针刺对面瘫大鼠面神经组织中不同类型一氧化氮合酶的影响

                       作者：项柏冬，李伟洪，孙晶，刘洋

【摘要】  目的:探讨针刺周围性面瘫的最佳治疗时机。方法:将面瘫大鼠分成模型组、期组、静止期组，观测针刺后各组一氧化氮合酶阳性神经元的变化。结果:针刺可使面神经组织中iNOS表达减少，nNOS表达增强，在发展期尤为明显。结论:在面瘫的发展期进行针刺的疗效要明显优于静止期。

【关键词】  一氧化氮合酶;面瘫;大鼠;针刺

　　周围性面瘫是临床常见病之一，针灸治疗虽然疗效肯定但同时又存在诸多问题。目前，针灸治疗本病的主要问题在于分期、刺法、耳穴和时机的探讨上，尤其对周围性面瘫的最佳治疗时机，诸家见解不一。本实验通过观测不同类型一氧化氮合酶（NOS）水平的表达，对针刺的最佳治疗时机进行探讨。

　　1 材料与方法
    
　　1.1 材料 健康Wistar雄性大鼠36只，体重200～300g，由长春高新医学动物实验研究中心提供;一氧化氮合酶，武汉博士德生物工程有限公司提供;PV-6001两步法检测试剂盒，ZLI-9018型DAB显色试剂盒，北京中山生物技术有限公司提供。

　　1.2 方法
   
　　1.2.1 模型制作方法［1-2］  取大鼠，20%乌拉坦腹腔注射，待其麻醉后仰卧位固定，沿左侧面部耳根至嘴角区域备皮，消毒皮肤，剪开皮肤找到面神经总干，用止血钳夹持30s后缝合。成功模型可见大鼠两侧胡须明显不对称，患侧胡须集中向后，患侧眼裂变大。

　　1.2.2 分组及针刺方法 将36只大鼠随机分为3组:模型组，发展期组，静止期组。耳穴［3-4］ :地仓、颊车、翳风、太阳。针刺方法:用0.32mm×25mm毫针针刺各个穴位约0.5～0.8cm，每只大鼠每日针刺1次，连续治疗7d。
   
　　1.2.3 免疫组织化学染色 取出大鼠面神经放入4%多聚甲苯溶液4摄氏度冰箱保存。将保存好的面神经，梯度酒精脱水，浸蜡包埋，切片，片厚5μm，贴片，62℃烤箱过夜，二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，免疫 组织化学染色，显微镜观察。
   
　　1.2.4 统计学方法 等级资料用Ridit分析，R<0.05为有显著性差异，P<0.01为有极显著性差异。

　　2 结果
    
　　2.1 3组神经型一氧化氮合酶（nNOS）在面神经组织中的表达，见表1。
    
　　表1 3组nNOS在面神经组织内的表达（略）

　　注:组间比较*P<0.05
    
　　2.2 3组诱导型一氧化氮合酶（iNos）在面神经组织内的表达 见表2。
    
　　表2 3组iNOS在面神经组织内的表达（略）

　　注:组间比较*P<0.05。
    
　　3 讨论
    
　　在神经系统中NO能够参与多种生理功能，在缺血、损伤等病理情况下，NO不但可以表现出严重的神经毒性加重神经的损伤，而且又有对神经的保护功能。NO是由一氧化氮合酶（ni-trcoxide synthase，NOS）催化底物左旋精氨酸（L-Arg）而生成，一氧化氮合酶的亚型根据其来源和表达方式分为3种:内皮型NOS（endothelial NOS，eNOS）、神经型NOS（neuronal NOS，nNOS）及诱导型NOS（in-ducible NOS，iNOS）。
 
　　eNOS在神经系统中表达较少，nNOS具有神经保护作用，在细胞生理状态时即有表达，iNOS在各种原因引起的神经损伤时，表达增加，加重神经的损伤。
   
　　本实验免疫组化研究结果表明，针刺可使损伤面神经组织中iNOS表达减少，nNOS表达增强，但对eNOS的表达无显著影响。结果提示针刺可通过抑制iNOS，激活nNOS，有效改善神经损伤，促进神经组织的恢复，其作用在面瘫期尤为明显［3-4］ 。 

【】
  　　［1］王立军，周树夏，董邵忠，等.大鼠创伤性面瘫实验动物模型的建立［J］.实用口腔医学杂志，1999，15（3）:183.

　　［2］杨晓顺，杨举伦.实验性大鼠坐骨神经损伤与再生的病观察［J］.临床与实验病理学杂志，2000，16（1）:55.

　　［3］华兴帮，李辞容，周浩浪，等.大鼠穴位图谱的研制［J］.实验动物与动物实验，1991，（1）:1.

　　［4］邓永志，李 振，宁 飞.多针浅刺分期治疗周围性面瘫［J］.长春中医药大学学报，2006，22（1）:38.