肝癌组织中 Survivin 蛋白、PCNA 的表达及其与预后的关系
作者：赵宗刚 詹勇强 倪勇 张敏杰 王成友
【摘要】 目的：探讨人肝癌组织中 Survivin 蛋白及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达及其与预后的关系。 方法：应用免疫组织化学染色对 46 例原发性肝癌组织中 Survivin 蛋白与 PCNA 的表达情况进行检测，并结合临床预后进行分析。 结果： 46 例肝癌组织中 Survivin 蛋白表达阳性率为 67.4%；Survivin 蛋白表达阳性者肝癌细胞增殖指数显著高于表达阴性者；Survivin 蛋白表达阴性患者与表达阳性患者比较，1 年生存率差异无显著性意义，但 2 年生存率前者显著高于后者。 结论：Survivin蛋白对促进肝癌细胞快速增殖具有重要作用，Survivin 蛋白的表达可以作为预后不良的重要指标。
【关键词】 肝细胞癌；Survivin；增殖细胞核抗原；预后；免疫组化
〔Abstract〕Objective To study the expression of survivin protein and proliferating cell nuclearantigen (PCNA) in hepatocellular carcinoma (HCC) and the prognosis of HCC. Methods The expression of survivin protein and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in 46 cases of HCC were determined by immunohistochemistry method. Results The survivin protein expressed in 31 of 46cases of HCC (67.4%). The expression of PCNA was significantly higher in the HCC with positive survivinexpression than in the HCC with negative survivin expression. The patients with positive survivin expression had a worse survival rate of 2-year than the patients with negative survivin expreswith the prognosis of HCC.
Immunohistochemistry
肝细胞癌是常见危害人类健康的恶性肿瘤。细胞增殖和细胞凋亡平衡的破坏可促使细胞的恶性转化，最终导致肿瘤的发生、。Survivin 是一个新发现的凋亡蛋白抑制剂（IAP）家族成员，具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重功能，是联系细胞周期和细胞凋亡界面的重要因子[1]。Survivin 在多种恶性肿瘤细胞中过表达，而几乎不见于成人的正常组织。本研究旨在探讨 Survivin 与增殖细胞核抗原（PCNA）在肝癌组织的表达及其与肝癌预后的关系。
1 资料与方法
1.1 研究对象 收集深圳市第二人民自2000 年 1 月至 2004 年 4 月手术切除且随访资料完整的原发性肝细胞癌组织标本 46 例，其中男 37 例，女 9 例，年龄 36~67 岁（平均 51.3 岁）。均经病检查证实为肝细胞癌。标本均经 10% 甲醛固定，常规石蜡包埋。
1.2 方法 采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化酶连接（SP）法检测 Survivin 蛋白及增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白的表达，操作按试剂盒（Labvision 公司，美国）说明书进行。
Survivin 蛋白阳性染色呈棕黄色颗粒，在高倍镜（×200）下随机选择 5 个肿瘤区域，癌细胞中 Survivin 蛋白阳性细胞数 < 10% 者为阴性，≥ 10% 者为阳性，≥ 60% 者为强阳性。按 Survivin 蛋白的表达为阴性、阳性和强阳性，将患者分为 A 组、B 组和 C 组。
PCNA 阳性染色位于细胞核内，呈棕黄色颗粒，计数癌细胞数及 PCNA 蛋白染色阳性细胞数，并按下式增殖指数（proliferation index, PI）：
PI = PCNA 染色阳性细胞数/癌细胞数×100%。
