丹参酮Ⅱ-A磺酸钠对兔在体心室电生理及实验性心律失常的影响

【摘要】  目的：研究丹参酮Ⅱ-A磺酸钠(TSN)对兔在体心室电生理及实验性心律失常的影响。方法：使用心室壁插入自制电极，观察TSN(0.5，1，2，4mg/kg)对兔心室电生理影响；采用BaCl2、氯仿-肾上腺素等诱发心律失常模型研究TSN对心律失常的影响。结果：小剂量TSN对兔心室电生理无明显影响，大剂量则能显著延长心室的相对不应期、有效不应期、室颤阈；且能降低BaCl2、氯仿-肾上腺素等诱发心律失常。结论：TSN可能具有增加心电稳定性并减少心律失常发生的作用。

【关键词】  丹参酮Ⅱ-A磺酸钠；兔；心室电生理；心律失常

　　［Abstract］Objective: To study the influence of tashinoneⅡa-sulfoacid-natrum(TSN)on the electrophysiology of rabbit?s left ventricle in vivo and the experimental arrhythmia. Methods: The electrode was inserted into rabbit?s ventricular wall to observe different doses(0.5，1，2，4 mg/kg)of the TSN on the influence of the rabbit?s ventricle electrophysiology. The arrhythmic model induced by BaCl2 and chloroform-adnephrin was used to study the influence of experimental  arrhythmia. Results: Low-dose TSN had no obviously influence on the electrophysiology of rabbit?s ventricle. Large-dose TSN could prolong rabbit?s ventricular relative refractory period、ventricular effective refractory period、ventricular fibrillation threshold, and reduced the occurrence of arrhythmia induced by BaCl2 and chloroform-adnephrin. Conclusion: TSN may have the efficacy to increase electrical stability of the cardiac muscle and reduce the occurrence of arrhythmia.

　　［Key Words］tashinoneⅡa-sulfoacid-natrum; rabbit; ventricular electrophysiology; arrhythmia

    丹参是活血化瘀中药，丹参酮Ⅱ-A是丹参根的乙醚或乙醇提取物中的一种成分［1］。研究表明，丹参酮具有清除自由基、天然抗氧化、抗动脉粥样硬化、降低心肌耗氧量、保护缺血心肌、抑制血小板聚集、抗血栓、抑菌和抗肿瘤等作用。近期的膜片钳全细胞式记录方法观察到其磺化后的水溶性钠盐丹参酮Ⅱ-A磺酸钠(TSN)对大鼠单个心室肌细胞的内向整流钾电流(Ik1)和瞬时外向电流(Ito)具有抑制作用［2］，对心肌L-型钙通道也有阻滞作用［3］，但其在整体条件下对心脏的电生理作用的影响仍少见报道。本实验观察了整体条件下TSN对兔心室有效不应期(VERP)、心室相对不应期(VRRP)、室颤阈(VFT)及其实验性心律失常的影响，旨在探讨TSN在整体条件下对心脏电生理作用的特点及潜在的抗心律失常机制。

　　1  材料与方法

　　1.1  实验动物及分组

    健康成年新西兰兔(南方医科大学动物实验中心提供，清洁级)56只，体质量(2.4±0.4)kg，雌雄不限。40只随机分为TSN(0.5、1、2和4mg/kg)组及对照组［GS(体积分数5%)组］，每组8只，余16只随机分为TSN组和对照组(各8只)。SD大鼠［南方医科大学动物实验中心提供，清洁级，体质量(240.2±36.2)g，雌雄不限］20只，分为TSN组和对照组，各10只。

　　1.2  药品及实验仪器

    注射用TSN为红色澄清液体(阿尔贝拉医药控股公司，。批号：060303，20mg/支)，用体积分数5%的葡萄糖注射液稀释成0.5mg/mL，4℃冰箱保存；Powlab16导生理记录仪(埃得公司，澳大利亚)；SEC-2102型心脏程控刺激器(光电公司，日本)；自制四极心肌插入电极；刺激电极(张家口教学仪器厂，中国)。

　　1.3  实验方法［4，5］

　　1.3.1  心室电生理测定 

　　各组用体积分数3%的戊巴比妥钠30mg/kg经耳缘静注麻醉，仰卧位固定，肝素1000U静注，用针状电极刺入兔四肢皮下记录其体表Ⅱ导联心电图，信号输入16导生理记录仪，行全程心电监护。胸骨左缘开胸，保持自主呼吸，维持窦性节律，剪开心包膜，缝制心包吊床，充分暴露心脏，将自制四极心肌插入电极插入左心耳右下缘室间沟左室侧心室壁内，电极下缘位于左室心尖部，四极电极极间距离：第1～2极(α，左室前壁)，第3～4极(b，左室心尖部)均为1.5mm，第2～3极5mm，四极电极的第1～2极作为刺激电极，连接心脏程控刺激器，第3～4极作为记录电极，将生物电信号输入16导生理记录仪，测定电生理参数。基础刺激以高出窦律(10～20)次/min的频率起搏心室，脉宽2ms，首先测定心室起搏阈值(输出电压)，期前刺激S2脉宽和电压与S1相同，在连续发放8个起搏刺激后发放早搏刺激S2，S1S2自短于S1S1　50～100ms开始，步长5ms，至S2不能引起心室去极化即为VRRP；以起搏阈值的2倍作为输出电压，期前刺激S2脉宽和电压与S1相同，在连续发放8个起搏刺激后发放早搏刺激S2，S1S2自短于S1S1　50～100ms开始，步长5ms，至S2不能引起心室去极化即为VERP。接着，以第2～3极作为刺激电极，连接，心脏程控刺激器，以第1～4极作为记录电极,将生物电信号输入16导生理记录仪,记录室颤阈。致颤参数：50次/s、脉宽30ms，刺激15s/次，每隔10min刺激1次，逐次提高刺激电压0.5V，直至室颤出现，此电压值(V)为电刺激兔心室室颤阈(VFT)。记录上述指标后稳定30min，各组经耳缘静脉输入相应的药物，30min后再次测量上述指标。

