腺良、恶性疾病鉴别诊断是临床病理诊断中的难题之一，尤其是对病灶局限的穿刺活检标本，仅仅依靠常规HE切片极易造成误诊，常需借助免疫组化染色证实基底细胞的存在与否作为前列腺癌的诊断工具之一。我们把基底细胞特异性标记物P63和34βE12联合使用，采用鸡尾酒标记法进行染色，同步观察其表达情况，探讨P63/34βE12鸡尾酒抗体在前列腺穿刺组织中的应用价值。

　　1　材料与方法

　　1.1　材料　选取本院2000年至2005年前列腺穿刺活检标本共98例，其中前列腺良性增生70例，前列腺腺癌28例。患者年龄61岁~90岁，平均年龄70岁。所有标本经10%中性甲醛液固定，常规石蜡包埋，2 μm厚连续切片，每例3张，粘附于经APES处理的玻片上，分别用于P63、34βE12单标记和P63/34βE12鸡尾酒联合标记。P63及34βE12均为单克隆浓缩型抗体，购自上海长岛公司。抗体稀释液及Envision试剂盒为DaKo公司产品。

　　1.2　方法　先用抗体稀释液分别配制P63单克隆抗体(1∶200)和34βE12单克隆抗体(1∶100)若干量，然后将二者等量混合，充分摇匀，备用。免疫组化染色采用Envision二步法，组织切片首先用0.3%过氧化氢阻断内源性过氧化物酶，然后经微波抗原修复，PBS冲洗，分别滴加上述已配制好的一抗，37 ℃孵育45 min，PBS冲洗，滴加Envision试剂，37 ℃孵育25 min，PBS冲洗，DAB显色2 min~10 min，苏木素复染、脱水、透明、封片。

　　1.3　结果判定　P63蛋白阳性定位于前列腺基底细胞的胞核，呈棕黄色，34ΒE12表达于前列腺基底细胞胞质，呈棕黄色，鸡尾酒P63/34βE12阳性细胞胞核、胞浆同时呈棕黄色。着色细胞＞5%为弱阳性(+)；26~50%为中度阳性(++)；＞50%为强阳性(+++)；不着色为阴性(-)。

　　1.4　统计学处理　采用χ2检验。

　　2　结果

　　见表1。

　　表1　P63、34βE12及P63/34βE12标记结果(略)

　　注：各组强阳性率对比，P63与P63/34βE12：χ2=13.26，P＜0.01；34βE12与P63/34βE12：2=31.86，P＜0.01；P63与34βE12：χ2=4.829，P＜0.05。　　
　　
　　70例良性前列腺增生中，P63单标记法基底细胞胞核呈阳性表达，强阳性率为60.0%，少数腺体可见跳跃式阳性，结构不连续，个别腺体未见基底细胞围绕。34βE12单标记基底细胞胞浆阳性，强阳性率为41.4%，部分腺体呈间断性表达，甚至完全阴性；P63/34βE12鸡尾酒标记法染色结果基底细胞胞核及胞质均呈阳性表达，强阳性率为87.1%，极少见不连续表达现象，染色结果明显强于单标记法，强阳性表达率差异有显著性(P＜0.01)。28例前列腺腺癌，P63、34βE12单标记法及P63/34βE12鸡尾酒标记法均未见阳性表达，表达率为0%。

　　图1　P63单标记法，基底细胞胞核阳性，少数腺体可见跳跃式阳性　×100(略)

　　图2　34βE12单标记法，基底细胞胞浆阳性，部分区域可见间断性阳性　×100(略)

　　图3　P63/34βE12鸡尾酒标记法，基底细胞胞核及胞浆同时阳性，未见不连续表达现象　×100(略)

