白芍总苷对大鼠主动型Heymann肾炎的作用

【关键词】  Heymann肾炎

    Effects of total glucosides of paeony on active Heymann nephritis in rats

　　【Abstract】  AIM:   To study the effects of total glucosides of paeony (TGP) on active Heymann nephritis (AHN) in rats. METHODS:  The rat models of AHN were induced by intraperitoneal administration of kidney homogenate and Freunds adjuvant. AHN rats were divided into 3 groups: AHN model group, TGP group and dexamethasone group. The control group was only given normal saline solution. Serum urea nitrogen, creatinine, total protein and 24hour urinary protein were observed. RESULTS:  In TGP group, the serum urea nitrogen, creatinine and 24hour urinary protein significantly decreased (P＜0.01 or P＜0.05) while the serum total protein significantly increased, compared with those in model group. But no significant difference in renal cell histological pathology was observed between TGP or dexamethasonetreatment group and model group. CONCLUSION:  TGP is effective in the treatment of hypernitrogenemia, proteinuria and hypoproteinemia in AHN rats.

　　【Keywords】 total glucosides of paeony;  Heymann nephritis; rats

　　【摘要】  目的： 观察白芍总苷对Heymann肾炎大鼠肾功能的影响. 方法： 给大鼠腹腔注射同种肾脏免疫复合物，复制大鼠主动型Heymann肾炎模型,分为Heymann肾炎模型组、白芍总苷组和地塞米松组，造模同时分别给予相应的药物，观察灌胃给予白芍总苷0.3 g/kg对Heymann肾炎大鼠肾功能的作用.另设正常对照组. 结果： 白芍总苷(0.3 g/kg)可以降低肾炎大鼠血清肌酐、尿素氮和尿蛋白，提高血清总蛋白含量. 结论： 白芍总苷有对抗Heymann肾炎大鼠的高氮质血症、蛋白尿、低蛋白血症作用.

　　【关键词】 白芍总苷；Heymann肾炎；大鼠

　　0引言

　　白芍总苷（total glucosides of paeony, TGP）具有抑制自身免疫反应、抗炎、镇痛、保肝等作用［1］. 用TGP与激素联合肾病综合征临床上已有报道［2］，表明TGP对机体肾脏有作用的靶点. 我们的研究已证明白芍水煎液能改善Heymann肾炎大鼠的肾功能［3］. 本研究以TGP灌胃给予Heymann肾炎模型大鼠，观察模型动物肾功能的改变，探讨TGP对免疫功能异常引起的肾炎是否有恢复作用，并讨论其意义.

　　1材料和方法

　　1.1材料

　　SD大鼠40只，购于西安大学实验动物中心，雌雄兼用，体质量180～220 g，尿蛋白测试2次全部为阴性. 大鼠分为4组：Heymann肾炎模型组、白芍总苷组、地塞米松组和正常对照组，每组10只. 白芍总苷胶囊（帕夫林），三九医药股份有限公司生产，批号0411032，0.3 g/粒（以白芍总苷计）. 地塞米松片(DEX)，四川临江生物化学制药厂生产，批号97719, 0.75 mg/片.

　　1.2方法

　　1.2.1Heymann肾炎模型复制［4］及给药方案取180～220 g SD大鼠，处死后取出肾脏，用生理盐水反复冲洗至发白，取肾皮质(约35 g)，制成匀浆，加入完全佛氏佐剂及适量生理盐水至70 mL混合均匀后，制成免疫复合物（20 g/L），分别给模型组、白芍总苷组、地塞米松组每只大鼠腹腔注射，每次2 mL/只， 1次/2 wk，共注射6次. 大鼠在注射免疫复合物后4 wk测定尿蛋白，观察Heymann肾炎是否形成. 从第1次注射开始，各组每日灌胃给予同容积(10 mL/kg)相应的药物或生理盐水：白芍总苷组0.3 g/kg，地塞米松组5 mg/kg，正常对照组和模型组给予生理盐水， 1次/d，连续12 wk.
 
　　1.2.2观察指标24 h尿蛋白定量：  4 wk测定1次；血清肌酐、血清尿素氮和总蛋白：实验结束时测定1次；病检查：光镜观察肾小球增殖变化，淋巴细胞、浆细胞浸润情况，变性情况，小管上皮变化.
     
