川芎嗪对大鼠脑缺血/再灌注肝损伤的影响

【摘要】  目的: 观察川芎嗪对大鼠脑缺血-再灌注肝损伤的影响。方法: 采用Pulsinelli的方法建立大鼠急性全脑缺血/再灌注模型。将Wistar大鼠随机分为3组，即假手术对照组、缺血/再灌注组（ I/ R）和川芎嗪+ 缺血/ 再灌注组（ TMP + I/ R） ，分别测定各组肝组织超氧化物歧化酶（ SOD）、谷胱甘肽过氧化酶（GSH-PX）、丙二醛（MDA）、Ca2 +-Mg2 +-ATP酶的含量及肝细胞形态学变化。结果:川芎嗪组肝组织MDA含量明显低于缺血/再灌注组（ P < 0. 01） ， SOD， GSH-PX， Ca2+-Mg2+-ATP酶的含量均明显高于缺血再灌注组（ P < 0. 01） ，肝细胞形态学异常变化明显减轻。结论:川芎嗪能减少大鼠脂质过氧化，改善ATP酶的功能，减轻大鼠脑缺血/再灌注所致肝脏损伤。

【关键词】  川芎嗪;脑; 缺血/再灌注;肝损伤

　　川芎嗪（ Tetramethylpyrazine， TMP）是从川芎中提出的一种生物碱，具有解痉、扩管、降压等广泛的生物作用，已泛应用于心血管疾病的治疗。岑得意等［1］用大鼠脑梗塞模型观察川芎嗪对大鼠脑梗塞的作用，结果显示川芎嗪可显著改善大鼠异常神经症状和抑制ALP活性的下降，显著抑制ADP致血小板的聚集。笔者以往的研究表明［2］，川芎嗪对脑缺血/再灌注损伤具有保护作用，TMP可减少脑缺血/再灌注损伤中皮层和海马NO 的生成，降低NO的损害作用，从而对脑缺血产生保护作用，对癫痫大鼠模型神经细胞的损伤具有保护作用［3，4］。脑缺血/ 再灌注损伤是重型颅脑损伤病人减压术后的一种常见病症，由此而引发的多脏器功能损害更使病情复杂化，增加了救治难度。肝脏作为最易受累的器官之一，在临床和实验中受到人们的高度重视。于是我们采用Pulsinelli 等的方法建立大鼠急性全脑缺血/ 再灌注模型，旨在研究川芎嗪对大鼠脑缺血/再灌注肝损伤的作用，并探讨其可能机制，从而为临床预防和治疗脑缺血/ 再灌注损伤提供实验依据。

　　1材料与方法
　　
　　1.1药品及试剂川芎嗪注射液40mg/2 mL （北京第四制药有限公司生产，批号20060701），SOD， GSH-PX，MDA， Ca2+-Mg2+-ATP酶试剂盒（北京中山生物技术有限公司生产）。

　　1.2实验动物与分组健康雄性Wistar大鼠48只（广州医学院动物中心提供），体重200～250 g ，随机分成3组（n = 16） ，即假手术对照组、缺血/ 再灌注组（ I/ R） 及川芎嗪+缺血/ 再灌注组（ TMP + I/ R） ，于术前30 min经尾静脉给予川芎嗪8 mg/kg，其余两组同时给予等体积生理盐水。

　　1.3模型制备与标本采集缺血/ 再灌注组和川芎嗪+ 缺血/ 再灌注组按Pulsinelli等的方法建立大鼠急性全脑缺血/再灌注模型，即20 %乌拉坦2 ml/ kg 腹腔麻醉，电灼凝固双侧椎动脉，夹闭双侧颈总动脉，造成全脑缺血，30 min 后松夹，开放双侧颈总动脉灌流60min。对照组仅做动脉分离，不进行电凝和夹闭。全部动物于实验1.5h末经髂动脉取血并迅速放血致死，取肝左中叶组织匀浆，同时取少许肝左中叶组织行光、电镜观察。

　　1.4指标测定SOD活性用邻苯三酚自氧化法检测［5］，MDA含量测定用改良硫代巴比妥酸（ TBA）比色法测定［6］， 5. 5，二硫对二硝基苯甲酸（DTNB）比色法测定GSH-PX［7］，定磷法测定Ca2+-Mg2 +-ATP酶［8］。光镜检查:取肝组织经10%甲醛固定，石腊包埋切片， HE染色，观察切片。电镜检查:肝组织用生理盐水漂洗后2. 5%戊二醛固定，送电镜室，经四氧化锇双固定，脱水、包埋、切片等操作后，在日立H-600透视电镜下观察并拍片。 1.5统计学分析所有数据均用均数±标准差（ x±s）表示，组与组之间采用t 检验。

　　2结果

　　2.1肝组织中SOD、GSH-PX及MDA含量的变化大鼠脑缺血/再灌注后肝组织SOD、GSH-PX活性下降，而MDA含量明显上升，与假手术对照组比较有显著性差异（ P < 0. 01） 。 川芎嗪治疗组肝组织中MDA含量明显低于缺血再灌注组（ P < 0. 01） ， SOD、GSH-PX的含量均明显高于缺血再灌注组（ P < 0. 01）。见表1。

