乙型肝炎实验动物模型的研究进展
【关键词】 乙型肝炎 动物模型 研究进展
建立合适的乙型肝炎病毒（HBV）感染的实验动物模型，对于开展抗乙肝中药的筛选，探索HBV感染机制，寻找有效的防治方法等，具有重要的意义。当代病毒学、分子生物学及免疫学等相关学科的，极大地推动了HBV感染动物模型的研究［1］。本文就近年来有关HBV及其它嗜肝病毒感染的动物模型的造模方法作一综述。
1 灵长类动物HHBV感染模型
Barker等［2］首次报道黑猩猩感染HHBV（人乙肝病毒）模型实验获得成功，研究中发现黑猩猩对四种亚型（adw、adr、ayw、ayr）HBsAg阳性血清都可成功获得感染，并在黑猩猩的血清中检测出与接种物相同亚型的HBsAg，其中以adr亚型的致病性较强。Barker等［3］研究表明，恒河猴是最实用的HHBV易感动物，但其敏感性低于黑猩猩。感染HHBV后的恒河猴，其血清中HBsAg和HBVs呈阳性，但在急性期未出现谷丙转氨酶异常升高和肝脏损害。张涛等［4］研究发现，猕猴感染HHBV后肝组织有类似人乙型肝炎的病理改变，免疫组化法与原位杂交法检测结果相吻合。 实验研究发现，西里伯类人猿、Palas猴，长尾黑颚猴、白脸猴、尤猴、新域猴、长臂猿、狒狒、卷毛猴、平顶猴、大猩猩及蜘蛛猴等均可用HHBV感染成功获得乙型肝炎动物模型，在它们体内均可检测出HBsAg、抗HBs、抗-HBc、HBV-DNA。
2 鸭DHBV感染模型
唐霓等［5］用不同日龄鸭接种DHBV建立急性和慢性感染模型，结果发现慢性感染的形成与幼鸭免疫系统发育尚未完善有关，即不同日龄的鸭肝细胞对DHBV易感性不同。姚云清等［6］用HBV-DNA转染的原代鸭肝细胞与DHBV感染的原代鸭肝细胞进行比较，结果提示两者的复制与表达相似。朱清静等［7］用DHBV阳性血清反复攻击成功获得鸭乙型肝炎肝纤维化模型。鸭乙型肝炎并不能诱发肝细胞性肝癌，郝连杰［8］报道Hans等经过对鸭乙型肝炎病毒基因结构的分析，证实鸭乙型肝炎病毒所有分离株中均存在一缺乏常规翻译起始密码子的X样开读框架，并不是没有X基因。
3 大、小鼠HBV感染模型
3.1 HBV部分片段的转基因小鼠模型
胡卫江等［9］应用受精卵原核显微注射的方法，制备了含有2.0拷贝HBV （adr亚型）基因组的转基因小鼠， 发现HBV基因在转基因小鼠体内可以稳定遗传，并有病毒颗粒形成。刘红等［10］采用受精卵显微注射的方法，建立了HBV核心抗原（ayw亚型）转基因小鼠模型，核心抗原基因能够在小鼠肝脏中表达并可稳定遗传。金艳花等［11］采用原核显微注射法将质粒pcDNA 3.1-preS/St注射入小鼠受精卵雄原核，成功获得了稳定遗传3′末端缺失的preS/S基因并表达preS2蛋白的转基因小鼠，命名为C57-TgN（preS/St）SMMU。訾晓渊等［12］研究发现，F5代C57-TgN（HBV adr2.0）SMMU小鼠具有基因组中稳定整合病毒DNA，血清和肝组织中有病毒蛋白表达和病毒复制的特征，并具有一定的组织学变化。
3.2 DNA疫苗免疫HBV转基因小鼠模型
Oka等［13］用单剂量质粒pS及pS2-S 免疫30例HBV转基因小鼠，导致了其中28例HBsAg的清除；而HBsAg蛋白疫苗在注射7个月之后，仅导致29例HBV转基因小鼠中10例HBsAg的清除，提示 DNA疫苗免疫效果较好。Schirmbeck等［14］用HBV-DNA疫苗及HBsAg重组蛋白疫苗免疫H-2b小鼠及其同源HBV转基因小鼠，未诱导出免疫反应；但将免疫小鼠脾细胞转输入HBV转基因小鼠，则可导致血清HBsAg滴度下降，抗HBsAg抗体产生，并诱导出CTL反应，但未使肝脏HBsAg转基因表达得到控制。
3.3 HBV免疫缺陷小鼠模型
Brown等［15］将非肿瘤源性永生性人肝细胞株IHBV6.7移植到重组激活基因-2（RAG-2）剔除鼠体内，建立了长期HBV病毒血症模型。Ilan等［16］给正常小鼠高剂量射线全身照射以消除小鼠的免疫活性，再将严重联合免疫缺陷鼠的骨髓细胞移植给该鼠，最后将已感染HBV的人肝组织移植到该鼠肝脏，成功建立了与人感染HBV过程相似的HBV三聚体小鼠模型。Dandri等［17］把正常人的肝细胞注入uPA（尿激酶类型纤维蛋白溶酶原激活子）免疫缺陷的小鼠肝内，再给该鼠接种HBV，成功获得了病毒复制过程与HBV感染人体过程相似的HBV免疫缺陷小鼠模型。Ohashi等［18］用竞争性抗c Met抗体处理非肥胖型糖尿病小鼠，并将原代人肝细胞移植到鼠肾球囊基底膜，同时给小鼠接种HHBV，结果表明此模型对HHBV易感。Dunkdri等［19］将uPA转基因鼠与RAG-2剔除鼠进行交配，所得（13~21）日龄杂合子作为移植受体，将人肝细胞注入脾内，2 d后皮下注射20 μL HHBV血清，成功建立了感染过程与人慢性HBV感染相似的HHBV感染动物模型。覃小敏等［20］将纯化的3型鼠肝炎病毒经腹腔注入近交系C3H/HeJ小鼠体内，建立了与人类慢性病毒性肝炎的发生发展极为相似的慢性病毒性肝炎动物模型。
