消旋多沙唑嗪及其两种光学异构体长期给药对老龄小鼠血脂水平的影响

【摘要】  目的： 观察左旋多沙唑嗪（S?DOX）、右旋多沙唑嗪（R?DOX）和消旋多沙唑嗪（rac?DOX）长期给药对老龄小鼠血脂水平的影响. 方法： 取13 mo龄雄性小鼠，灌胃给予S?DOX，R?DOX和rac?DOX，连续12 wk；分析药物对小鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL?C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL?C）和极低密度脂蛋白胆固醇（VLDL?C）的影响. 结果： 老龄模型小鼠血清VLDL?C水平显著高于青年组，而HDL?C水平显著低于青年组小鼠. 与模型对照组相比，各给药组小鼠的血清TC水平均有所降低，其中S?DOX 1.8 mg/kg组和S?DOX 0.6 mg/kg组，R?DOX 6.0 mg/kg和R?DOX 0.6 mg/kg组的降低程度具有统计学意义（P<0.05）. 除rac?DOX 0.6 mg/kg组外，其他各给药组老龄小鼠的血清VLDL?C水平均显著低于模型对照组（P<0.05）. 与模型对照组相比，S?DOX 6.0 mg/kg显著升高血清HDL?C水平（P<0.05）. 与模型组相比，R?DOX 0.6 mg/kg给药12 wk后，体质量显著增加（P<0.05）. 各给药组的动物死亡率与模型组小鼠死亡率无显著差异，各组老龄鼠的死亡率为36.4%～54.6%. 结论： 老龄雄性小鼠血清VLDL?C水平显著升高，HDL?C水平显著降低. 老龄小鼠灌胃给予S?DOX，R?DOX连续12 wk，显著降低血清VLDL?C和TC. 两种光学异构体对老龄小鼠的血脂调节作用无明显差异. 
【关键词】  多沙唑嗪 光学异构体 血脂 小鼠 衰老

　　0引言
   
　　多沙唑嗪(doxazosin，DOX)属长效、高选择性α1受体阻断药，临床使用其消旋体（racemic?doxazosin, rac?DOX）良性前列腺增生症（benign prostatic hyperplasia，BPH）合并下尿路症状(lower urinary tract symptoms，LUTS). Pessina等［1］ 、曹俊杰等［2］报道均证实rac?DOX具有调节血脂的作用. 我们利用HPLC技术和高效毛细管电泳技术对rac?DOX的光学异构体左旋多沙唑嗪（S?DOX）和右旋多沙唑嗪（R?DOX）进行了手性分离［3-4］. 有关S?DOX和R?DOX对血清脂代谢的影响，国内外尚鲜有报道. 我们拟采用灌胃给药法，观察rac?DOX，S?DOX和R?DOX对老龄小鼠血清脂质水平的影响，为rac?DOX在老年人群的临床应用提供实验数据，也为rac?DOX光学异构体的开发利用奠定理论基础. 
　　1材料和方法
　　1.1材料清洁级雄性昆明种小鼠88只，13 mo龄，体质量（53.2±6.9）g，由河北省实验动物中心提供，合格证号：602100，在实验室饲养并观察1 wk后用于实验；雄性昆明种小鼠10只，10 wk龄，体质量（36.3±1.1）g；7600?020型全自动生物化学分析仪（日本日立公司）；JM10001天平（余姚纪铭称重校验设备有限公司）；FA2004电子分析天平（上海良平仪器仪表有限公司）；LDZ5?2型离心机（北京医用离心机厂）；血清总胆固醇（TC）、甘油三脂（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL?C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL?C）试剂盒（北京北化精细化学公司临床试剂分厂）；甲磺酸S ?多沙唑嗪（S?DOX）、甲磺酸R?多沙唑嗪（R?DOX）、甲磺酸rac?多沙唑嗪（rac?DOX）（华北制药集团新药研发公司）.
　　1.2方法
　　1.2.1药液配制分别精取rac?DOX，S?DOX，R?DOX干燥粉末，加双蒸水配制成0.6 g/L溶液. 定容后均超声20 min以确保药物完全溶解；溶液储存于棕色瓶中，置阴暗、干燥处保存备用. 实验前取一定量备用药液，以双蒸水倍比稀释成所需浓度. S?DOX为0.06，0.18，0.6 g/L； R?DOX和rac?DOX各为0.06和0.6 g/L.
　　1.2.2动物分组选取13 mo健康雄性小鼠88只，按体质量将动物随机分为8组，每组11只. 分别为模型组（衰老小鼠）、S?DOX 0.6 mg/kg组、S?DOX 1.8 mg/kg组、S?DOX 6.0 mg/kg组、R?DOX 0.6 mg/kg组、R?DOX 6.0 mg/kg组、rac?DOX 0.6 mg/kg组和rac?DOX 6.0 mg/kg组. 在上述小鼠给药至11 wk时，另取10 wk雄性昆明种小鼠10只，于实验室饲养1 wk，作为青年对照组.
