川芎嗪治疗实验性肾损伤机理的研究
作者：谭洪华 李 霞 薄爱华 邢立强 薛贵平
【摘要】 目的：观察川芎嗪实验性免疫性肾损伤作用和机理，为中药治疗肾小球肾炎开辟新途径。方法：猪血清腹腔注射8周，复制大鼠实验性肾损伤模型，川芎嗪治疗4周后处死动物，检测尿蛋白、血清BUN和Scr含量，取肾组织制作光、电镜标本检查。结果：川芎嗪大、小剂量组尿蛋白、血清BUN和Scr含量较模型组明显降低（P<0.01），肾小球的病理形态学改变较模型组轻。结论：川芎嗪具有治疗大鼠实验性免疫性肾损伤的作用。
【关键词】 川芎嗪；肾损伤；药；疾病模型；大鼠
【ABSTRACT】 Objective: To further investigate possible ways for treating immune renal injury by traditional Chinese medicine Tetramethylpyrazine(T). Methods: Rats were administrated intra?abdominally fresh swine serum to induce immune renal ingury model and then were treated with Tetramethylpyrazine respectively. Urine protein (UP), serum BUN and Scr were measured and the kidney specimens were taken from abdomen and prepared for light and electron microscopic examiniation.Results: The above UP and serum parameters in T group did have significant differences with that of model control group（P<0.01）. Light and electron microscopic examiniation showed that, compared with model control group, no obvious pathological changes were found in the kidney of T group. Conclusion: Tetramethylprazine has the effect of anti immune renal injury in rats.
【KEY WORDS】 Tetramethylprazine; Renal injury; Pharmacology; Disease model; Rat
免疫性肾损伤是肾小球肾炎常见的病理类型，医学对本病尚缺乏满意的治疗方法。川芎嗪（Tetramethylpyrazine,TMP）是从伞形科植物川芎（Ligusticum chuanxiong Hort）中提取分离的一种生物碱单体。为了探讨中药在抗肾损伤中的作用及机制，特复制免疫性肾损伤动物模型，用川芎嗪注射液进行治疗，旨在扩大川芎嗪用途，为临床有效治疗肾小球肾炎提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 实验动物
健康Wistar大鼠48只，雌雄并用，分笼饲养，体重150～175g，由河北医科大学实验动物中心提供。
1.2 动物模型制作
取新鲜猪血液，离心制备血清，紫外线消毒。参照猪血清注射法[1]及血清病肾炎模型[2,3]复制免疫性肾损伤模型：鲜猪血清0.7mL腹腔注射每周2次，连续8 周，尿蛋白定性为（++）以上者确定为肾损伤大鼠模型。
1.3 方法
1.3.1 分组
大鼠随机分为四组：正常对照组、模型对照组、川芎嗪大剂量治疗组与川芎嗪小剂量治疗组，每组各12只。
1.3.2 给药
正常对照组和模型对照组给生理盐水0.4mL/kg腹腔注射，1次/d；后两组用川芎嗪注射液进行治疗，大剂量治疗组0.4mL/kg；小剂量治疗组0.2mL/kg，1次/d，共治疗4 周。
