HLA-B27阳性患者的血管紧张素转换酶基因检测分析
作者：徐茜，邢桂芝，陈梦芝，马荣芬
【关键词】 强直性脊椎炎
摘要：目的：探讨ACE基因多态与HLA-B27阳性的关系。方法：应用 PCR扩增方法检测68例HLA-B27阳性患者和50例正常对照者ACE基因的16内含子中的287bp片段缺失/插入多态性。结果：HLA-B27阳性患者ACE基因插入纯合型(I/I)频率明显高于正常对照X2=4.21，p<0.05。结论：ACE基因插入纯合型(I/I)与HLA-B27阳性患者即强直性脊椎炎患者的易感性有关。
关键词： 血管紧张素转换酶基因； 基因多肽性； 强直性脊椎炎
Analysis of Angiotensin Convertible Enzyme (ACE)gene to HLA-B27 Positive Patients
Abstract： Objective: To study the relationship of ACE gene and HLA-B27 . Method:ACE gene was analyzed for inserting and losing polymorphism of the 287 fragment in intron 16 by polymerase chain reaction(PCR). Result: The analysis revealed that the frequency of homozygous insertion of ACE gene(I/I) in HLA-B27 positive group(68 cases) is obviously higher than that of normal group(50 cases). Conclusion: The result supports that the homozygous insertion type of ACE gene(I/I) could be involved in the HLA-B27 positive patients so as to as patients.
Key words: Angiotensin convertible enzyme(ACE)； Gene polymorphism； Askylosing spondylitis(AS)
强直性脊椎炎（AS）是严重的脊椎关节病，其合并症和致残率很高。其发病机理至今尚未完全阐明。近年来许多资料表明AS与遗传因素有关［1］。作者进行的实验研究，为从基因水平探索AS的发病机理提供了可能性。
1 材料和方法
1.1 病例选择：病例来自我院风湿免疫门诊就诊患者，经HLA-B27血清学检测为阳性患者同时伴有自觉症状，且经过影像学X片的检查，或采用骶髂关节CT检查确诊为AS的患者68例。男57例，女11例，男女比例5:1。最小年龄为2岁，最大年龄为54岁，平均年龄为26.5岁。
1.2 基因分型
1.2.1 基因组DNA提取：取外周血5ml，用2%EDTA-Na2抗凝（V：V=10：1）低渗破坏红细胞。酚/氯仿法从白细胞中提取基因组DNA，A260：A280≥1.8。
1.2.2 PCR扩增反应：ACE基因16内含子引物序列同［2］。反应体系25μl，含正向（P1）反向（P2）引物各4pmol，5x缓冲液5μl，DNA 0.05～0.1μg， 4种DNTP各125pmol， Taq DNA聚合酶0.5μ，混匀，表面覆盖液体石蜡。94℃预变性2min，然后94℃变性1min，58℃退火2min，72℃延伸1.5min，35个循环。
1.2.3 基因型鉴定：PCR产物用2%琼脂糖凝胶（含0.5μg/ml溴化乙啶）在100V电压下泳动20min，紫外灯下观察结果并确定基因型别。①显现490 bp一条区带者为ACE基因插入纯合型（I / I）。②只显现190 bp一条区带者为ACE基因缺失纯合型（D/D）。③如果490 bp和190 bp两条区带均显现者，则为ACE基因插入/缺失杂合型（I/D）。
1.3 统计学分析：两组基因型频率，组间频率比较用X2检验。P<0.05为统计学上有显著差异性。
2 结果
2.1 正常对照组与B27阳性组基因型频率，见表1。
2.2 ACE基因16内含子中287 bp片段插入/缺失多态性电泳结果显示: B27阳性组较正常对照组的ACE基因插入纯合型（I/I）频率明显升高。相对数值分别为X2=4.21，P<0.05具有统计学意义。
表1 正常对照组与B27阳性组基因型频率（略）
2.3 如表1显示：68例HLA-B27阳性患者中I/I基因型的I等位基因明显增加，表明ACE的插入纯合型基因与AS的易感性有关。
3 讨论
HLA-B27是人类白细胞抗原B位点上的一个重要的等位基因，与脊椎关节系统的疾病，如强直性脊椎炎（AS）、反应性关节炎（ReA）、Reiter氏综合症（RS）等许多严重危害人类健康的疾病密切相关［3，4］，AS是多基因多因素引起的复杂疾病。随着近年来实验室诊断水平的逐步提高，新的实验方法的引进对配合辅助临床早期诊断、、减少并发症和致残率具有重要意义。
近年来研究资料表明，AS患者的上一辈都有其相似的关节疼痛，风湿性疾病等症状，经检查都具有相同的B27抗原，即有明显的遗传倾向（显性遗传基因），遗传因素在AS的发病中的作用倍受关注。国内外的许多学者曾对ACE基因的缺失和插入多态性与糖尿病肾病、原发性高血压、SLE等遗传相关性做了许多研究。本文作者为探讨AS患者与ACE基因的缺失和插入多态性相关性，检测了68例HLA-B27阳性患者的血管紧张素转换酶（ACE）基因同时与正常对照组做了检测，结果显示：B27阳性患者（患AS）ACE基因多为I/I型即插入纯合型，且较正常对照组的基因型频率高出许多。因此推断B27阳性患者携带的 I 等位基因是易引发AS的易感基因，至于是何机理有待进一步研究。据报道人HLA-B27频率为7.0%［5］，但因地域的差异此抗原频率有所不同，本地区HLA-B27频率与报道大致相同。
文献：
［1］ 蒋黎华.上海免疫学杂志，1994，14（4）：240．
［2］ Li Y, Qincc, Zhou WY et al. Gene polymorphism of the reninangiotensin system in essential hypertension［Ｊ］．Chinese Medical Journal，1999，122:115-120．
［3］ Mcmichel A, Bell J. HLA-27: a disease-associated immune response gene［Ｊ］. Res Immunol, 1991，142:475.
［4］ Feltkamp Tew. The pathogenetic role of HLA-B27［Ｊ］. Scand pheumatol, 1990， 87: 9.
［5］ Lahesmaa R, Skurnik, Toivanen P, Molecular mimicry: any role in the pathogenesis of spondy learth ropathies［Ｊ］． Immunol Res,1993，12:193.