　　表1 各组大鼠肝组织SOD、GSH-PX、MDA、Ca 2 +-Mg2 +-ATP酶的测定结果（略）

　　注: △与假手术对照组比较， P < 0. 01; * 与缺血再灌注组（ I/R）比较， P <0. 01。

　　2.2肝组织ATP 酶活性变化大鼠肠缺血再灌注后肝组织Ca2 +-Mg2 +-ATP酶活性下降，与假手术对照组比较有显著性差异（ P < 0. 01） 。川芎嗪治疗组肝组织中Ca2 +-Mg2 + -ATP酶活性明显高于缺血再灌注组（ P < 0. 01）。见表1。

　　2.3肝细胞形态学改变光镜下假手术对照组肝小叶正常，肝细胞索清晰，围绕中央静脉呈放射状排列;缺血再灌注组肝小叶结构正常，肝细胞水肿，肝窦淤血变窄;川芎嗪治疗组肝小叶结构正常，肝细胞索及肝窦排列整齐，未见肝细胞水肿。电镜下假手术对照组肝细胞器正常;缺血再灌注组肝细胞有空泡形成，线粒体肿胀，胞浆疏松化，部分肝细胞核固缩、变小;川芎嗪治疗组肝细胞损伤减轻，内未见空泡，线粒体稍肿胀。

　　3讨论

　　正常体内产生一定量自由基，可被体内自由基清除系统如SOD、过氧化氢酶等迅速清除，不致于堆积过多引起组织细胞损伤［9］。在病理情况下，机体内自由基清除系统功能下降，自由基氧化生物膜的不饱和脂肪酸，产生脂质过氧化，使器官组织损伤。MDA 是氧自由基引起的细胞膜脂质过氧化反应的终末产物，其含量反映脂质过氧化程度并可间接反映自由基的含量。SOD 的降低是由于缺血缺氧使SOD生成不足、清除过多氧自由基时的消耗及炎症反应时中性粒细胞携带血浆中的SOD 进入炎症部位等。本实验结果提示在脑缺血/ 再灌注过程中，大鼠肝组织反映自由基生成的脂质过氧化物MDA增加，而清除自由基的SOD 活性减弱，脂质过氧化引起的损伤不断积累，导致肝组织损伤。目前动物实验表明川芎嗪对肢体组织［10］、脑组织［11］、肾脏组织和心肌组织缺血性损害有保护作用。本实验结果提示川芎嗪可降低脑缺血/ 再灌注大鼠肝组织中MDA含量和提高SOD、GSH-PX、 Ca2 + -Mg2 +-ATP酶的活性，综合各项实验结果，表明川芎嗪对脑缺血/再 灌注致肝损伤过程中的肝组织细胞有保护作用，其作用机理可能与川芎嗪抗氧化和改善ATPase功能有关，但具体机制有待于进一步探讨。

【】
  　　1 岑得意，陈志武，宋必卫，等. 川芎嗪对大鼠脑梗塞的保护作用.药通报， 1999， 15 （5） : 464.

　　2 朱晓琴， 唐省三， 李萍，等.川芎嗪对大鼠脑缺血-再灌注脑内NOS 变化的作用. 江汉大学学报（版），2004，32（2）:9～11.

　　3 朱晓琴，张端莲，胡祁生，等. 川芎嗪对青霉素致痫大鼠神经元内c-fos表达的影响.武汉大学学报（医学版），2002，23（4）:322～325.

　　4 朱晓琴，张端莲，胡祁生，等. 川芎嗪对青霉素致痫大鼠神经细胞的影响. 数理医药学杂志，2002，15（6）:303～304.

　　5 邓碧玉，彭勤生，李文杰. 改良的连苯三酚自氧化测定超氧化物歧化酶活性的方法. 生物化学与物理进展， 1991， 18 （2） : 163.

　　6 向荣，王鼎年. 过氧化脂质硫代巴比妥酸分光光度法的改进.生物化学与生物物理进展， 1990， 17 （3） : 241.

　　7 夏奕明，朱连珍. 血和组织中谷胱甘肽过氧化酶活力测定. 卫生研究， 1987， 16 （4） : 29.

　　8 Bradford MM. A rapid and sensitivemethod for the quantiation ofmicro-gram quantities of protein utilizing the princile of protein-dye binding. Anal Biochem， 1976， 72: 248.

　　9 Granger D N ， Hollwarth M E ， Parks D A ， et al . Ischemi-areperfusion injury:role of oxygen-derived free radicals. Acta-Physiol Scand ， 1986 ， 548 : 47～63.

　　10 庄洪， 黄枫， 郑晓辉， 等. 川芎嗪对兔肢体缺血/ 再灌注损伤早期影响的实验研究 .中国骨科新技术. 北京: 中国科技出版社， 1996，25.

　　11 王鸿儒. 血液流变学 . 北京: 北京医科大学中国协和医科大学联合出版社， 1997，152.