丙肝患者IgM特异性激活补体类循环免疫合物的检测及意义

          作者：张文军 唐 晖 贾雪芳 李红枝

【关键词】  肝损伤

　　摘 要:  目的:探讨丙肝患者体内IgM特异性激活补体类循环免疫复合物（即IgM/C3-TCIC）的变化及其意义。方法:采用捕捉  法ILISA，对丙肝患者血清中的IgM/C3-TCIC进行检测，并将其与患者的性别、年龄、病程及谷丙转氨酶（ALT）进行统计学分析。结  果:80例丙肝患者血清中有52例检测呈阳性，IgM/C3-TCIC的阳性率为65.0%。IgM/C3-TCIC的阳性率与ALT相关，在ALT升高组  IgM/C3-TCIC的阳性率要显著高于ALT正常组（ P<0.05 ）;而与患者的病程、性别及年龄则均无明显相关（ P>0.05 ）。结论:丙肝患  者体内IgM/C3-TCIC可能直接参与了对肝组织损伤的过程，其病理意义值得重视。  

　　关键词:  丙肝病毒（HCV）; IgM/C3-TCIC; ELISA; 肝损伤

　　自双特异性循环免疫复合物（Two-component-determined   circulating immune complexes，TCIC）的概念提出以来，其病理  生理意义的研究受到广泛重视    ［1～3］    。本研究采用捕捉法  ELISA，对丙肝患者血清中的IgM特异性激活补体类免疫复合  物（即IgM/C3-TCIC）进行检测，旨在阐明这类双特异性循环  免疫复合物在丙肝患者体内的变化及其临床意义，现报告如  下。

　　1  材料和方法 

　　1.1  实验材料

　　羊抗人C3抗血清，羊抗人IgM抗血清均为上海生物制品  研究所产品，经硫铵-DEAE    32   层检提取IgG组分。酶 抗体为本  室自制，采用简易过碘酸钠法 ［4］ 将HRP（辣根过氧化物酶，  Sigma）标记到抗人IgM的羊IgG组分上。

　　1.2  实验对象

　　实验组包括80例丙型肝炎患者血清标本（其中男性37  例，女性43例），对照组包括115例健康人血清标本（其中男  性50例，女性65例）。

　　1.3  IgM/C3-TCIC的检测  捕捉法ELISA的操作步骤如下:用0.1M，pH9.6的碳酸  缓冲液将抗人C3的羊IgG稀释至7.5ug/ml，加入反应板，每  孔0.1ml，4℃ 18～24小时，用0.01M，pH7.4 PBS-T洗涤3次，  加入用生理盐水按1∶75稀释的血清标本，每孔0.1ml，4℃ 18  ～24小时，同上洗涤;用含2.5%兔血清的PBS-T将HRP-抗人  IgM的羊IgG作1∶1000稀释，每孔0.1ml，37℃ 1小时，同上  洗涤;加入TMB-H    2   O    2   底物溶液，每孔0.1ml，37℃避光反应  45min;2M的H    2   SO    4   终止反应，最后在BIO-RAD 680全自动酶  标仪（美国产品）上测OD值。每块反应板分别以混合人血清   和以羊血清的作阳阴性对照。以阳、阴对照血清OD值的20  次均值，按下面的公式对实验标本的OD值进行校正:  被检标本OD校正值=   阳、阴性对照血清20次OD均值之差   阳、阴性对照血清实测OD均值之差 ×被检标本复孔实测OD  均值。

　　2  结果

　　2.1  IgM/C3-TCIC的阳性界值  采用捕捉法ELISA检测115例健康人血清标本，由于CIC  与年龄有关    ［1］    ，故以不同年龄组 X和SD，以X±2SD为阳  性临界值，≥X±2SD者为升高的阳性标本，结果如表1。   

　　表1 正常人IgM/C3-TCIC的阳性界值（略）  

　　2.2  丙肝患者IgM/C3-TCIC的阳性率  采用捕捉法ELISA对80例丙肝患者的IgM/C3-TCIC进  行检测，结果有52例呈阳性，阳性率为65.0%。对不同年龄  组之间进行统计学分析，发现15～、30～、40～和50～年龄组  IgM/C3-TCIC的阳性率依次为66.7%、63.5%、64.5%和  66.7%，相互之间均无显著性差异 （P>0.05） ，如表2所示。  此外，不同性别之间IgM/C3-TCIC的阳性率亦无明显差异。  表2 丙肝患者IgM/C3-TCIC的阳性率