　　3　讨论

　　P63和34βE12均是目前较好的前列腺基底细胞标记物，广泛应用于前列腺疾病的临床病理诊断中［1～3］。由于前列腺穿刺标本较小，病灶局限，所以抗体的敏感性及免疫反应的强弱对诊断起着至关重要的作用。免疫组化染色通常采用单标记法分别对基底细胞进行标记，本实验把两种标记物配对组合，使用鸡尾酒标记法进行染色，同时用单标记法作对照实验，结果显示70例良性前列腺增生中，P63、34βE12单标记法的强阳性表达率分别为60.0%、41.4%，P63/34βE12鸡尾酒标记法的强阳性率为87.1%，其染色结果明显强于P63、34βE12单标记法，差异具有显著性意义(P＜0.01)，表明鸡尾酒法能明显提高免疫反应的强度和敏感性。P63是P53肿瘤抑制基因的同源性基因，位于染色体3q27～3q29区，能特异性地与基底细胞的胞核反应［4］。本实验发现P63能较好显示基底细胞的存在，而腺体分泌上皮细胞呈阴性反应；34βE12标记基底细胞的胞质，部分腺体可见间断性阳性，甚至完全阴性，两者的阳性强度值差异有显著性(P＜0.001)，表明P63比34βE12敏感性强，与报道相一致［5，6］。有学者发现［7］34βE12在前列腺腺癌中可见阳性表达，本组28例前列腺腺癌组织单标记法和鸡尾酒标记法均呈阴性反应，显示了较高的特异性。鸡尾酒标记染色法是针对同一靶细胞的不同靶抗原，可同步观察两种抗原在前列腺病变组织中的不同表达情况，P63阳性定位于胞核，34βE12为细胞浆着色，两者对比鲜明，相互印证，互相补充。在前列腺疾病诊断中，基底细胞是否存在是判断癌与非癌的一个重要指标，文献报道［8］前列腺良性病变有时也会出现基底细胞的缺失，同样我们的实验中单标记法染色结果也发现部分腺体有阴性表达现象，而运用鸡尾酒法染色结果显示，当一种抗体染色阴性时，另一种抗体能够较好弥补其不表达的部分，显示了较完整的基底细胞层，避免了假阴性结果的发生，明显的提高了诊断的准确率，对前列腺病变的诊断及鉴别诊断有重要的临床应用价值。

　　文献：

　　［1］　Weinstein MH,Signoretti S,Loda M.Diagnostic utility of immunohistochemical staining for P63,a sensitive marker of prostatic basal cells［J］.Mod Pathol,2002,15(12):13021308.

　　［2］　Shah RB,Zhou M,Leblanc M,et al.Comparison of the basa;cellspecific markers,34betaE12 and P63,in the diagnosis of prostate cancer ［J］.Am J Surg Pathol,2002,26(9):1161.

　　［3］　Oliai BR,Kahane H,Epstein JI.Can basal cells be seen in adenocarcinoma of the prostate:an immunohistochemacal study using high molecular weight cytokeratin(clone 34betaE12)antibody［J］.Am J Surg Pathol,2002,26(9):1151.

　　［4］　Okada Y,Osada M,Kurata Si,et al.P53 gene family P51(p63)ecoded,secondary transactivator P51B occurs without forming an immunocipitable complex with mdm2,but respond to genotoxic stress by accumulation［J］.Exp Cell Res,2002,276(2):194.

　　［5］　Zhou M,Shah RB,Shen R,et al.Basal cell cocktail(34betaE12+p63)improves the detection of prostate basal cells［J］.Am J Surg Pathol,2003,27(3):365371.

　　［6］　Shah RB,Kunju LP,Shen R,et al.Usefulness of basal cell cocktail(34betaE12+p63)in the diagnosis of atypical prostate glandular proliferations［J］.Am J Clin Pathol,2004,122(4):517523.

　　［7］　余永伟，马大烈，郑青渝等.高分子量角蛋白抗体(34βE12)在前列腺癌诊断中的应用价值［J］.临床与实验病杂志，1999，15(2)：112114.

　　［8］　马建华，白进良，杨晓春.AMACR和P63表达在前列腺癌临床诊断中的价值［J］.中华泌尿外科杂志，2005，26(11)：769771.