慢性肝病患者网织血小板与血小板参数变化的探讨

【关键词】  肝炎;肝硬化;网织血小板;血小板

　　［摘要］目的:分析慢性肝病患者外周血中网织血小板(RP)与血小板参数的变化，探讨慢性肝病患者血小板变化的原因。方法:血球计数仪对正常人群及肝病患者的外周血血小板进行计数，流式细胞术测定网织血小板占血小板的百分比(RP％)。结果：慢性肝炎患者大血小板比率(PLCR)高于正常人群(P<0.05)；肝硬化患者RP计数和RP％与正常人群比差异有显著性(P<0.01)，血小板平均体积(MPV)小于正常人群(P<0.05)。结论: 慢性肝炎患者血小板降低与血小板破坏过多有关；肝硬化患者血小板降低与网织血小板生成减少有关。

　　［关键词］ 肝炎;肝硬化;网织血小板;血小板

　　Exploration of the Variation of Reticulated Platelet and Platelet Parameters in Patients with Chronicliver Diseases

　　Abstract：Objective To investigate the incidence and to explorate the reason of the variation of Reticulated Platelet and Platelet parameters in patients with chronic liver diseases．Methods Reticulated Platelet was detected in patients with liver diseases and healthy controls with flow cytometry method.Results The PLCR in Hepatitis patients was significance higher than that of normal people(P<0.05)；The RP and RP％with liver cirrhosis(LC)patients were significantly lower than that of normal people(P<0.01)，and the MPV in LC patients were significantly lower than that of normal people(P<0.05)．Conclusions These findings suggested that the reasons of PLT decrease in patients with chronic liver diseases due to peripheral destruction while the RP reduce might be one of the reasons of PLT decrease with LC patients．

　　Key words：Hepatitis； Liver cirrhosis；Reticulated platelet；　Platelet

　　网织血小板(Reticulated Platelet，RP)是新释放入血液循环的新生血小板［1］，比成熟血小板体积更大，更加活跃，胞质颗粒粗糙，可以被美蓝染色，胞质中残存RNA成分，是巨核细胞转化为血小板过程中的一种幼稚阶段，测定外周血中RP的数量能反映血小板生成能力；血小板参数与体外血小板功能有较好的相关性，可间接反映血小板功能状况。我们对慢性肝病患者外周血中网织血小板与血小板参数进行测定，以揭示肝病患者血小板变化的原因。

　　1　材料和方法

　　1.1　研究对象　肝病患者104例来源于我院2004年9月至2005年2月肝科住院患者，前采血。其中男72例，女32例，年龄15岁～73岁。慢性肝炎80例，肝硬化24例。正常对照组40例，其中男25例，女15例，年龄18岁～51岁，来源于我院健康体检者。

　　1.2　仪器与试剂

　　1.2.1　FACSCalibur流式细胞仪　美国BD公司产品，用CELLQuest软件(BD公司)获取和分析实验数据。

　　1.2.2　CD61PE单抗(MHCD6104)、噻唑橙(thiazol orange，TO)　由苏州联科公司提供。TO染料先用甲醇进行溶解，再用PBS进行1∶10 000稀释。

　　1.2.3　SF3000血球计数仪　日本东亚公司产品。

　　1.3　标本采集及检测方法　取EDTAK2抗凝静脉血在血球计数仪上测定血小板数(PLT)、血小板平均体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)、大血小板比率(PLCR)。然后将同一份标本制备富含血小板的血浆(RPR)，取10 μlRPR加到含有5 μlCD61PE单抗的流式专用试管中，旋涡混匀后室温避光15 min，加入溶血素100 μl，混匀后室温避光10 min，加入稀释的TO染料500 μl，混匀室温避光30 min。流式细胞仪检测RP占PLT的百分比(RP％)。RP％×PLT计数即得RP的绝对计数值。

　　1.4　统计学处理　文中计量资料用±s表示，统计学软件采用sigmastat 3.1进行分析。

　　2　结果

　　正常对照与慢性肝病患者PLT、MPV、PDW、PLCR、RP计数及RP％的检测结果见表1。

　　表1　正常对照与肝病患者PLT、MPV、PDW、PLCR、RP计数及RP％的比较(略)

　　*注：肝病与正常对照组比较P<0.001，※：肝病与正常对照组比较P<0.05,△：肝硬化组与肝炎组比较P<0.001，#：肝硬化组与肝炎组比较P<0.05

　　3　讨论

　　慢性肝病常伴有血小板的变化，这种变化既有血小板数量的变化，又有血小板功能的改变。RP是由骨髓巨核细胞释放入循环血的最新生成的血小板［1,7］，因此外周血中RP水平被认为是反映体内血小板生成能力极具价值的指标；而PLT、MPV、PDW、PLCR是反应血小板功能的参数。两者同时检测，有助于了解慢性肝病患者血小板变化的原因。本组研究发现，慢性肝炎患者RP％略高于正常对照组，但差异无显著性；RP绝对计数值略低于正常对照，差异也无显著性，说明慢性肝炎患者血小板生成并无障碍，而导致血小板降低的原因可能性是破坏过多，一般认为与脾脏的吞噬、血小板相关抗体的存在等有关。也有研究认为［5］，慢性肝炎患者血小板数目减少主要原因为血小板发生质的改变，血小板膜唾液酸糖蛋白减少被以肝为主的网状内皮系统吞噬使其寿命缩短，而并非单纯与脾脏有关。而肝硬化患者RP绝对计数值和RP％均显著低于正常对照，与Koike Y报道的结果基本一致，其原因可能是肝硬化患者血小板生成素降低，血小板生成障碍所致［3］。有研究表明［2］，若血小板破坏增多而引起血小板减少时MPV增大；若骨髓生成受损导致血小板减少时MPV减小，这与本文所得结论基本一致。在本组研究发现，尽管慢性肝炎患者MPV略高于正常对照组，差异无显著性，但其PLCR显著高于正常对照组。再次证明慢性肝炎患者血小板降低的原因可能性是破坏过多，这与网织血小板的检测结果形成对应。PDW是反映血小板体积大小是否均匀的参数，升高说明血小板大小不一，通常MPV增大PDW也增大，而大体积血小板常提示代谢活跃，粘附力与聚集力相对较强［8］。大血小板的出现也是机体对血小板减少的一种有效代偿。同样，肝硬化患者MPV显著低于正常对照组，可能由于肝硬化患者肝细胞受损，合成TPO受到影响。肝细胞受损越严重，合成TPO的量越少，则作用于巨核细胞的TPO的量也就越少，生成的网织血小板减少，故血小板数量和MPV均下降。有研究［8］表明肝硬化患者肝脏受损程度与MPV有关，即肝脏受损越严重MPV越低。因此，MPV也可以作为评价肝脏受损的指标之一。肝硬化患者血小板、MPV均降低，血小板功能低下，这也是肝硬化止血功能障碍的原因之一。临床上通过监测肝硬化患者的MPV，对初步评价肝脏受损程度及患者出血倾向有重要的指导意义。

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