系统性红斑狼疮患者CD62p表达的研究

　 [摘要]目的：探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者血小板膜表面CD62p的表达水平，了解患者血小板功能的变化。方法：用荧光素标记的单克隆抗体和流式细胞仪测定SLE患者CD62p的表达水平，用全自动血细胞分析仪进行血小板计数（BPC），用全自动血凝仪测定血浆凝血酶原时间（PT）、部分凝血活酶时间（APTT）及纤维蛋白原（Fg）。结果：SLE患者CD62p的表达水平明显高于对照组，BPC低于对照组，CD62p的变化与BPC无关。结论：SLE患者CD62p表达水平明显升高，提示大量血小板活化，参与炎症反应及血栓形成，患者体内存在血小板数量与功能双重变化。

    [关键词]系统性红斑狼疮；血小板活化；CD62p；表达

      系统性红斑狼疮（SLE）是一种累及多系统、多脏器的慢性炎症性自身免疫病，血液系统常常受累，伴血小板变化、微血栓形成。近年研究显示，血小板活化与自身免疫性疾病相关，但关于SLE患者血小板功能变化的研究报道尚少。本研究用流式细胞术（FCM）观察SLE患者血小板膜蛋白CD62p表达水平，旨在进一步探讨血小板的功能状况在SLE发生中可能的作用机制，为临床提供依据。

    1  对象与方法

    1. 1  对象SLE组28例均符合1982年美国风湿病协会（ARA）关于SLE的诊断标准。男1例，女27例；年龄18～69岁，平均46岁；病程2个月～6年；SLE DAI评分[1]均在10分以上，全部为临床活动期患者。对照组28例为健康对照者，其中女16例，男12例，年龄23～52岁，平均36.5岁。两组均排除糖尿病、心脑血管疾病，且近期未使用过对血小板有影响的药物。

    1.2  方法

    1．2．1  血液标本采集  采集静脉血1.8 ml，用0.2 ml 枸橼酸钠抗凝。标本半小时内送检。

    1．2.2  血小板膜糖蛋白的检测  取下沉的富含血小板血浆3 ml，共3管，分别加入荧光素标记的单抗CD62pFITC，室温下孵育30 min。用FACScaliubar流式细胞仪（BectonDickinson）分析，检测CD62p阳性血小板的百分率，所用试剂均为BectonDickinson美国公司的产品。

    1.2．3  血小板计数（BPC）、血浆凝血酶原时间（PT）、部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（Fg）的检测  BPC用美国Coulter ANYX型全自动血球分析仪测定，PT、APTT、Fg用美国Coulter ACI200型全自动血凝仪以凝固法测定。

    1.3  统计学处理数据以x-±s表示，组间比较用t检验，两变量的关系用直线相关与回归统计法。

    2  结    果

　　（1）SLE组CD62p的表达水平（20.09±8.10）显著高于对照组（5.15±3.17），P<0.01。（2）SLE组PT、APTT、Fg均在正常范围，与对照组比较均无显著性差异（P＞0.05）,而BPC低于对照组（P<0.01），见表1。表1  SLE组与对照组BPC、PT、APTT、Fg水平的比较

    3  讨    论

　　现已证实,整合素在胚胎发生、炎症免疫反应、肿瘤及细胞聚集等方面起重要作用。CD62p为整合素成员之一，是存在于血小板a颗粒及WewibelPalada 小体上的颗粒膜糖蛋白。血小板活化后CD62p表达于质膜上，是反映血小板活化最灵敏的指标之一[2]，而血小板活化可致微血栓形成[3]。当血小板活化时，分布在静止血小板的a颗粒膜糖蛋白CD62p即随着脱颗粒的发生，迅速表达于血小板膜表面，介导血小板粘附、参与炎症反应。CD62p是一种炎症介质，且CD62p始动白细胞、血小板、内皮细胞间相互作用，使血小板聚集形成血栓[4]，CD62p在血栓性疾病中明显升高[5]，可以作为SLE患者的凝血活性指标，因此CD62p可作为炎症反应和血栓形成的参照指标之一。CD62p是血小板活化较为特异的分子标志物，检测血小板膜表面CD62p可评价血小板活化程度[6]。应用FCM测定CD62p的表达量以反映血小板活化情况简单可靠，且可避免血小板体外活化的影响。SLE患者大多数因免疫复合物沉积致内皮细胞功能异常，可有不同程度的血管炎性病变。患者常合并冠脉、外周血管病变[7]，血栓的形成是患者发病及死亡的主要原因之一。本研究显示SLE活动期患者血小板CD62p表达水平明显升高，提示患者体内存在大量血小板活化，说明SLE患者体内存在潜在高凝性[8]。活化的血小板通过细胞因子（如PDGF、TGFβ）相互作用参与全身炎症反应，使微血管病变加重，临床表现为出血或血栓形成。Ekdahl等对30例SLE患者研究发现，SLE血栓性疾病与全身持续性血小板活化状态有关[9]。本研究还显示，SLE患者与对照组PT、APTT、Fg均在正常范围，BPC虽较正常组减少，但CD62p表达水平与BPC的改变无相关性，提示SLE患者体内同时存在血小板数量与功能的变化。

    []

    [1]BOMBARDIER C,GLADMAN D D,UREWITZ M B,et al. Deviration of the SLEDAI：a disease activity index for lupus patients[J]. Arthritis Rheum,1992,35：630640.

    [2]LEYTIN V,MODY M,SEMPLE W,et al. Flow cytometric parameters for characterizing platelet activation by measuring Pselectin expression：theoretical consideration and evaluation in thrombintreated platelet population[J]. Biochem Biohys Res Commun,2000,269:8590.

    [3]PACKHAM M A,MUSTARD J F. The role of platelets in the development and complications of atherosclerosis[J]. Semin Hematol,1986,23：819.

    [4]仲任,宋善俊.P选择素和急性冠心病[J].国外医学输血与血液学分册,2001,24（4）：294296.

    [5]MURAKAMI T,KOMIYARA Y,MASUDA M,et al. Flow cytometric analysis of platelet activation markers CD62p and CD63 in patients with coronary artery disease[J].Eur J Clin Invest,1996,26：9961003.

    [6]MICHELSON A D. Flow cytometry：a clinical test of platelet function[J].Blood,1996,87(49)：49254936.

    [7]SPIERA H,ROTHENBERG R. Myocardial infarction in four young patients with systemic lupus erythematosus[J]. J Rheumatol,1983,10:464466.

    [8]NAGAHAMA M,NOMURA S,OZAKI Y,et al. Platelet activation markers and soluble adhesion molecules in patients with systemic lupus erythematosus[J]. Autoimmunity,2001,33(2):8594.

    [9]EKDAHL K N,BENGTSSON A A,ANDERSSON J,et al. Thrombotic disease in systemic lupus erythematosus is associated with a maintain systemic platelet activation[J]. Br J Haematol,2004,125:7478.