1.3 统计学处理 所有数据应用 SPSS 11.0 统计软件进行统计学处理，计量资料以平均值±标准差（x±s）表示，组间比较采用方差分析。计数资料采用 检验。显著性水准取 α = 0.05。
2 结 果
Survivin 蛋白的表达定位于肝癌细胞核和胞浆，阳性染色呈棕黄色颗粒。46 例肝癌中有 20 例Survivin 蛋白表达呈阳性（图 1），11 例表达呈强阳性（图 2），总表达阳性率为 67.4%（31/46）。PCNA 阳性染色呈棕黄色颗粒状，定位于肝癌细胞核，细胞浆未见着色（图 3）。
各组肝癌病人 PI、1 年生存率及 2 年生存率的比较结果见表 1 和表 2。
3 讨 论
Survivin 是一个新发现的 IAP 家族成员，具有抑制细胞凋亡和调节细胞有丝分裂的双重功能，是联系细胞周期和细胞凋亡界面的重要因子[2]。Ambrosini G 等[2]报道用免疫组化和原位杂交检测肺癌、结肠癌、乳腺癌、胰腺癌和前列腺癌，在所有病例中Survivin 均显著表达，而在邻近正常组织均无Survivin 出现。Survivin 还被发现存在于结肠息肉、乳腺炎、角化皮炎等一些癌前损伤组织中，说明 Survivin 基因的表达出现在恶性转化前期，并可能具有促进这些损伤恶性转化的作用[3]。因此，有关 Survivin 与恶性肿瘤关系的研究逐渐受到人们的重视。
正常情况下，Survivin 的表达具有细胞周期依赖性，只在细胞周期的 G2-M 期表达。在有丝分裂的开始，Survivin 与纺锤体的微管蛋白特异性结合，维护有丝分裂的正常进行。干扰 Survivin 和微管蛋白的反应，可致 Survivin 抗凋亡活性的丧失，增加caspase-3 的活性，导致细胞的 G2-M 期凋亡，细胞分裂异常，伴有多倍体细胞形成[4]。这些结果提示，在细胞周期的 G2-M 期，Survivin 能对抗异常因素诱导的细胞凋亡，而在肿瘤细胞中，Survivin 的过度表达，则可能使细胞克服这个凋亡的调控点而利于转化细胞，完成异常的有丝分裂。
本研究采用免疫组化方法观察了 46 例肝癌组织中 PCNA 和 Survivin 蛋白的表达，结果发现，67.4% 的肝癌中有 Survivin 蛋白表达，Survivin 蛋白表达阳性者肝癌细胞增殖指数显著高于表达阴性者。研究发现，Survivin 基因的表达与肝癌细胞 PI 密切相关， Survivin 表达阳性的 PI 明显高于 Survivin 表达阴性的 PI，表明 Survivin 基因在肝癌中的异常表达与肝癌细胞增殖活性升高有关，可能促进肝癌细胞的恶性增殖。本研究还发现，Survivin 蛋白表达阴性患者与表达阳性患者比较，1 年生存率差异无显著性意义，但 2 年生存率前者显著高于后者，表明肝癌组织中 Survivin 蛋白的表达情况可作为一个判断肝癌病人预后的有效指标。
肝细胞癌组织中 Survivin 的表达与 PCNA 的表达具有相关性，Survivin 高表达者 PI 比较高。肝癌组织中 Survivin 的表达情况可作为一个判断肝癌病人手术预后的指标。
【参考】
〔1〕Ambrosini G, Adida C, Altieri DC. A novel anti-apoptosis gene, surviving, expressed in cancer and lymphoma〔J〕. Nat Med, 1997, 3(8):917-921
〔2〕Chantalat L, Skoufias DA, Kleman JP, et al. Crystal structure of human survivin reveals a bow tie-shaped dimer with two unusual alpha-helical extensions〔J〕. Mol Cell, 2000, 6(1):183-189
〔3〕Moon WS, Tarnawski AS. Nuclear translocation of survivin in hepatocellular carcinoma: a key to cancer cell growth?〔J〕. Hum Pathol, 2003, 34(11): 1119-1126
〔4〕Uren AG, Wong L, Pakusch M, et al. Survivin and the inner centromere protein INCENP show similar cell-cycle localization and gene knockout phenotype〔J〕. Curr Biol, 2000, 10(21):1319-1328
