贲门癌中c?erbB?2、MTA1及E?cadherin的表达

【摘要】  　　目的 探讨c?erbB?2、MTA1及E?cadherin蛋白在贲门癌组织中的表达与肿瘤生物学行为的相关性，以及它们三者之间的相关性。方法 采用免疫组织化学方法对60例贲门癌组织和18例癌旁组织中c?erbB?2、MTA1及E?cadherin蛋白的表达情况进行检测。结果 c?erbB?2的表达与贲门癌的浸润、转移呈正相关，与分化程度呈负相关(P<0.05)。MTA1的表达与贲门癌的浸润深度无显著相关性，与贲门癌的淋巴结转移呈正相关，与分化程度呈负相关(P<0.05)。E?cadherin的表达与贲门癌的浸润深度、转移呈负相关(P<0.05)，与分化程度无关。Spearman等级相关分析显示，c?erbB?2与MTA1的表达呈显著正相关(rs =0.276，P<0.05)，MTA1与E?cadherin的表达呈负相关(rs =-0.293，P<0.05)。结论 c?erbB?2与MTA1的高表达及E?cadherin的表达减少可能是促进贲门癌浸润和转移的重要因素。

【关键词】  贲门癌　c?erbB?2；MTA1；E?cadherin　免疫组织化学

　　Clinicopathological  Study on c?erbB?2,Metastasis?associated  Protein 1 (MTA1) and  E?cadherin Expression in Gastric Cardia Cancer

　　Abstract：Objective    To investigate the expression of  c?erbB?2, MTA1 and E?cadherin and relationship between the expression of these proteins and the tumor biological behavior,as well as relationship between these proteins in gastric cardia cancer.Methods   Immunohistochemical technique was used to detect the expression of  c?erbB?2, MTA1 and  E?cadherin among 60 gastric cardia cancer samples and 18 cases of adjacent mucosa tissue.Results  c?erbB?2 over?expression was positively correlated with the depth of invasion, lymphatic metastasis and was inversely correlated with the cancer differentiation (P<0.05). MTA1 over?expression  was not associated with the depth of cancer invasion, and was significantly positively correlated with lymphatic metastasis, inversely correlated with the differentiation level(P<0.05). E?cadherin low?expression was inversely correlated with the depth of invasion, lymphatic metastasis, and was not associated with the differentiation level (P<0.05). By using the Spearman Correlation test to analyze the data,there was a positive correlation between MTA1 and  c?erbB?2 expression, (rs = 0.276, P<0.05).  And an inverse correlation between MTA1 and E?cadherin expression,(rs=-0.293, P<0.05).Conclusion  Over?expression of  c?erbB?2, MTA1 and low?expression of E?cadherin may play an important role in invasion and metastasis of gastric cardia cancer. 

　　Key words：Gastric cardia cancer; c?erbB?2; MTA1; E?cadherin; Immunohistochemistry

　　0  引言
   
　　贲门癌的浸润、转移是其患者主要的致死原因。肿瘤的侵袭转移是一个复杂的病变过程，涉及多个基因的改变。c?erbB?2、MTA1及E?cadherin基因被认为与多种恶性肿瘤的侵袭和转移密切相关，但它们与贲门癌的浸润、转移则尚无研究阐明。本研究采用SP免疫组织化学方法，检测了60例贲门癌组织和18例癌旁组织中c?erbB?2、MTA1及E?cadherin的表达情况，并初步分析它们与贲门癌浸润转移等临床病理特征的关系。

　　1  资料与方法 

　　1.1  资料  实验组贲门癌标本60例为广东省揭阳市人民未经过的手术标本，其中男46例，女14例；最大年龄73岁，最小年龄43岁。根据2002年WHO关于胃肿瘤的分类将其分为乳头状腺癌、管状腺癌、未分化癌等。其中，腺鳞癌1例，未分化癌2例，乳头状腺癌6例，管状腺癌51例。为了方便统计，将乳头状腺癌与高分化管状腺癌列入高分化腺癌组，将未分化癌列入低分化腺癌组,并将高分化腺癌组与中分化腺癌组合并为一组。以18例癌旁组织为对照组。