　　2.3  丙肝患者血清ALT与IgM/C3-TCIC阳性率的关系  比较ALT升高组与正常组中IgM/C3-TCIC的阳性率，结  果如表3。表3 丙肝患者ALT与IgM/C3-TCIC阳性率之间的关系

　　2.4  丙肝患者的病程IgM/C3-TCIC阳性率的关系  80例丙肝患者按病程又分为两组:病程不足20天的患者  归为一组，共有37例;病程超过20天的患者归为另一组，共  有43例。各组中IgM/C3-TCIC的阳性率见表4。可以看出，  IgM/C3-TCIC的阳性率在长病程组明显高于短病程组，两者之  间具有极显著性差异（ P<0.01） 。 表4 丙肝患者病程与IgM/C3-TCIC阳性率之间的关系

　　3  讨论

　　针对丙肝患者体内循环免疫复合物（CIC）的研究已有报  道    ［5～7］  ，然而这些报道大都只从非特异性CIC的角度进行研  究，并未对复合物中的不同组分及其意义进行深入探讨。本  研究采用捕捉法ELISA，以羊抗人C3的IgG为捕捉抗体，然后  分别以HRP标记的抗人IgM的IgG为指标抗体，检测丙肝患  者血清中IgM特异性激活补体类CIC，即IgM/C3-TCIC，旨在  探讨该类双特异性CIC在丙型肝炎患者体内的变化及其临床   意义。  通过对115例健康人血清的IgM/C3-TCIC进行检测，发  现健康人血清中该类双特异性循环免疫复合物的水平可达0.  77±0.14，且在不同年龄组之间存在一定差异。因此，我们以  不同年龄组IgM/C3-TCIC的 X±2SD为阳性临界值，≥X±  2SD 者确定为升高的阳性标本。据此对80例丙肝患者IgM/  C3-TCIC的阳性率进行研究，结果发现共有52例呈阳性，阳性  率为65.0%。15～、30～、40～和50～年龄组IgM/C3-TCIC的  阳性率依次为66.7%、63.5%、64.5%和66.7%，相互之间均  无显著性差异（ P>0.05 ）。此外，不同性别之间IgM/C3-TCIC  的阳性率亦无明显差异。  此外，通过比较IgM/C3-TCIC与患者病程的关系，结果表  明IgM/C3-TCIC的阳性率与患者的病程并无明显关系。  进一步将IgM/C3-TCIC的检测结果与患者的ALT水平进  行相关性分析，发现IgM/C3-TCIC的阳性率与ALT明显相关，  在ALT异常组IgM/C3-TCIC的阳性率显著高于ALT正常组  （ P<0.05） 。由于ALT为肝脏损伤的敏感指标，因此推测  IgM/C3-TCIC可能直接参与了导致肝组织损伤的过程，其病理  意义值得重视。  

　　参 考 文 献

　　1 彭宣宪.双特异性免疫复合物的研究进展.上海免疫学杂志，  1996，16（5）:315～317.

　　2 彭宣宪，万雅各，张文军，等.甲型肝炎的免疫球蛋白-补体循环免  疫复合物.病毒学报，1995，11（3）:203～207.

　　3 王三英，杨天赐，彭宣宪.Ig/Ig双特异性免疫复合物定量及免疫调  节作用.公共卫生，2002，18（6）:712～714. 

　　4 李思光，彭宣宪，张文军，等.IgM类HBsAg免疫复合物与乙肝肝损  害关系初探.江西，1997，15（3）:154～157. 

　　5 Tsai JF， Jeng JE， Chang WY， et al. Circulating immune complexes in   chronic hepatitis C. J Med Virol， 1995，46（1）:12～17. 

　　6 Tsai JF， Margolis HS， Jeng JE， et al. Circulating immune complexes in   chronic hepatitis related to hepatitis C and B viruses infection. Clin Im-  munol Immunopathol， 1995，75（1）:39～44.

　　7 Sansonno D， Dammacco F. Hepatitis C virus， cryoglobulinaemia， and   vasculitis: immune complex relations. Lancet Infect Dis， 2005，5（4）:  227～236.