　　1.3.2  对实验性心律失常的影响 

　　①TSN对BaCl2诱发大鼠心律失常的影响  SD大鼠以体积分数10%的水合氯醛(300mg/kg)腹腔注射麻醉，颈外静脉插管，监视体表肢体导联心电图。TSN组给予TSN　1mg/kg，对照组等体积GS，经颈外静脉缓慢注入，15min后经颈外静注BaCl2(1mg/kg)诱发心律失常，观察双相性室速发生率。②TSN对氯仿-肾上腺素诱发兔心律失常的影响  各组取平卧位固定，氯仿吸入麻醉至角膜反射迟钝,TSN组由耳缘静注TSN(2mg/kg)，对照组给予等量GS，15min后两组均予体积分数0.01%的肾上腺素(50μg/kg)由耳缘静脉快速注入，心电监视，记录心律失常持续时间。

　　1.4  统计学处理

    实验数据用x±s表示，组内数据分析采用配对t检验(TSN对BaCl2诱发大鼠心律失常影响组数据采用χ2检验)，组间数据分析采用方差分析，由SPSS13.0 for windows软件完成统计学处理。

　　2  结果

    实验结果见表1～3：用药后30min，0.5、1mg/kg组对兔心室的各项指标均无统计学意义；2、4mg/kg组与对照组、0.5、1mg/kg组比，VRRP、VERP、VFT显著延长(P<0.05，P<0.01)，TSN可明显减少BaCl2致双相性室速的发生(P<0.05)，且有对抗氯仿-肾上腺素诱发兔心律失常的作用(P<0.01)。表1  TSN对兔心室不应期的影响（略）表2  TSN对BaCl2诱发大鼠心律失常的影响（略）表3  TSN对氯仿-肾上腺素诱发兔心律失常的影响（略）

　　3  讨论

    心律失常不仅发生于慢性心力衰竭、心肌缺血、心肌肥厚等器质性心脏病患者，还发生于心脏无明显器质性病变者，某些严重心律失常现已成为人类死亡的主要原因。目前临床上抗心律失常药物仍是心律失常的首选。抗心律失常药的作用机制包括降低自律性，减少后除极和触发活动、改变膜反应性(加快或减慢传导)、以及延长心肌细胞有效不应期等。本研究结果显示，TSN能延长心室的RRP及ERP，其机制可能是TSN能抑制心室肌细胞的Ik1和Ito［2］，这两种电流的抑制会使动作电位时程延长，同时也使RRP及ERP延长，从而能减少折返形成。VFT是心电稳定性的重要指标，直接反映心律失常发生的可能性。本实验发现，TSN能增加室颤阈，2mg/kg时作用达到最大(与4mg/kg组比无统计学意义),提示TSN具有增加心肌电稳定性的作用［6］。这提示TSN可能具有一定抗心律失常的作用，且其作用并不与剂量成正比。

    在实验性心律失常模型中，本研究发现TSN能降低BaCl2诱发大鼠双相性室速的发生率(P<0.05)，缩短由氯仿-肾上腺素诱发的兔心律失常持续时间(P<0.01)。BaCl2诱发心律失常的机制与Ca2+相似,与心肌细胞膜上Ca2+的内流有关［7］;氯仿诱发兔室颤的机制可能是由于氯仿可促使植物神经或肾上腺髓质释放肾上腺素，大量肾上腺素兴奋β-受体，引起肾上腺素受体依赖性Ca2+内流，以及氯仿对心肌的直接作用［5］。TSN能明显抑制BaCl2诱发的大鼠双向性室性心律失常,缩短由氯仿-肾上腺素诱发的兔心律失常持续时间,提示TSN的抗心律失常机制可能与抑制K+及Ca2+的内流,减轻细胞内钙超载,降低心脏的自律性,阻断α-肾上腺素能受体等有关。

【】
  　　［1］梁勇, 羊裔明, 袁淑兰. 丹参酮药理作用及临床应用研究进展［J］. 中草药, 2000, 4(31): 30.

　　［2］于海波, 徐长庆, 单宏丽. 丹参酮-2A对大鼠心室肌细胞膜钾电流的影响［J］. 哈尔滨医科大学学报, 2002, 36(2)：112-114.

　　［3］徐长庆, 娄延平, 杨保峰. 丹参酮Ⅱ-A抑制豚鼠单个心肌细胞L型钙电流和缩短动作电位时程效应的相关性分析［J］. 药通报, 1998, 14(5): 428-431.

　　［4］邱汉婴, 魏太星, 张延荣，等. 雷尼替丁对兔正常心室和缺血心室不应期及室颤阈的影响［J］. 中国药理学报, 1993, 14(3): 433.

　　［5］马传庚， 张宝恒. 抗心律失常药实验法［M］. 徐叔云, 卞如濂, 陈修主编. 药理实验方法学. 第2版. 北京： 人民卫生出版社, 1991. 1 013-1 021.

　　［6］孟玲, 李小鹰, 单兆亮, 等. MS2551抗缺血性室性心律失常的实验研究［J］. 中国应用生理学杂志, 2000, 16(3): 243-254.

　　［7］张红英, 李丽波, 李迎军, 等, 4-2［对2(12苯丙三氮唑)甲基］苯丙烯酸钠抗实验性心律失常的作用［J］. 中国药理学通报, 2004,20(7): 815-817.