痛风止痛胶囊中薯蓣皂苷元的含量测定

【关键词】  痛风止痛胶囊；薯蓣皂苷元；高效液相色谱法

    痛风止痛胶囊是由秦艽、百合、土茯苓、没药等14味中药材组成的中药复方制剂。主要用于痛风急性发作期、湿热、关节疼痛等。为了控制痛风止痛胶囊的质量，保证临床疗效，对其含量测定的方法进行了考查，以薯蓣皂苷元为定量指标，用高效液相色谱法测定，获得较满意结果。

    1  实验材料

    1.1  仪器与试剂  日本岛津LC?10 ATVP高效液相色谱仪,SPD?10AVP紫外检测器,7725 i手动进样器，浙江大学N?2000数据处理系统，薯蓣皂苷元对照品(由药品生物制品检定所提供，批号:0703?9813)。所用试剂均为色谱纯和分析纯。

    1.2  色谱条件  色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂250 mm×4.6 mm，流动相:甲醇?水溶液(84：16)，检测波长：203 nm，灵敏度：0.05 AUFS，流速：1 mL/min，柱温：室温，理论板数按薯蓣皂苷元应不低于4000。

    2  实验方法

    2.1  对照品溶液的制备  精密称取减压干燥至恒重的薯蓣皂苷元对照品溶液12.5 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1 mL中含薯蓣皂苷元0.25 mg)。

    2.2  供试品溶液的制备  取本品10粒，除去囊壳，取本品粉末(过4号筛)约1 g，精密称定，置锥形瓶中，加甲醇50 mL，超声处理(功率250 W，频率33 kHz)30 min，滤过，滤渣用甲醇20 mL洗涤，合并甲醇液，回收甲醇蒸干，残渣加3 mol/L盐酸溶液20 mL(10、5、5 mL)溶解，依次转移至锥形瓶中，水浴中加热水解30 min。取出，放冷，加入三氯甲烷回流15 min，用三氯甲烷30 mL，加热回流15 min，用三氯甲烷30 mL，同法处理1次，滤过，再用三氯甲烷30 mL洗涤容器及残渣，合并三氯甲烷液，回收三氯甲烷至干,残渣加甲醇溶解并转移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得。

    2.3  线性关系考察  　　分别精密吸取薯蓣皂苷元对照品溶液1、5、10、15、20 μl注入液相色谱仪，以进样量(μg)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，薯蓣皂苷元的回归方程Y＝35008.89975X+7854.941378、r=0.9995，由此确定薯蓣皂苷元线性范围0.2332-4.664 μg,见表1。表1  薯蓣皂苷元线性关系考察进样量

   2.4  稳定性实验  精密吸取同一供试品溶液及对照品溶液各10 μl，每隔一定时间分别注入液相色谱仪，依法测定，以薯蓣皂苷元峰面积积分值为指标，测定其稳定性，见表2。表2  薯蓣皂苷元稳定性实验时间(h)0481624RSD(%)对照品峰面积积分值353510.750358808.750347523.594359975.063348679.688353699.5691.60样品峰面积积分值262636.16267253.031268111.844262607.406263482.156264818.11861.00    稳定性考察结果表明在0-24 h薯蓣皂苷元对照品和样品的测定结果RSD分别为1.60%和1.00%，说明在此时间范围内测定结果准确可靠。

    2.5  精密度产验  精密吸取同一供试品溶液及对照品溶液各10 μl，分别注入液相色谱仪，连续进样5次，依法测定，记录峰面积积分值，，考察精密度，见表3。

    薯蓣皂苷元精密度考察结果:对照品和样品的RSD分别为2.68%、2.79%，表明仪器和方法的精密度良好。表3  薯蓣皂苷元精密度试验序号12345RSD(%)对照品峰面积积分值353897.000345061.031341596.188328626.625339342.531341704.6752.68样品峰面积积分值274516.750258704.203271078.906276114.969277460.000271574.96562.792.6  重现性实验  精密称取同一批样品共5份，按供试品溶液项下制备，依法独立测定，以薯蓣皂苷元总量计，测定样品含量，以考察本法的重现性，结果见表4、表5。表4  薯蓣皂苷元重现性实验序号12345含量(mg/g)1.22191.21631.16691.23911.2085(mg/g)1.2105RSD(%)2.22表5  薯蓣皂苷元重现性实验序号12345含量(mg/g)0.50420.485960.4820.49140.4844)(mg/g)0.4897RSD(%)1.79     　 重现性结果表明，本法测定薯蓣皂苷元总含量作为质控指标，RSD分别为2.22%、1.79%，重现性良好。

    2.7  回收率实验  精密称取同法测定的已知含量(薯蓣皂苷元1.2105 mg/g)样品共5份，分别精密加入对照品适量，依法测定，计算回收率，结果见表6。表6  薯蓣皂苷元回收率实验样品称样量(g)样品中含量(mg)加标量(mg)测得量(mg)回收率(%)(%)RSD(%)0.50650.61310.6821.285298.550.50180.60740.6821.269197.010.50470.61090.6821.270196.6697.801.380.49720.60190.6821.282099.820.50220.60790.6821.269396.98        薯蓣皂苷元回收率结果表明，本法平均回收率97.80%,RSD为1.38%表明本法准确性较好，方法可行。

    3  实验结果

    依法取3批不同产地秦艽药材依法制备药材溶液，每批2份，分别精密吸取对照品溶液及秦艽药材溶液各10 μl,注入液相色谱仪测定峰面积，计算3批药材含量，结果见表7。

    表7  3批药材的含量测定结果样品批号123含量(％)0.470.410.39    　　根据上述3批药材含量测定结果，暂定本品秦艽药材含薯蓣皂苷元总量不得少于0.35%。

    4  讨论

    本实验当中，选择了秦艽所含薯蓣皂苷元作为被测成分，进行含量测定，对其进行了系统适用性实验和方法学的考察，证明了该方法的重现性和稳定性良好，并最终给出了相应的质量标准,本品含秦艽以薯蓣皂苷元计,每粒不得少于0.50 mg。以便于进行质量检测。