芪丹通脉片对急性心肌缺血大鼠降钙素基因相关肽和内皮素的影响

【关键词】  芪丹通脉片

    Effect of Qidantongmai Tablets  on calcitonin generelated peptide and endothelin in rats with acute myocardial ischemia

　　【Abstract】 AIM:  To probe whether the protection of Qidantongmai Tablets (QDTMT) against myocardial ischemia in rats is related to the increasing content of plasma calcitonin generelated peptide (CGRP) and decreasing content of plasma endothelin (ET). METHODS:  Sixty SD rats were averagely divided into 6 groups randomly: control group, model group, isosorbide mononitrate treated group, QDTMT low dosage group(QDTMTL), QDTMT medium dosage group (QDTMTM), and QDTMT high dosage group (QDTMTH). The experimental acute myocardial ischemia model was established by intraperitoneal injection of pituitrin to rats and the electrocardiogram was recorded. By means of radioimmunoassay, the contents of plasma CGRP and ET were detected. RESULTS:  The contents of plasma CGRP and ET between groups had significant differences. The contents of plasma CGRP and ET in model group（58.48±5.00 and 120.08±5.72） were higher than those in the control group（50.60±6.53 and 51.49±5.47）(P<0.05). The content of plasma CGRP in each QDTMT group（63.30±4.10, 70.27±5.39, 75.86±4.01, from low to high dosage of QDTMT） was   higher than that  in the model  group (P<0.05), while the content of plasma ET in each QDTMT group（101.40±6.10, 81.50±5.15, 64.14±4.82, from low to high dosage of QDTMT）was lower than that in the model group (P<0.05). CONCLUSION:  The protection of QDTMT against myocardial ischemia may be achieved by increasing the releases of calcitonin generelated peptide and decreasing the content of endothelin.

　　【Keywords】 Qidantongmai tablets; myocardial ischemia; calcitonin generelated peptide; endothelins;  rats

　　【摘要】 目的： 研究芪丹通脉片(QDTMT)对急性心肌缺血大鼠的防治作用是否与增加血浆降钙素基因相关肽（CGRP）和减少内皮素(ET)有关. 方法： 将60只SD雄性大鼠随机等分为6组： 空白组，模型组，单硝酸异山梨酯片组，QDTMT低、中、高剂量组. 大鼠腹腔注射垂体后叶素致急性心肌缺血作为动物实验模型，观察心电图变化. 用放射免疫法测定大鼠血浆CGRP, ET含量. 结果： CGRP, ET血浆含量在各组间有显著差异，其中模型组血浆CGRP，ET含量 (分别为58.48±5.00和120.08±5.72) 均高于空白组（分别为50.60±6.53和51.49±5.47）  (P<0.05)，QDTMT低、中、高剂量组CGRP血浆含量（分别为63.30±4.10, 70.27±5.39, 75.86±4.01）均高与模型组（P<0.05）. QDTMT低、中、高剂量组ET血浆含量（分别为101.40±6.10, 81.50±5.15, 64.14±4.82）均低于模型组（P<0.05）. 结论： QDTMT对缺血心肌的保护作用可能是通过促进CGRP的释放，减少ET的含量而实现的.

　　【关键词】 芪丹通脉片；心肌缺血；降钙素基因相关肽；内皮缩血管肽类；大鼠
　
　　0引言

　　芪丹通脉片(Qidantongmai tablets, QDTMT)是由黄芪、丹参、当归、红花、桂枝等益气、活血、通阳中药组成的复方制剂，临证治疗气虚血瘀型胸痹心痛. 降钙素基因相关肽（calcitonin generelated peptide, CGRP）是迄今发现最具有扩张血管作用的生物活性多肽［1］，内皮素（endothelin, ET）与其相反，有很强的收缩血管的作用.  本实验旨在研究QDTMT对心肌缺血大鼠血浆CGRP与ET含量的影响，进一步从微观上探讨QDTMT对心肌缺血的防治机制.

　　1材料和方法

　　1.1材料

　　QDTMT干粉（第四军医大药物研究所提供）， SD雄性大鼠60只（第四军医大实验动物中心提供），体质量(150±10) g, CGRP, ET放免药盒（解放军总科技开发中心放免所），垂体后叶素注射液（上海禾丰制药有限公司，批号： 4A01001，规格： 6 u/mL），单硝酸异山梨酯片（山东鲁南贝特制药有限公司,批号： 040925，规格： 20 mg/片），RM6280多道生理记录仪（第四军医大学病生教研室提供）.

　　1.2方法
 
　　1.2.1实验分组与造模60只SD雄性大鼠随机分为6组(n=10)：空白对照组，模型组，单硝酸异山梨酯片组［15 mg/（kg・d）］，QDTMT低剂量组(QDTMTL)［0.36 g/（kg・d）］,中剂量组(QDTMTM)［1.08 g/（kg・d）］,高剂量组(QDTMTH)［3.24 g/（kg・d）］. 将药物用蒸馏水配制成等体积不同浓度的混悬液，灌胃前依据体质量按10 mL/kg给药量，每日灌胃1次，连续14 d，空白对照组与模型组灌胃生理盐水. 第15日各组最后一次灌胃30 min后,先将大鼠用10 g/L戊巴比妥钠(5 mL/, ip)麻醉,仰卧固定在鼠板上，将RM6280多导生理记录仪的针状电极分别插入皮下，先连续观察并记录一段Ⅱ导的正常心电图，然后模型组及给药组分别腹腔注射垂体后叶素 (pituitrin, Pit) 20 U/kg,对照组腹腔注射等剂量生理盐水, 造模后继续监测心电图变化，20 min后，打开腹腔，腹主动脉取血4 mL,注入事先加好100 g/L EDTA二钠30 μL和抑肽酶40 μL的2个离心管中，混匀，3000  r/min离心10 min,分离血浆. -20℃保存待测.
1.2.2观察指标心电图指标： 本实验对心肌缺血的观察指标主要为ST段的偏移程度，以J点(指QRS终点和ST段开始交接之点)为测定点, 取2, 5, 7, 10, 15 min 5个时点，每时点测5个波型，取其平均值,记录并计算Ｊ点的变化值(无论升高或降低,取其变化的绝对值). 放免指标： 根据放免试剂盒，依步骤用放射免疫法测定血浆中CGRP,ET 的含量.
  
