益肾通络解毒汤对糖尿病肾病大鼠肾脏功能的影响
【摘要】 目的：观察益肾通络解毒汤对糖尿病肾病大鼠肾脏损害的保护作用。方法：对12月龄糖尿病肾病大鼠的一般状态、常规生化指标进行检测。结果：益肾通络解毒汤的中药实验组与苯那普利治疗的阳性对照组的肾重/体重比值、Ccr显著低于DN模型组，且DN模型组大鼠的血清BUN、CRE均明显高于正常组，益肾通络解毒汤治疗的中药实验组和苯那普利治疗的阳性对照组的血清BUN、CRE较DN模型组均明显降低。结论：益肾通络解毒汤能够改善糖尿病肾病大鼠一般状态，具有一定的调节糖脂代谢的作用；能够抑制糖尿病肾病大鼠早期肾脏肥大及高滤过，具有减少尿蛋白排出的作用；能够降低糖尿病大鼠升高的血清BUN、CRE、Ccr，具有一定的保护肾功能的作用。
【关键词】 益肾通络解毒汤 血糖 血脂 肾功能 尿微量白蛋白与尿蛋白含量 实验研究
糖尿病肾病(DN)是糖尿病的常见严重微血管并发症之一，已成为终末期肾功能衰竭(ESRF)的主要原因，故对DN的早期防治显得尤为重要。实验作为本课题机理研究的基础，观察益肾通络解毒汤对糖尿病肾病大鼠肾脏损害的保护作用。
1 材料与方法
1.1 药品与试剂 链脲佐菌素(STZ)由Sigma公司生产；益肾通络解毒汤为长春中医药大学第一附属制剂室自制，由生地、人参、枸杞子、黄芪、土茯苓等8味药组成；尿微量白蛋白酶免疫试剂盒购自上海德波生物技术有限公司。
1.2 动物 Wistar大鼠，雄性，180－230g/只。
1.3 仪器 全自动生化分析仪(日本日立，7150型)，GAMMA?C12γ放射免疫测定仪(天津DPC公司制造)，DG?3022A酶联免疫检测仪(国营华东管厂制造)。
1.4 动物模型及分组 大鼠60只在适应性喂养7d后，禁食但不禁水12h，按体重随机分为2组，即正常对照组10只(A组)，DN模型制作组50只。模型制作组单次腹腔注射STZ 52mg/kg(临用前用0.1mol/L枸橼酸缓冲液溶解，pH4.2)，正常对照组仅腹腔注射等体积上述缓冲液。注射STZ 72h后，尾静脉采血测空腹血糖并同时测尿糖，血糖≥16.7mmol/L，尿糖?以上者列入DN观察对象。
将造模成功的45只雄性大鼠，按体重、空腹血糖随机分为空白对照组(B组)；益肾通络解毒汤处理的中药实验组(C组)；苯那普利处理的阳性对照组(D组)，每组15只。
给药途径为分别将临用前配成的混悬液灌胃，中药实验组按5g/kg体重给益肾通络解毒汤浓缩液，阳性对照组按15mg/kg体重给苯那普利混悬液，正常对照组和DN模型组则灌服等体积饮用水，连续给药12周，每日上午1次。动物单笼饲养，自由进食饮水。
1.5 标本收集 实验过程中及12周末，按实验要求在不同时期将大鼠置入代谢笼内，准确收集每只大鼠24h尿液，记录尿量后，按待测指标要求进行样品预处理，留样本于-20℃待测尿蛋白等。收集尿液期间动物禁食，自由饮水，尽量减少声、光等对动物的刺激。12周末处死前称重，将大鼠乙醚麻醉下眶后静脉采血，肝素抗凝，2000r/min离心10min后，分离血清，－74℃冰箱里冻存，备测血肌酐及其他生化指标。打开腹腔，快速切除肾脏，在腹主动脉插管后予4℃预冷的生理盐水反复灌洗后，滤纸吸干，去掉包膜，即刻称重。
1.6 血、尿生化指标 血糖、血脂、血清肌酐、尿素氮，均采用日立7150型全自动生化分析仪测定。尿微量白蛋白与尿蛋白含量分别采用ELISA法(放射免疫法)及考马斯亮蓝法测定。并12周末尿白蛋白排泄率(UAER)。
1.7 统计学处理 所有数据用均数±标准差(±s)表示，采用SPSS 11.5软件进行One?Way ANOVA分析检验。以P＜0.05为有显著性统计学意义。
2 结果
2.1 一般情况 C组大鼠精神状况、反应、毛色较A组差，但比B组、D组好。无合并白内障，实验过程中有3只死亡。
2.2 益肾通络解毒汤对实验性糖尿病大鼠肾功能的影响(见表1)；对血脂的影响(见表2)。
2.3 24h尿微量白蛋白动态变化比较(见表3)。造模后4、6、8、12周各组DN大鼠24h尿微量白蛋白较A组显著增加(P＜0.01)，并随病程延长呈缓慢上升趋势。C组、D组明显低于B组(P＜0.05)，C组和D组之间比较，24h尿微量白蛋白在8周、12周末C组优于D组，有显著性统计学意义(P＜0.05)。表明益肾通络解毒汤和苯那普利均有降低尿微量白蛋白的作用，但C组较D组效果更佳。表1 各组实验大鼠12周末GLU、BUN、CRE、Ccr结果比较表2 各组实验大鼠12周末血脂比较
3 讨论
3.1 改善糖代谢 虽然部分DM患者良好的血糖控制同样会导致DN的发生，但不可否认的是高血糖造成的损害。研究表明，糖代谢紊乱是DM慢性并发症包括DN的启动因素，也是DN发生和的基本因素，过多的葡萄糖集中在肾组织是导致DN的根本原因［1］。
3.2 调节脂代谢 尽管严格控制血糖可以减少DN的发生［2］，但在血糖控制良好的患者中，仍有26％最终发展为DN 。目前认为脂代谢紊乱是DN一种独立的损伤因素［3］，血脂异常在DN的早期常已存在，血脂异常与DN程度密切相关［4］。
3.3 减少蛋白尿 蛋白尿的出现是DN发展的必然结果，灵敏地反映肾脏损害的程度，微量白蛋白尿在DN早期诊断中具有重要意义［5］。
3.4 抑制肾肥大、保护肾功能 肾脏肥大和高滤过是DN早期的病理生理特征，且伴有肾小球滤过率(GFR)增高，GFR增高与肾小球直径呈正相关，这种早期的肾体积增大和GFR增高具有可逆性。通常早期以Ccr反映GFR的变化意义，肾重/体重比值表示肾脏肥大情况，这样可排除个别体重较大的动物具有较大肾脏的个体差异，以及每个动物本身的肾脏随周龄增加而增长的因素，使表示肾重增长的参数比较客观。
本研究结果表明，益肾通络解毒汤逐渐降低了DN大鼠的血糖水平，可减轻各种因素对肾脏的损害，在缓解多饮、多食、多尿、体重下降等症状的同时，对DN大鼠的阑尾、肢体感染、白内障等合并症亦具有一定的防治作用。具有一定的调节脂代谢作用，能明显降低DN大鼠血清TCho、TG、LDL。有较好的降低尿蛋白排泄的作用。可减轻DM大鼠肾肥大、高滤过，抑制肾损害进程，有保护肾功能的作用。
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