PTEN基因蛋白与Ⅰ型子宫内膜癌预后的关系

                                 作者：徐琳 江敏　普苹 付红梅 杨映芳

【关键词】  免疫组织化学SP法

　　【摘要】 目的  研究PTEN基因蛋白在Ⅰ型子宫内膜癌中的表达，探讨其与Ⅰ型子宫内膜癌预后的关系。 方法  应用免疫组化SP染色法检测PTEN基因蛋白在35例Ⅰ型子宫内膜癌组织中的表达，采用Kaplan-Meier生存率曲线描述Ⅰ型子宫内膜癌中PTEN表达组和未表达组的术后生存率，并采用Log-Rank检验分析组间差异。 结果  35例Ⅰ型子宫内膜癌PTEN蛋白表达缺失率为65.71%。14例患者随访资料完整，其中PTEN未表达组患者的中位生存期576.00天，PTEN表达组患者的中位生存期918.00天。PTEN表达组的生存率明显高于PTEN未表达组。 结论  PTEN可能是Ⅰ型子宫内膜癌中突变率较高的基因，PTEN蛋白表达是I型子宫内膜癌患者预后良好的标志。
    
　　关键词  Ⅰ型子宫内膜癌 PTEN 预后 免疫组织化学SP法
        
　　Prognostic correlation of tumor-suppressor gene PTEN in type I endometrial carcinoma.
   
　　【Abstract】 Objective To determine the potential role of PTEN expression in the prognosis of type I endome-trial carcinoma.Methods Expression of PTEN was detected by immunohistochemical staining SP method.Results We detected loss of PTEN protein expression in23cases of35type I endometrial carcinoma.The median survival time of PTEN-positive cases was918days，while that of PTEN-negative cases was576days.The survival rate of PTEN-positive cases was significantly higher than that of PTEN-negative cases.Conclusion The loss of PTEN expres-sion is relatively frequent in type I endometrial carcinoma.PTEN-positive staining is a significant prognostic indicator of favorable survival for patients with typeⅠendometrial carcinoma.
   
　　Key words type I endometrial carcinoma PTEN prognosis immunohistochemistry SP method
      
　　子宫内膜癌是女性生殖道最常见的三大恶性肿瘤之一，其确切病因尚不清楚。根据子宫内膜癌的病理及临床特征，可分为两型:雌激素相关型与非雌激素相关型。前者分化较好，预后良，发病年龄相对年轻（大部分在绝经前）;后者分化差，子宫内膜多萎缩，发病年龄相对较大（大部分在绝经后） ［1～5］ 。随着分子生物学技术的，人们认识到癌是一种基因病，有3种特殊的基因（即癌基因、抑癌基因、DNA损伤修复基因）参与癌的发生、发展。其中抑癌基因PTEN与I型子宫内膜癌的关系是目前研究的热点。PTEN基因与I型子宫内膜癌预后的关系，目前国内尚未见这方面的报道。我们用SP免疫组化法对Ⅰ型子宫内膜癌组织中PTEN蛋白表达情况进行研究，旨在探讨PTEN蛋白表达与Ⅰ型子宫内膜癌患者预后的关系。

　　1 材料与方法
    
　　1.1 病例和标本 选取1998年1月～2003年8月我院病理科存档处手术切除的Ⅰ型子宫内膜癌患者35例的石蜡标本，35例患者年龄26～73岁，平均（52.89±12.20）岁，术前均未接受放疗、化疗及性激素类药物。其中14例患者随访资料完整，死亡9例，存活5例。同时选取同期因其它原因行子宫切除的10例正常子宫内膜组织作对照，年龄32～62岁，平均（44.30±10.54）岁。
     
　　1.2 试剂和方法 鼠抗人PTEN单克隆抗体、SP试剂盒及DAB KIT染色剂均购自福州迈新公司。石蜡切片常规脱蜡至水，高压抗原修复，血清封闭，滴加1∶200PTEN鼠抗人单克隆抗体4℃过夜，生物素标记的第二抗体室温下孵育10min，再以链霉菌抗生物素―过氧化物酶溶液室温下孵育10min，最后用DAB显色，苏木素复染，酒精梯度脱水，二甲苯封片，每一步骤间均用PBS（pH7.4）缓冲液冲洗3次，每次3min。每批均设阴性对照和阳性对照，阳性对照为正常的子宫内膜组织切片，阴性对照为未加一抗的PBS缓冲液，实验条件严格一致。
   