3.4 大鼠HBV感染模型
谭龙益等［21］将经磷酸钙沉淀的含3.2kb全序列HBV-DNA的HBV-PCNCX质粒直接导入大鼠肝脏，成功建立了HBV感染模型，在该鼠血清中检测到HBsAg和HBeAg，肝细胞中HBV-mRNA及HBsAg得到表达。Wu等［22］将人肝细胞移植到有免疫活性的SD大鼠体内，再接种HBV，成功建立了HBV感染模型，3 w后即可在血清中检测到HBsAg含量稳定上升， HBV-DNA可至少持续60d；同时肝中出现HBV-RNA，免疫荧光示成串的肝细胞含染色阳性的HBcAg。蒋黎等［23］用与Wu类似的方法成功建立了Wistar大鼠乙型肝炎模型，人肝细胞型细胞角蛋白和HBsAg在该模型肝组织中得到了表达。
4 其他嗜肝病毒及相关动物模型
苏建家等［24］给树鼩接种HHBV的新鲜血清建立了树鼩感染HHBV的模型，在树鼩血清中可观察到HBsAg及Dane颗粒。Yan等［25］用树鼩模型，进行了黄曲霉毒素B1（AFB1）摄入和HBV感染诱发树鼩肝癌及其机制的系列研究，首次在树鼩体内证实了HBV与AFB1有协同致肝癌作用。Glebe等［26~27］用纯化的HBV感染原代树鼩肝细胞，可检测出HBVcccDNA、HBVmRNA、HBcAg、HBeAg。
Cote等［28~30］研究发现，土拨鼠感染年龄和土拨鼠肝炎病毒（WHV）的不同亚型是感染后慢性化的关键，新生期土拨鼠感染WHV后由免疫介导的细胞和非细胞溶解途径清除已感染的肝细胞的能力下降，新生的土拨鼠接种WHV感染率可达60%以上。Cote等［31］给新生土拨鼠接种WHV并在感染初期切除动物大部分肝脏，1年后半数动物成慢性WHV感染。Coffin等［32］研究发现WHV可由感染的母动物垂直传播，感染的仔动物体内的WHV-DNA可持续至动物成年；处于感染恢复期的母动物所生的健康土拨鼠接种WHV时对病毒易感。
与HBV同属于嗜肝病毒科的还有地松鼠肝炎病毒（GSHV）、北极地松鼠肝炎病毒（AGSHV）、树松鼠肝炎病毒（TSHV）、雪鹅肝炎病毒（SGHBV）、苍鹭肝炎病毒（HHBV）、白鹳肝炎病毒（STHBV）等，其中以地松鼠感染GSHV模型的研究较多见［33］。
5 结 语
虽然，HBV动物模型的实验研究有了很大的进展，但仍未能建立起在生物学分类上与人类相近、感染率高、维持时间长的适用的动物模型。因此，我们应进一步加强HBV感染肝细胞分子机制的研究，提供合适的HHBV感染的动物模型。
【】
［1］蒋黎，毛青，王宇明，等. HBV感染的人鼠嵌合肝动物模型的建立［J］. 第三军医大学学报，2003，25（5）：120-122.
［2］Barker L F，Maynard J E，Purcell R H，et al. Hepatitis B Virus Inf- ection in chimpanzees：titration of subtypes［J］.J Infect Dis，1975， 132（4）：451-458.
［3］Barker L F，Maynard J E，Purcell R H，et al. Viral hepatitis，type B，in experimental animals［J］. Am J Med Sci，1975，270（1）：189-195.
［4］张涛，王树声，黄果勇，等. 猕猴感染人乙肝病毒动物模型病研究［J］. 广西预防医学，2001，7（1）：6-8.
［5］唐霓，黄爱龙，郭树华，等. DHBV感染鸭特异免疫应答比较［J］.中华肝脏病杂志，2001，9（3）：166-167.
［6］姚云清，唐霓，黄爱龙，等. 乙型肝炎病毒DNA转染与鸭乙型肝炎病毒DNA感染原代鸭肝细胞对比研究［J］. 中华医学杂志，2001，81（19）：1 157-1 158.
［7］朱清静，聂广，李翰旻，等. 鸭乙型肝炎肝纤维化模型的研究［J］.临床与实验病理学杂志，2000，16（6）：501-502.
［8］郝连杰. 德国病毒性肝炎研究进展-Hanswill教授学术讲座介绍［J］. 德国医学，2001，18（2）：62-64.
［9］胡卫江，李建秀，余宏宇，等. 乙型肝炎病毒（adr亚型）转基因小 鼠的研究［J］. 第二军医大学学报，1999，20（4）：212-213.
［10］刘红，姚玉成，何金，等. 乙型肝炎病毒核心抗原转基因小鼠的建立［J］. 第二军医大学学报，2003，24（2）：172-173.
［11］金艳花，訾晓渊，姚玉成，等. 乙型肝炎病毒preS2蛋白在转基因小鼠肝脏中的表达［J］. 第二军医大学学报，2003，24（2）：175-176.
［12］訾晓渊，姚玉成，熊俊，等. 乙型肝炎转基因小鼠品系C57-TgN（HBV adr2.0）SMMU的生物学特征［J］. 第二军医大学学报， 2002，23（11）：1 179-1 180.