　　1.2.3动物饲养、给药及体质量测定除青年对照组小鼠外，以上各组动物均灌胃给药，0.01 mL/g，每周给药7 d，1次/d，连续给药12 wk；模型组小鼠给予双蒸水. 实验期间各组动物分笼喂养，自由进食、饮水. 每周称体质量1次，根据新的体质量调整给药剂量. 于末次给药后禁食（不禁水）18 h，青年对照组小鼠亦于处死前18 h禁食. 处死动物前称体质量，比较实验前后实验动物的体质量变化. 断头处死动物并取血.
　　1.2.4实验动物血脂测定小鼠血样标本直接采集于二氧化硅促凝真空采血管中，常温静置3 h，置-4℃冰箱保存24 h后，离心15 min，分离血清. 用全自动生物化学分析仪检测血脂，采用直接法测定TC，HDL?C和LDL?C；VLDL?C＝TC－（HDL?C）－（LDL?C）；采用GPO?PAP法测定TG.
　　统计学处理：  实验数据均以实测值的x±s表示. 各组间小鼠血脂各参数及体质量差异的统计学分析采用单因素ANOVA和Dunett? t?检验；各组间小鼠死亡率的统计学分析采用χ2检验；同一组内给药前后实验数据的比较采用组间t检验；实验数据的统计学分析使用Instat?2软件. 
　　2结果
　　2.1rac?DOX，S?DOX和R?DOX对老龄小鼠体质量的影响给药前，老龄模型组及各给药组的小鼠体质量在各组之间无明显差别（P>0.05，表1）. 给药12 wk后，模型组小鼠的体质量由给药前的(52.95±7.22) g降低至(45.05±7.46) g；但无显著性差异. 与模型组相比，R?DOX 0.6 mg/kg组在给药12 wk后，体质量显著增加（P<0.05）；其他各给药组与模型组相比体质量均无明显差异. 给药12 wk后，与给药前相比，仅rac?DOX 0.6 mg/kg组小鼠的体质量明显下降（P<0.05，表1）.
　　表1左旋多沙唑嗪（S?DOX）、右旋多沙唑嗪（R?DOX）和消旋多沙唑嗪（rac?DOX）对小鼠体质量的影响（略）
　　aP﹤0.05 vs 模型组；cP﹤0.05 vs 给药前.  
　　2.2rac?DOX,S?DOX和R?DOX对老龄小鼠血清脂质水平的影响模型小鼠16 mo龄的血清TC，TG，LDL?C和VLDL?C均值均高于青年（11 wk龄）组小鼠，而血清HDL?C水平的均值低于青年组小鼠；其中VLDL?C和HDL?C水平在两组间差异显著（P<0.01，表2）. 与模型对照组比较，各给药组小鼠的血清TC水平均有所降低，其中S?DOX 1.8，0.6 mg/kg组之间、R?DOX 6.0，0.6 mg/kg组之间的降低程度具有统计学意义（P<0.05或0.01）. 与模型对照组比较，除rac?DOX 0.6 mg/kg组外，其他各给药组均可显著降低老龄小鼠血清VLDL?C水平（P<0.05或0.01，表2）. 与模型对照组比较，各给药组小鼠的血清HDL?C水平均有所升高，其中S?DOX 6.0 mg/kg组的升高程度具有统计学意义（P<0.05）. 各给药组老龄鼠的血清TG，LDL?C水平与模型对照组相比，均有下降趋势，但无统计学意义.
　　表2左旋多沙唑嗪（S?DOX）、右旋多沙唑嗪（R?DOX）和消旋多沙唑嗪（rac?DOX）对小鼠血脂的影响（略）
　　aP﹤0.05， bP﹤0.01 vs 模型组. TC: 总胆固醇;TG: 甘油三脂;HDL?C: 高密度脂蛋白胆固醇;LDL?C: 低密度脂蛋白胆固醇;VLDL?C: 极低密度脂蛋白胆固醇.
　　2.3rac?DOX，S?DOX和R?DOX对老龄小鼠死亡率的影响老龄模型组11只小鼠在12 wk实验过程中死亡5只，死亡率为45%；经尸检，肺、胸腔和胃肠未见明显病变. 各给药组老龄小鼠的死亡情况与模型组小鼠相似，各给药组的动物死亡率在36%～55%，与模型组小鼠死亡率无显著差异（P>0.05）.