　　1.2  标本及切片  所有标本经常规甲醛固定、石蜡包埋。每例组织蜡块4 μm连续切片10张, 其中1张切片ＨＥ染色作光镜下诊断复查, 另3张切片作c?erbB?2、MTA1及E?cadherin免疫组织化学染色，其余备用。

　　1.3  主要试剂  一抗分别为美国Santa Cruz公司的浓缩型山羊抗人MTA1多克隆抗体（工作浓度1∶200）以及福州迈新公司的即用型鼠抗人c?erbB?2单克隆抗体和鼠抗人E?cadherin单克隆抗体及即用型SP超敏试剂盒，严格按SP法步骤操作。用PBS液代替一抗作为阴性对照，已知阳性标本作阳性对照。

　　1.4  免疫组织化学染色  采用SP法，常规脱蜡至水化，以枸橼酸盐缓冲液微波炉抗原修复法修复抗原，其他步骤均严格按照说明书操作。

　　1.5  结果判断  c?erbB?2阳性染色主要定位在细胞膜，部分细胞胞浆也有阳性表达，呈棕黄色颗粒状,见图1；MTA1蛋白主要在细胞核表达，部分细胞胞浆也呈阳性反应，呈棕黄色颗粒状，见图2；E?cadherin阳性部位定位于细胞膜，呈棕黄色颗粒状，见图3。阳性结果判定具体如下：阳性细胞数量计0～4分: 无计0分, ≤25%计1分, 26%～50%计2分, 51%～75%计3分, >75%计4分。染色强度计0～3分: 无色计0分，浅黄色计1分, 棕黄色计2分, 棕褐色计3分。将两项指标评分相乘, 根据总分分为四级: 即0分为阴性（-）, 1～2分为弱阳性（+）, 3～4分为阳性（++）,  大于4分则为强阳性（+++）。

　　1.6  统计学处理  在SPSS10.0统计软件包上行χ2检验和Spearman等级相关分析，P<0.05为有显著差异。

　　2  结果 

　　2.1  c?erbB?2、MTA1及E?cadherin在贲门癌组织中的表达  见表1。

　　2.2  c?erbB?2、MTA1及E?cadherin在贲门癌组织中的表达的相关性分析
   
　　对c?erbB?2与MTA1在贲门癌中的表达情况，通过统计学分析结果显示两者的表达密切相关（χ2 =21.600，P=0.000）。Spearman等级相关分析提示c?erbB?2表达与MTA1表达呈正相关（rs =0.276, P<0.05）。
   
　　对MTA1与E?cadhrein在贲门癌中的表达情况,经统计学分析结果亦显示其表达密切（χ2 = 8.154, P =0.004），Spearman等级相关分析提示MTA1表达与E?cadherin表达呈负相关（rs = -0.293,P<0.05）。

　　2.3  c?erbB?2/MTA1联合表达与贲门癌浸润和转移的相关性
   
　　在22例c?erbB?2(-)/MTA1(-)的贲门癌标本中，有7例浸润至浆膜层（31.8%），5例发生淋巴结转移(22.7%)；而在26例c?erbB?2(+)/MTA1(+)的贲门癌标本中，有19例浸润至浆膜层（73.1%），20例发生淋巴结转移(76.9%)。分别比较两组浸润至浆膜层的阳性率以及淋巴结转移率，均有显著性差异，P值分别是0.004和0.000。

　　表1  c?erbB?2、MTA1及E?cadherin在贲门癌组织中的表达情况（略）
   
　　表中数据分别代表c?erbB?2/MTA1/E?cadherin的例数与结果

　　2.4  MTA1/E?cadherin联合表达与贲门癌浸润和转移的相关性
   
　　在22例MTA1(-)/E?cadherin(+)的贲门癌标本中，有10例浸润至浆膜层（45.5%），8例发生淋巴结转移（36.4%）；而在18例MTA1(+)/E?cadherin(-)的贲门癌标本中，有15例浸润至浆膜层（83.3%），16例发生淋巴结转移（88.9%）。两组浸润至浆膜层的阳性率以及淋巴结转移率相比均有显著性差异，P值分别是0.014和0.001。

