ELISA检测HBsAg室内质控血清的制备和应用

【摘要】  目的  为了提高HBsAg检测质量，自制BHsAg室内质控血清，以降低假阳性、假阴性的出现率，相应提高检测的准确度。方法  采用不同厂家的诊断试剂检测，将质控血清分装放在不同温度下保存后多次测定。结果  经统计处理三者之间无显著差异(P>0.05)。结论  自制HBsAg室内质控血清稳定，易保存，能反映常规检测精密度，该质控血清适宜作HBsAg室内质控使用。
【关键词】  HbsAg  室内质控  ELISA
        乙型肝炎是我国发病率较高的疾病之一，除现症病人外约有10%的人群为乙肝携带者，其临床诊断主要依赖于临床检验结果，而实际工作中HBsAg检测结果往往出现假阳性、假阴性，给患者造成误珍，延误诊治时间[1]。鉴于此，笔者以卫生部临床检验中心提供的HBsAg临界值血清为模板，然后自制HBsAg的临界值质控血清，并应用于常规条件下的室内质控，大大降低了假阳性、假阴性的发生。现报道如下。
        1 材料与方法
        1.1 材料
        1.1.1标本收集  用无菌管收集临床与检验确诊为“乙型病毒性肝炎患者”的血清，外观需无溶血、脂血、黄疸、无污染、清晰透明。收集20份左右，约10ml，充分混匀，分装后置4℃和－20℃冰箱保存备用。
        1.1.2血清  卫生部临检中心提供的乙型病毒临界值血清，批号“0805”，含量2ng/ml。
        1.1.3试剂与仪器  上海实业科华生物技术有限公司提供的HBsAg ELISA检测试剂盒；北京万泰生物药业股份有限公司提供的HBsAg ELISA检测试剂盒；DLA-960酶标仪；AMPW自动洗板机；YDME微量振荡器。
        1.2 实验与方法
        1.2.1确定稀释度  用灭活2H2O稀释混合血清成不同稀释倍数，严格按照试剂盒操作说明，常规条件下与卫生部临检中心提供临界值血清同测，测得1/400倍时其OD、S/CO值与卫生部临检中心提供的临界值血清接近。
        1.2.2分装备用  将混合血清作1/400倍的大批量稀释，其中小牛血清占15%，二甲亚砜占0.5%，叠氮钠占0.3%,混匀灭菌分装、冷藏和冰冻保存。
        1.2.3标本处理  取4℃和－20℃冰箱保存的质控血清置56℃10小时灭活后离心沉淀，过滤除菌。
        2 实验结果 
        2.1 取1/400倍稀释血清连续20次重复测定，两种试剂两种批号的结果差异不大
        2.2 将4℃冷藏一周和－20℃冷冻一月的稀释血清随机抽取质控血清，连续检测20次
        2.3 统计学方法  所有指标用OD均值X，SD的均值S，以X±S表示，采用SpSS10.0软件统计，比较采用配对t检验。
        3 讨论
        3.1 在实验室常规操作进行中测得S/CD均值为1.15，保证了实验的可靠性，且该实验质控血清显示结果时颜色较浅，但肉眼仍可与阴性对照明显区别。
        3.2 按我国临床实验室条件和试剂生产水平，卫生部HBsAg（ELISA）临界值血清标准为2ng/mL]。其OD值在0.056左右，S/CO均值为1.15，SD为0.002593，CV为4.6%,4℃和－20℃保存后连续检测结果0D值在0.059左右，SD值0.002900左右，CV为5.3%左右，S/CO的均值为1.16。说明该自制质控血清较稳定。
参 考 文 献
[1]赵祥胜.乙型肝炎表面抗原室内质控血清制备及质量保证的控讨，武汉医学杂志，1995，19(3)：191-192