　　统计学处理： 所有数据用x±s表示,采用SPSS统计分析软件进行方差分析和组间 LSDt检验，P<0.05认为差异有统计学意义.

　　2结果

　　2.1Pit所致心电图的变化大鼠腹腔注射pit前，各组心电图J点的变化均趋于0,空白组在腹腔注射生理盐水前后J点的变化趋于0. 各药物组与模型组比较，在5个时段差异均有显著意义（P<0.05）, QDTMTH组与单硝酸异山梨酯组比较，差异不显著（P>0.05）,其他各药物组组间比较各个时段差异显著（P<0.05, 表1）.表1在不同时段QDTMT对Pit所致急性心肌缺血心电图J点变化(略)

　　2.2各组大鼠血浆中CGRP, ET含量变化模型组与空白组比较，血浆CGRP, ET含量均升高(P<0.05)；QDTMT 各剂量组较模型组血浆CGRP含量均升高（P<0.05）,血浆ET含量均降低；单硝酸异山梨酯组与QDTMTL组, QDTMTM组比较两项指标都有显著差异，与QDTMTH组比较差别不显著(表2).表2各组大鼠血浆中CGRP, ET含量变化（略）

　　3讨论

　　Pit是从动物脑垂体中提取的物质，内含有加压素(抗利尿素)和催产素，加压素能直接使血管，特别是毛细血管和小动脉收缩，可使冠状动脉痉挛、收缩从而使心肌缺血缺氧. 我们应用pit腹腔注射引起冠状动脉痉挛，复制大鼠急性心肌缺血模型［2-3］. 心电图表现为J点上抬，同时窦房结缺血，从而使心律减慢.
 
　　CGRP是内源性强大的扩血管物质，其扩血管作用对冠状动脉亦有效，尤其可以扩张有病变的冠状动脉. 报道［1，4］，它可使冠脉灌流压降低，其作用较硝普纳强50~240倍，给冠状动脉粥样硬化患者静注 CGRP 50 pmol/min,可使冠状动脉狭窄段明显扩张. 人和动物体内存在4种内皮素（ET），在心血管系统主要是 ET1, ET 是迄今所知最强的缩血管物质，它收缩血管，刺激血管平滑肌细胞增生. 研究发现，心肌缺血再灌动物和急性心梗及不稳定心绞痛患者血浆 ET 水平明显升高［5］. CGRP 可拮抗内皮素引起的细胞损伤［6］. 目前已进行外源性CGRP临床应用研究，为心血管疾病的防治研究提供了新的思路和手段，但仍面临很大的困难.
 QDTMT是经多年临床实践的经验方，对心血管系统有较强的调节作用，有增强心肌收缩力，扩张血管，增加冠脉流量，降低红细胞聚集，增强红细胞变形能力作用［7］.
  
　　本实验结果显示，QDTMT各剂量组明显改善pit所致心电图J点抬高(P<0.05)，表明QDTMT有良好的抗心肌缺血作用. 模型组血浆CGRP含量较空白组升高，表明急性心肌缺血可引起内源性CGRP释放，可能是机体的一种自身保护机制. QDTMT各剂量组血浆CGRP均较模型组升高，且随剂量的增加CGRP含量增多，表明QDTMT进一步促进了CGRP的释放，“放大”了这种保护机制. 另一方面QDTMT各剂量组能抑制ET的释放，使其趋于正常，从而使CGRP/ET升高，即保护因子比重增加，损伤因子比重降低，可能正是QDTMT保护心肌的作用机制，既可扶正―益气（促进CGRP的释放），亦可驱邪―化瘀（抑制ET的释放）. 但在应用CGRP拮抗剂后，QDTMT的心肌保护作用是否消失或减弱，尚需进一步研究与证实.

　　【文献】

　　［1］ FrancoCereceda A, Liska J. Potential of calcitonin generelated peptide in coronary heart disease ［J］. Pharmacology, 2000,60(1):1-8.
 
　　［2］ 王振宇,钱瑞琴,关树宏，等. 冠心Ⅱ号抗缺血性心肌损伤的自由基机理实验研究［J］. 中西医结合杂志,2003,23（5）:363-366.

　　［3］ 尚正录，尚云，卫洪昌. 黄芪保心汤预防实验性大鼠急性心肌缺血的研究［J］. 上海中医药杂志,2004，38（11）：47-50.

　　［4］ 张继东，甘立军，张春卉. 降钙素基因相关肽与冠心病［J］. 山东医药，2001，41（7）：59-60.

　　［5］ 刘小岩，王银叶，李长龄，等. 实验性心肌缺血时内源性ET,CGRP和NO水平的变化及心舒平的调节作用［J］. 中国中药杂志，2002，27（7）：534-537.

　　［6］ 王建安，傅雷，杜同信，等. 降钙素基因相关肽及内皮素水平与冠心病关系的研究［J］. 江苏医药杂志，2001,27(10):789-790.

　　［7］ 马世平，王宗仁，唐荔，等. 芪丹通脉片对人犬心肌缺血血液流变学的影响［J］. 第四军医大学学报，2003，24（5）：394-396.