　　3  讨论 
   
　　恶性肿瘤的浸润转移是导致患者死亡的主要原因,也是临床的主要难点。因此寻找较好的检测指标判断肿瘤的浸润、转移等生物学特性，为临床及时提供最佳的治疗方案十分重要。
   
　　c?erbB?2原癌基因也称为Her?2或neu基因，该基因表达产物p185结构同源于生长因子受体（EGFR），是一种跨膜蛋白，可接受EGF样物质的信息从而刺激细胞增殖。c?erbB?2基因的过表达与乳腺癌、卵巢癌和胃癌等多种肿瘤的发生、转移及预后密切相关。本研究发现c?erbB?2的高表达可能阻止贲门癌癌细胞分化成熟，并发现c?erbB?2的表达与贲门癌的侵袭、转移呈正相关，说明c?erbB?2的高表达增强了贲门癌细胞的浸润和转移能力。
   
　　MTA1（metastasis?associated protein 1）是一种新近发现的肿瘤转移相关基因，它与许多恶性肿瘤的浸润转移密切相关，如乳腺癌、食道癌、肝癌[1?4]等。MTA1促进恶性肿瘤的浸润和转移的确切机制目前还不清楚。MTA1蛋白能与组蛋白去乙酰化酶(HDACs)结合,募集HDACs到目标基因的启动子区域,通过去除组蛋白的乙酰基来重塑染色质结构,使其变得更加紧密而不利于转录[3],MTA1或许可以通过此种功能直接或者间接作用于某些抑制肿瘤浸润转移的基因,下调其转录。Hofer等[4]的研究发现MTA1可以显著改变细胞角蛋白丝系统的组装及细胞骨架蛋白的定位,并使细胞获得更具侵袭性和转移性的表型。MTA1可能通过以上这些途径实现其促进肿瘤浸润转移的目的。本实验发现MTA1的高表达能促进贲门癌的淋巴结转移，亦可能阻碍贲门癌细胞分化。但本研究发现MTA1阳性率与癌浸润深度无显著性差异，这与一些学者的研究报道不一致，可能因本实验采用免疫组织化学染色来研究MTA1蛋白的表达，而某些学者为mRNA水平的研究，研究方法的差异可能导致结果不一致。
   
　　E?cadherin（上皮细胞钙粘素）是钙粘素家族中的一员，它主要分布于各种上皮细胞中。它通过胞浆连环素与细胞骨架蛋白相连，是介导细胞之间以及细胞与细胞外基质粘附的主要分子之一。近年来研究认为E-cadherin粘附功能的丧失是肿瘤细胞获得高侵袭性的关键[5?7]。本实验亦证实了这一观点，发现E?cadherin表达减少会明显促进贲门癌的浸润、转移。
   
　　通过对上述三种蛋白之间的相关性进行分析，发现在贲门癌组织中，c?erbB?2与MTA1的表达呈正相关，而MTA1与E?cadherin的表达则呈负相关。这表明，在贲门癌的浸润转移过程中，c?erbB?2与MTA1的高表达及E?cadherin的表达减少可能起着重要的作用。c?erbB?2与MTA1或MTA1与E?cadherin之间存在着某种内在联系，使它们相互协调作用，导致肿瘤的浸润与转移。因此，联合检测c?erbB?2/MTA1和/或MTA1/E?cadherin可以较客观准确地作为判断贲门癌浸润和转移的生物学指标，为贲门癌的治疗及预后提供依据。

【】
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　　[2] Moon WS, Chang K, Tarnawski AS. Overexpression of metastatic tumor antigen 1 in hepatocellular carcinoma:Relationship to vascular invasion and estrogen receptor?alpha[J]. Hum Pathol, 2004, 35(4): 424?429.

　　[3] Kumar R,Wang RA,Bagheri?Yarmand R. Emerging roles of MTA family members in human cancers[J].Semin Oncol,2003,30 (5 Suppl 16):30?37.

　　[4]Hofer MD,Menke A,Genze F,et al. Expression of MTA1 promotes motility and invasiveness of PANC?1 pancreatic carcinoma cells[J].Br J Cancer,2004,90 (2):455?462.

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