　　3讨论
　　BPH是老年人群的常见病，常导致LUTS. 对于BPH合并LUTS的患者，无论其是否伴有高血压，α1受体阻断药均作为一线药物［5］. 国外学者利用HPLC技术对rac?DOX进行了手性分离［6］，并研究了rac?DOX及其光学异构体S?DOX和R?DOX对人前列腺组织的药作用. 实验结果表明，rac?DOX，S?DOX和R?DOX对人前列腺组织α受体的阻断作用强度相同［6］. 我们的工作证实麻醉大鼠静脉或十二指肠给予rac?DOX及其光学异构体，均可剂量依赖性地降低大鼠颈总动脉血压；其中S?DOX降低血压的作用显著弱于rac?DOX和R?DOX；但是，rac?DOX及其光学异构体降低大鼠膀胱排尿压的作用强度无明显差异［7-8］. 此外，与R?DOX和rac?DOX相比，S?DOX在降低麻醉豚鼠膀胱排尿压的同时，对膀胱的排尿阈值、排尿间隔和排尿量无不良影响，能较好地改善膀胱功能，是具有良好开发前景的治疗LUTS药物［9］.
　　国外临床试验研究结果表明，长效、高选择性α受体阻断药rac?DOX对于合并脂质代谢障碍的高血压病患者，具有降低血压和改善血脂水平的双重效应. Hoogerbrugge等［10］在80例伴有外周动脉硬化及高TC血症的中老年（45～70岁）高血压病患者中，比较了长期口服rac?DOX和双氢克尿噻的临床疗效. 连续服用rac?DOX 3 a，患者TG水平显著下降了13.7%，HDL?C水平提高了25.7%，LDL?C水平下降了30.1%；但是，双氢克尿噻组患者的血脂水平无显著性改变. Pessina等［1］亦发现，rac?DOX附加治疗可使1/3患者的高血压得到良好控制和糖代谢障碍得到改善的同时，尚能降低患者的血TG水平和LDL?C水平. 曹俊杰等［2］采用高胆固醇饲养家兔模型,口服给予rac?DOX 4 mg/d，连续给药28 d, rac?DOX使兔血TC水平明显降低,HDL?C水平明显升高［2］.
　　我们的实验中，老龄模型小鼠血VLDL?C水平显著高于青年组，而HDL?C水平显著低于青年组小鼠；表明老龄小鼠的血脂改变与人类衰老时的血脂变化具有相似性. 与老龄模型小鼠相比，各给药组小鼠的血TC水平均有所降低，其中S?DOX（1.8 mg/kg和0.6 mg/kg），R?DOX（6.0 mg/kg和0.6 mg/kg）组小鼠血TC水平的降低程度具有统计学意义（P<0.05）；S?DOX，R?DOX和rac?DOX均可显著降低老龄小鼠的血VLDL?C水平（P<0.05）. 此外，与老龄模型小鼠相比，S?DOX 6.0 mg/kg显著升高血HDL?C水平（P<0.05）. 从实验的表面结果来看，rac?DOX对老龄小鼠的调血脂作用似乎弱于S?DOX和R?DOX；但是，考虑到本实验中老龄动物的死亡率较高，3 mo给药结束时各组老龄小鼠的死亡率均在36.4%～54.6%，最终可进入统计学分析的动物数较少. 因此，本实验结果难以对S?DOX，R?DOX和rac?DOX的调血脂作用强度进行比较. 为了分析本实验中血脂测定方法学的可靠性，我们将青年组小鼠的血脂水平与国内报道的昆明种小鼠血脂测定结果［11-12］进行了对比；结果表明，本实验测得的血TC，TG，HDL?C，VLD?C和VLDL?C水平与文献值一致.
　　在老年医学基础实验研究领域，我国常采用昆明种小鼠作为实验对象；所用老龄雄性小鼠的年龄包括10 mo龄［13］、11 mo龄［14］和18 mo龄［15］. 据此，我们亦采用雄性昆明小鼠，给药前小鼠为13 mo龄，实验结束时为16 mo龄；所用小鼠的种系、性别和年龄与国内老龄小鼠的研究报道具有一致性.
　　老龄模型组小鼠经3 mo饲养，死亡率为45.4%；经尸检，肺、胸腔和胃肠未见明显病理学改变. 各给药组老龄小鼠的死亡率与模型组相比，无显著差别，说明动物的死亡并非药物的毒性作用，可能属于老龄小鼠的自然死亡. R?DOX 0.6 mg/kg组给药12 wk后，与模型组小鼠相比，小鼠体质量有所增加；但是，与给药前相比，未见明显变化. 然而，rac?DOX 0.6 mg/kg组小鼠体质量与模型组相比虽无明显变化，但与给药前相比，体质量明显下降. 综上所述，老龄雄性小鼠连续灌胃给予S?DOX和R?DOX 12 wk，显著降低血VLDL?C和TC水平，两种光学异构体对老龄小鼠的血脂调节作用无明显差异. 我们的结果还表明，昆明种雄性老龄小鼠血VLDL?C水平显著升高，HDL?C水平显著降低；可用于老龄血脂实验研究.
　
【文献】
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