HPLC法测定祛暑胶囊中甘草酸的含量
【摘要】 目的 建立祛暑胶囊中甘草酸含量的测定方法。方法 采用HPLC法，Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇－0.2 mol/L醋酸铵－冰醋酸(67∶33∶1)；流速0.8 mL/min；检测波长250 nm。结果 祛暑胶囊中甘草酸含量测定方法线性范围为188.06～494.59 μg/mL；平均回收率为103.3 %，RSD为2.2 %(n＝6)，理论塔板数大于2000。结论 HPLC法测定祛暑胶囊中甘草酸含量简便、准确、重复性好。
【关键词】 HPLC；祛暑胶囊；甘草酸；含量
祛暑胶囊主要由广藿香、香薷、甘草等组成，临床使用多年，用于中暑感寒引起的恶寒发热等症。本文选取方中主药甘草所含主要成分甘草酸为指标，药典[1]，采用高效液相色谱法对祛暑胶囊含量测定方法进行研究，以便控制该制剂的质量。
1 实验药品、试剂
祛暑胶囊(批号20050819),甘草酸单铵盐对照品(中国药品生物制品检定所,批号110731－200205),甲醇(色谱纯)，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2 实验仪器
美国瓦里安Prostar 210型高效液相色谱仪，瓦里安Prostar 325型紫外－可见检测器。
3实验方法及结果
3.1 色谱条件
Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇－0.2 mol/L醋酸铵－冰醋酸(67∶33∶1); 流速0.8 mL/min；检测波长250 nm。
3.2对照品溶液的制备
精密称取在60 ℃真空干燥至恒重的甘草酸单铵盐对照品2.4 mg，置于10 mL棕色容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每毫升含甘草酸单铵盐对照品0.24 mg，折合甘草酸235.08 μg)。
3.3供试品溶液的制备
取本品内容物约2 g，精密称定，置50 mL容量瓶中，加流动相约45 mL，超声处理30 min，加流动相至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取滤液，即得供试品溶液。另取不含甘草酸制得的阴性对照制剂同法制得阴性对照品溶液。
3.4系统适应性试验
取上述对照品溶液、阴性对照品溶液及供试品溶液，照3.1项下色谱条件，各进样10 μL，测得HPLC图谱，见图1。图谱表明阴性对照品溶液色谱在与对照品溶液色谱相同位置无干扰。理论塔板数按甘草酸不低于2000。甘草酸单铵盐对照品 供试品溶液 阴性对照品溶液
图1高效液相色谱图
3.5 线性关系的考察
分别吸取对照品溶液4.0 mL、5.0 mL、6.0 mL、7.0 mL、8.0 mL分别置于10 mL容量瓶中加流动相稀释至刻度，摇匀，各进样10 μL，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标(μg/mL), 进行线性回归，得回归方程为：Y= 1636.3X- 91714，相关系数r＝0.9993，表明甘草酸在188.06～494.59 μg/mL范围内具有良好的线性关系。
3.6 精密度试验
取对照品溶液(浓度为235.08 μg/mL)进样，每次进样10 μL，重复进样6次，测得峰面积，并出RSD为0.5 %。结果见表1。
3.7 稳定性试验
取祛暑胶囊供试品溶液，在0, 2, 4, 6, 8, 10, 12 h分别进样10 μL，记录峰面积并计算出RSD为2.3 %。可见供试品溶液在12 h内稳定。结果见表2。表1精密度试验注：平均峰面积=299838；RSD=2.3 ％
3.8重现性试验
取祛暑胶囊样品5份，按供试品溶液制备法，制得5份供试品溶液，按样品测定法测定，测得供试品中含甘草酸分别为6.30 mg/g、6.47 mg/g、6.41 mg/g、6.37 mg/g、6.38 mg/g(RSD=0.97 %, n＝5)，表明本法重现性较好。
3.9回收率试验
采用加样回收法，精密称取适量的已测知含量的祛暑胶囊内容物(含量为6.47 mg/g,批号:20050819)6份,分别加入适量的对照品溶液,按3.3项的制备方法制得供试品溶液，各取10 μL进样，记录色谱图,计算回收率，结果见表3。表3回收率实验结果
3.10样品测定
取10个批号供试品，依法分别制得供试品溶液。各吸取供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录色谱图，计算样品中甘草酸的含量，结果见表4。表410批祛暑胶囊中甘草酸含量测定
4结论
本试验采用HPLC法测定祛暑胶囊中甘草酸的含量，无其他成分的干扰，方法的精密度、稳定性均符合要求，回收率高。
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[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典 (一部) [M].北京：化学出版社，2005:184, 541.