　　1.3 结果判断和分析 高倍镜（×400）下综合染色强度和阳性细胞所占比例进行半定量测定。染色强度评分标准:不着色0分，黄色1分，棕黄色2分，黄褐色3分。阳性细胞所占比例评分标准:阳性细胞数<10%者0分，10%～40%者1分，40%～70%者2分，≥70%者3分。两种评分相加，0～1分为阴性，2分为弱阳性，3～4分为阳性，5～6分为强阳性。统计学处理采用Kaplan-Meier描绘生存率曲线，Log-Rank检验组间差异。

　　2 结果
    
　　2.1 PTEN蛋白在各类组织中的分布 PTEN蛋白定位于正常子宫内膜腺上皮细胞胞浆，阳性细胞呈弥漫性或局灶性分布;恶性变的细胞表现为PTEN蛋白表达减弱或缺失。35例Ⅰ型子宫内膜癌中，23例阴性表达，11例弱阳性表达，1例阳性表达，表达缺失率为65.71%。2.2 PTEN蛋白表达与Ⅰ型子宫内膜癌预后的关系 Ⅰ型子宫内膜癌组织中，PTEN未表达组患者的平均生存天数（619.56±73.87）天，中位生存期576.00天;PTEN表达组患者的平均生存天数（1070.50±87.52）天，中位生存期918.00天。PTEN未表达组的生存率曲线较PTEN表达组差，经    Log-rank检验，示两组间生存率差异有显著性（χ 2 =5.54， P=0.0185）。详见表1，图1。
    
　　表1 14例Ⅰ型子宫内膜癌术后生存天数略
 
　　图1 Ⅰ型子宫内膜癌PTEN表达组与PTEN未表达组的生存率曲线图略

   
　　3 讨论
    
　　PTEN基因是1997年Li等 ［6，7］ 在人染色体10q 23.3 分离得到一个新的具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因。PTEN基因突变或缺失导致磷酸酶活性丧失，使细胞发生恶性转化。PTEN蛋白水平与子宫内膜癌预后的关系，是近几年许多学者关注的问题。Kanamori等 ［8，9］ 对98例I型子宫内膜癌患者进行术后随访发现，PTEN蛋白表达阳性组的生存率明显高于PTEN蛋白表达阴性组分别为62.4%和11.8%，提示PTEN蛋白表达水平有预测预后的价值。I型子宫内膜癌PTEN蛋白表达提示预后良好，可能与PTEN基因的下列作用机制有关:（1）PTEN通过对细胞内第二信号分子磷脂酰肌醇（3，4，5）-三磷酸（PIP 3 ）去磷酸化 ［10］ ，抑制依赖PIP 3 的磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白磷酸激酶B（PI 3 K/PKB）信号传导通路的活性，影响其下游通路的作用靶（包括G 1 期细胞依赖激酶抑制因子P 27kipl 、翻译抑制因子4EBPl等）的磷酸化水平，从而诱导凋亡，并介导G 1 期停滞，影响基因的表达，对细胞生长具有负性调节作用 ［11～13］ 。（2）PTEN氨基酸序列与张力蛋白和辅助蛋白高度同源，PTEN基因可能通过调节细胞聚集粘附功能，影响肿瘤细胞的浸润和转移 ［14，15］ 。本研究也同样发现，35例I型子宫内膜癌中，PTEN表达组的中位生存期为918.00天，PTEN未表达组的中位生存期为576.00天。同时Kaplan-Meier生存率曲线也非常直观的反映PTEN表达组的生存率明显高于PTEN未表达组（P=0.0185）。提示PTEN蛋白表达水平可以作为判断I型子宫内膜癌预后的分子标志物，为临床提供指导。
     
　　
    
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