藤蟾方对荷人胃源性SGC?7901细胞裸鼠免疫功能和PCNA蛋白表达的影响

【摘要】  目的：探讨藤蟾方对裸鼠体内人胃源性SGC?7901细胞的抑瘤作用及对宿主免疫功能和增殖细胞抗原（PCNA）蛋白表达的影响。方法：通过体内实验，观察藤蟾方的抑瘤作用，用脾指数、胸腺指数初步检测藤蟾方的免疫调节作用，用PowerVisionTM二步法检测PCNA蛋白表达水平。结果：给药30天后，藤蟾方组和5?氟脲嘧啶组抑瘤率分别为32.56％、49.9％，同时两组对PCNA表达也有一定程度的影响。结论：藤蟾方对裸鼠体内人胃源性SGC?7901细胞具有一定的抑制作用，其机制可能与抑制肿瘤组织的PCNA蛋白表达有关。

【关键词】  裸鼠 藤蟾方 PCNA 人胃源性SGC 7901细胞

藤蟾方是来源于民间老中医的经验方，通过临床实践，发现藤蟾方对消化系统肿瘤尤其是胃腺癌的效果显著。课题组实验研究证实，藤蟾方有较好的抑制肿瘤效果[1～3]。为进一步研究藤蟾方抗肿瘤的机制，课题组展开了藤蟾方干预裸鼠人胃源性SGC?7901肿瘤细胞的研究。

    1  材  料 

    1.1  动  物  裸鼠18只，雌性，体重16～20g，浙江中医药大学实验动物研究中心提供。

    1.2  瘤  株  人胃源性SGC?7901细胞，浙江中医药大学药学院提供。

    1.3  药  物  藤蟾方由藤梨根、干蟾皮、薏苡仁等药物组成。实验用药的生药含量为0.8g/ml（该剂量已通过前期实验证明具有最佳抗肿瘤作用）。5?氟脲嘧啶 (5?FU)（上海旭东海普药业有限公司，批号：20020816）按25mg/kg给药，配制成2.5mg/mL稀释液。PowerVisionTM Two?Step免疫组化检测试剂盒（美国PowerVision公司）。PCNA一抗（NeoMarkers公司）。

    2  方  法 

    2.1  造模及分组给药  颈椎脱臼处死传代裸小鼠，酒精浸泡3min，无菌平皿中取出肿瘤，称重为1.32g。于另一无菌平皿中将瘤块剪碎，球形匀浆器匀浆，加生理盐水4ml配成1∶4稀释液，镜下观察肿瘤细胞成活率，接种于18只裸鼠右腋下，每只0.2ml。

    将接种后的裸鼠随机分为藤蟾方组、5?FU组、生理盐水组，每组6只。藤蟾方组给予藤蟾方0.2ml/10g灌胃；5?FU组给予5?FU 0.1ml/10g腹腔注射；生理盐水组给予生理盐水0.2ml/10g灌胃；均1天1次，连续给药30天。30天后称重并脱臼处死裸鼠，分离肿瘤组织，并称取瘤重。将肿瘤组织标本在中性缓冲福尔马林中固定，12小时后取材制成石蜡切片。严格按照PowerVisionTM Two?Step免疫组化检测试剂盒说明书的步骤检测PCNA蛋白表达。取分离肿瘤组织后小鼠的脾与胸腺并称重，观察抑瘤率、脾指数、胸腺指数。

    2.2  观察指标 

    2.2.1  抑瘤率、脾指数、胸腺指数  抑瘤率=[1?(实验组平均瘤重/对照组平均瘤重)]×100%;脾指数=脾脏重量(mg)/体重(g) ×100%;胸腺指数=胸腺重量(mg)/体重(g) ×100%。

    2.2.2  PCNA蛋白表达  取经过染色处理的标本切片进行观察，PCNA阳性位于细胞核内，呈棕色，未显阳性的细胞核呈蓝色。每张切片在200倍视野下计数5个视野，每个视野计数200个以上肿瘤细胞中染色阳性的细胞数，换算成增殖标记指数（LI），增殖LI=视野内的阳性肿瘤细胞数/视野内总的肿瘤细胞数×100%。

    2.3  统计方法  应用SPSS11.0进行数据处理，多组间比较采用单因素方差分析，各组间两两比较采用q检验。

    3  结  果 

    3.1  对小鼠体内肿瘤生长的抑制作用  藤蟾方组和5?FU组有明显的肿瘤抑制作用，抑瘤率分别为32.56％、49.9％，且给药小鼠未发生死亡。藤蟾方组、5?FU组与生理盐水组比较，瘤重差异均有显著性意义（P＜0.01），见表1。表1  三组抑瘤率比较（±s）

    组  别n/只瘤重/g抑瘤率/％藤蟾方组60.91±0.49△32.565?FU组60.51±0.16△49.90生理盐水组61.00±0.35——

    与生理盐水组比较，△P＜0.013.2  对PCNA蛋白表达的影响  藤蟾方对荷瘤小鼠的增殖细胞核抗原阳性表达有一定的抑制作用，藤蟾方组、5?FU组与生理盐水组比较，差异均有显著性意义，P＜0.05。藤蟾方组增殖标记指数为（63.86±15.50）％，5?FU组为（55.11±9.94）％，生理盐水组为（75.88±9.30）％。

    3.3  对小鼠脾指数、胸腺指数的影响  藤蟾方组未明确表现出与抑瘤效果相一致的免疫调节作用。各组荷瘤小鼠脾指数、胸腺指数比较，差异均无显著性意义(P＞0.05)，见表2。表2  三组荷瘤小鼠脾指数、胸腺指数比较

    4  讨  论 

    藤蟾方中藤梨根清热利湿、健脾和胃、解毒消肿，有抗癌作用，尤对消化系统癌肿疗效显著[4]。干蟾皮有解毒消肿止痛功效，能抑制人体多种肿瘤的生长，并能不同程度地防治放化疗引起的白细胞下降，增强机体对放化疗的耐受力。薏苡仁健脾补肺、清热利湿，薏苡仁的活性成分(薏苡仁酯、薏苡仁油)及总提取物均有很强的抗肿瘤作用[5]。全方相配既有清热解毒、利湿消肿之力，又有活血通络、软坚散结之功，共同达到健脾和胃、抗肿瘤的作用，适用于气血凝滞、脉络瘀阻而致的肿瘤病证。

    本实验结果证明，藤蟾方对荷人胃源性SGC?7901细胞裸鼠具有明确的抗肿瘤作用，其作用机制可能与抑制肿瘤组织的增殖细胞核抗原有关。

【】
  1 张光霁，申 力.藤蟾方抑制人胃癌细胞的生长及诱导其凋亡的实验研究. 浙江临床医学,2005,7(6):569?570

2 张光霁.藤蟾方抑瘤及其诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究.浙江临床医学,2004,6(5):356?357

3 张光霁.藤蟾方对S180小鼠P53和PCNA蛋白表达的影响.中西医结合杂志,2004,13(12):1566?1567

4 卫培峰,焦晨莉,张 英.藤梨根对实验性大鼠胃癌抑制作用的实验研究.陕西中医,2005,26(8):850?851

5 李大鹏.康菜特注射液药效学及临床研究进展.新药与临床杂志,2007,26(10):778?782