1.3.3 指标测定 各组大鼠分别在造模前、造模后、治疗后测定24h尿蛋白含量（磺基水杨酸比浊法）。断尾取血测定血清BUN和Scr，严格按照试剂盒说明测定。治疗结束后取肾组织常规制作石蜡及电镜切片。
1.3.4 统计学处理
全部实验数据以x±s表示，组内前后比较用t检验，组间比较用单因素方差分析，所用统计软件为SPSS10.0。
2 结果
2.1 川芎嗪对大鼠尿蛋白的影响（见表1）
模型组大鼠尿蛋白含量显著高于正常组（P<0.01），川芎嗪大、小剂量组后尿蛋白含量显著低于模型组（P<0.01）。
2.2 川芎嗪对大鼠血清BUN、Scr的影响（见表2、表3）表1 各组大鼠不同时期的尿蛋白定量变化注：*与正常组比较P<0.01; △与模型组比较P<0.01; 与治疗前比较▲P<0.05，▲▲P<0.01 表2 各组大鼠不同时期的血清BUN含量变化注：*与正常组比较P<0.01; △与模型组比较P<0.01; 与治疗前比较▲P<0.05，▲▲P<0.01表3 各组大鼠不同时期的血清Scr含量变化（注：*与正常组比较P<0.01; △与模型组比较P<0.01; ▲▲与治疗前比较P<0.01
模型组的血清BUN含量较正常组明显升高（P<0.01），川芎嗪大、小剂量组治疗后BUN含量较模型组明显降低（P<0.01）。模型组的血清Scr含量较正常组明显升高（P<0.01），川芎嗪大、小剂量组治疗后Scr含量较模型组明显降低（P<0.01）。
2.3 肾脏组织光、电镜观察
光镜下模型组肾小球系膜细胞和基质增生，系膜区增宽，其间常有数量不等的中性粒细胞浸润，上皮细胞增生，形成新月体，肾小体毛细血管淤血；大剂量治疗组肾小体水肿不明显，各部分结构清晰；小剂量治疗组可见灶性肾小球毛细血管淤血。电镜下模型组肾小球内皮及上皮细胞显著肿胀变性，内质网扩张，形成大空泡，基底膜增厚或厚薄不一，在基底膜表面呈驼峰状或小丘状隆起，足突融合，局部裂孔消失，膜下可见密度高的沉积；大剂量治疗组肾小球血管内皮细胞及足细胞水肿消失，足突及裂孔较清晰，驼峰消失，但仍有基底膜厚薄不一的现象；小剂量治疗组与模型组近似，未见明显改善。
3 讨论
结果显示，川芎嗪对免疫性肾损伤大鼠滤过膜有保护作用，可显著减少尿蛋白；明显改善肾功能，使血清BUN、SCr含量降低；肾小球的病理形态学改变亦较模型组轻，表明中药川芎嗪具有抗免疫性肾损伤的作用，其作用机制具体表现在以下2个方面。
3.1 促进肾小球滤过屏障的修复 肾小球的滤过膜由毛细血管内皮细胞、基底膜和脏层上皮细胞共同构成，是原尿形成必须通过的途径，生理状态下对滤过物质的分子大小具有选择性，蛋白质几乎不能通过。当致病因素引起肾小球病变时，会影响滤过膜的屏障作用，通透性增加，使大分子物质得以通过，从而导致蛋白尿大量漏出。本实验结果表明，川芎嗪有助于大鼠肾小球滤过膜功能的恢复，对肾小球滤过膜损伤的修复有促进作用，并能促进上皮细胞的再生与修复。川芎嗪对滤过膜的修复作用是其治疗免疫性肾损伤、消除蛋白尿的重要机理之一。
3.2 改善肾功能 肾小球炎症时，肾内血栓素A2 （TXA2）合成增多，而与其作用相反的前列环素I2 （PGI2）合成减少[4]。TXA2/PGI2是前列腺素代谢中一对互相制约、调节生理功能的重要因子。一旦平衡失调，必引起多种病理变化的产生。现已证实TXA2在肾炎中有着一定的作用，它可减少肾血流量及肾小球滤过率、促使肾微血栓形成。实质上，TXA2的上升对肾小球滤过屏障的损坏起正反馈作用。因此，设法阻止TXA2 的产生，纠正TXA2/PGI2 的比值失衡，则能达到减轻肾炎损伤的目的。川芎嗪能对抗TXA2的产生，促进PGI2的生成，并能增加肾血流量，改善肾功能。本实验模型组BUN与Scr 含量进行性增加，与正常组差异明显；川芎嗪大剂量组治疗后BUN、Scr明显降低，与正常组无明显差异；川芎嗪小剂量组治疗后BUN明显降低，与正常组比较仍较高，差异明显，Scr明显降低，与正常组无明显差异，说明川芎嗪能改善免疫性肾损伤大鼠的肾功能。
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