乳胶凝集试验快速诊断轮状病毒的临床应用
［关键词］ 轮状病毒;乳胶凝集;腹泻;胃肠炎
The Clinical Application of the Rapid Diagnosis of Rotavirus
ZHANG Shao?bin,XU Lu,HE Mu
(The Center Hospital Longgang，Shenzhen ，Guangdong 518116，China)
Abstract： Objective To research into the clinical application of the rapid diagnosis of Rotavirus .Methods A rapid diagnosis of fecal specimens take from the 153 case 1?7 years old children was successfully determined by the kit for rapid identification of Rotavirus cause of diarrhoea and gastroenteristis using the Rotavirus latex agglutination test. Results The positive detecting rates of diarrhoea and gastroenteristis patients by infection Rotavirus were 46.25%(37/80), 38.36(28/73). Total positive rate of the 153 cases was 42.48%(65/153).These results of test were obtained within two minutes .In the positive results , non of the positive cases showed cross agglutination phenomena , complete identified with clinical diagnosis .Conclusion The procedures involved in the test are simple , the diagnosis in fast ,and the result is high accurate and specific . This method is particularly suitable for the use in rural hospital.
Key words： Rotavirus;Latex agglutination; Diarrhoea; Gastroenteristis
自从1973年轮状病毒在人体被检测出来后，已被证明是造成婴儿与儿童腹泻性疾病的主要病因［1］。近10年来对轮状病毒的研究与流行病学的调查，已发现全世界因急性腹泻或胃肠炎而入院的婴儿与儿童病例中，有50%～60%是因此病毒感染所引起，在世界各地都有散发性的流行［2］。轮状病毒的快速检测，对轮状病毒所致腹泻或胃肠炎的患儿提供了及时准确的客观依据，对帮助临床上治疗有很重要意义。我们应用了Murex公司的乳胶凝集试验(The Murex Rotavirus Latex Agglutination Test)的快速鉴定法，对来我院就医的有腹泻或胃肠炎症状的患儿进行轮状病毒的快速诊断，现将结果报告如下。
1 资料与方法
1.1 资料
1.1.1 一般资料 2005年9月至2006年3月期间因腹泻症状来我院诊治的1岁～7岁患儿153例,其中男89例，女64例。
1.1.2 轮状病毒的快速诊断试剂盒 含1瓶试验乳胶悬浮液(Test Latex Suspension),1瓶质控乳胶悬浮液(Control Latex Suspension),1瓶阳性质控抗原液(Positive Control Antigen),1瓶抽提液(Extraction Buffer),还有25个滴加标本和试剂反应用的纸板和小木棒，皆由法国Murex公司生产并提供。
1.1.3 检查标本 患儿的大便标本，收集患儿标本时是用清洁的塑料瓶子装盛，试验中所需标本量约1 g左右。
1.2 方法 按Murex公司的轮状病毒乳胶凝集试验的方法进行。由于试剂盒是放2 ℃～8 ℃保存，所以首先要把试剂盒放于室温18 ℃～25 ℃一段时间，约10 min。取约1 g患儿大便标本放于1支清洁玻璃试管内，再加入1 ml抽提液，充分摇匀，静置5 min，再充分摇匀，然后离心沉淀3 000 r/10 min，吸取上清液，如图所示滴加标本与试剂。其中Test Latex ，Control Latex各加1滴(约40 μl)，标本上清液约加40 μl，用试剂盒内供应的小木棒搅匀，再摇动2 min，然后观察结果。
图1 吸取上清液滴加标本与试剂（略）
1.3 结果判定方法 Test Latex与上清液混匀，出现一定数量的白色小凝集块，不随摇动而散开，同时Control Latex与上清液混匀无白色小凝集块出现，为阳性结果。Test Latex与上清液混匀，无凝块出现，摇动时混合液像白色牛奶状均匀，Control Latex与上清液混匀，无白色小凝集块出现，为阴性结果，若是Control Latex与上清液混合出现白色小凝集块，而Test Latex与上清液混合无白色凝集块出现，则表示是非特异反应(Non?specific Reaction)或是标本取样不正确。若是Test Latex，Control Latex与上清液混匀均出现白色凝集，则要取标本重做，且要看：如果Test Latex与上清液混匀先出现白色凝集，而Control Latex与上清液混匀均后出现白色凝集，则结果判断为阳性，反之，则判断为阴性。
2 结果检测
共153例患儿，总阳性率为42.48%，其中轮状病毒致小儿腹泻的阳性检出率为46.25%，致小儿胃肠炎的阳性率为38.36%，均于2 min内得出结果，阳性结果中无一例出现交叉凝集现象，见表1。
表1 153例1岁～7岁患儿轮状病毒快速检测结果与临床诊断比较（略）
3 讨论
引起腹泻的病原有多种，其中轮状病毒是婴幼儿急性腹泻的主要病原，WHO已将轮状病毒感染纳入全球腹泻病控制和免疫规划［3］。轮状病毒在界中分布很广，会感染多种动物，感染人的轮状病毒具有共同的族抗原。轮状病毒主要是由粪—口(Fecal?Oral)的传染途径而致病，多在冬季和初春流行，此特点可与细菌性痢疾区别。病毒在肠道绒毛细胞质中增殖、破坏细胞，在脱落坏死的细胞中含有大量病毒随粪便排出，因为绒毛细胞被破坏引起腹泻，造成电解质与水分的损失，而导致脱水、酸中毒和休克。婴幼儿感染轮状病毒若不加以及时，严重的丧失电解质与体液，可能会有生命危险，因此轮状病毒的及时、准确快速检测，对临床的治疗具有重要意义［4］，用于轮状病毒检测的实验诊断方法很多，有电镜、核酸电泳、免疫荧光、ELISA等，但这些方法尚不能快速诊断，或设备昂贵、操作繁琐，很难向临床提供及时的诊断依据［5］。乳胶凝集试验检测轮状病毒是一种操作简便、快速的诊断方法，粪便中轮状病毒抗原阳性，可诊断为轮状病毒性腹泻或胃肠炎［6］。根据以上临床应用的结果来看，可知道：该法检测结果准确，从阳性结果完全符合临床诊断和无一例交叉反应可说明。此外，乳胶试剂中加有非特异性凝集抑制剂，还有乳胶质控试剂，防止假阳性。乳胶质控试剂是以与抗体同一物种的非免疫动物的血清球蛋白致敏的乳胶试剂；该法检测快速、操作简便、所需设备简单，而且易学易掌握。因而，它可以作为轮状病毒的常规检测方法在我国基层医疗单位推广应用；值得注意：该法存在细菌交叉反应，患儿粪便中的肠道的病原细菌或白色念珠菌，偶然也会被试剂盒检测出，以致结果出现假阳性，这个时候要结合临床症状，做细菌培养和用ELISA方法检测轮状病毒抗体。
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