　　统计学处理： 先采用方差分析，之后用样本均数的两两比较方法（LSD）进行分析.

　　2结果

　　2.1一般状况实验过程中部分造模动物出现腹泻、腹水和慢性衰竭，分析为复制模型所致. 造模的三组动物饮食减少，毛色灰暗，正常组动物无变化.

　　2.2白芍总苷对Heymann肾炎大鼠肾功能的影响分别于造模前及造模期间4， 8， 12 wk收集各组动物24 h尿液，测定尿量及尿蛋白浓度，24 h尿蛋白. 结果发现，模型组动物尿蛋白含量最高，白芍总苷组在给予4 wk后，24 h尿蛋白较模型组显著降低（P＜0.05），治疗8 wk时尿蛋白降低更为显著（P＜0.01），地塞米松组在各时间点与模型组比较也有显著性差异（Tab 1）. 表1白芍总苷对Heymann肾炎大鼠尿蛋白、血清尿素氮、肌酐和总蛋白的影响（略）

　　注射免疫复合物后，各组动物血清尿素氮和肌酐在4 wk后普遍升高，在给药12 wk后，白芍总苷治疗组的血清尿素氮和肌酐含量与模型组比较显著降低（P＜0.01, P＜0.05），血清总蛋白值趋近正常对照组，而模型组动物的指标仍未恢复到正常水平（Tab 1）.
 
　　2.3病变化除正常组外，光镜下可见，注射免疫复合物的各组动物肾小球基底膜呈中毒或重度增厚，内皮细胞胞质肿胀；肾小管轻度扩张，间质内有局灶性淋巴细胞及浆细胞浸润，模型组、白芍总苷组和地塞米松组之间无显著性差异.

　　3讨论

　　Heymann肾炎的临床过程和病理类型与人类膜性肾病十分接近，作为人类膜性肾病的动物模型得到广泛公认. 制备该动物模型方法有主动型Heymann肾炎和被动型Heymann肾炎两种，前者是用肾皮质匀浆及Freund佐剂免疫大鼠，动物于6～8 wk左右出现大量蛋白尿. 已经证明，Heymann肾炎发病机制包括补体激活、膜攻击复合物形成、炎症细胞以及炎性介质合成增加，引发一系列炎症反应，最终导致肾小球基底膜损伤. 本研究采用了主动型Heymann肾炎模型，观察给予白芍总苷对模型动物的影响，结果显示，白芍总苷可以降低Heymann肾炎大鼠血清尿素氮、肌酐和24 h尿蛋白，能够改善肾脏功能. 分析原因可能与白芍总苷具有调节自身免疫功能［5］、影响炎症细胞因子合成、释放［6］等作用有关. 但是本实验结果显示白芍总苷在改善病鼠生化指标的同时，未见明显改善肾组织病理学改变.
　　
　　本实验预试中发现动物在注射免疫复合物后第4周尿蛋白大量增加，以后出现逐渐递减趋势，与报道的峰期略有不同，故实验时即在给予免疫复合物复制Heymann肾炎第4周时开始测定尿蛋白含量. 另实验中采用地塞米松作为阳性对照药，是由于该药在临床仍是消除蛋白尿的主要治疗手段之一. 白芍总苷治疗Heymann肾炎的深入研究工作正在进行中.

　　【文献】

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　　Zhou Q, Li ZG. Pharmaceutical effects of total glucosides of paeony and its application in autoimmune disease ［J］. Chin J Drugs Clin Rem, 2003；22(11): 687-691.

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　　［3］ 黄黎明,石鹏,庞来祥,等. 白芍提取物对大鼠Heymann肾炎的作用［J］.中国药科大学学报,2000;31（Suppl）:74-75.

　Huang LM,Shi P, Pang LX, et al. Effect of extraction of paeony on Heymann nephritis rats［J］. J Chin  Pharma Univ, 2000;31（Suppl）:74-75.

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　　Wang XW, Chen MZ, Xu SY. The effects of total glucosides of paeony (TGP)on T lymphocyte subsets［J］. Chin Pharmacol Bull,1992;8(5):340-342.

　　［6］ 王斌,陈敏珠,徐叔云. 白芍总甙对大鼠腹腔巨噬细胞产生肿瘤坏死因子的调节机制［J］. 中国药理学通报,1997;13（3）:255-257.