补肾法对大鼠绝经后骨质疏松模型的影响

                           作者：魏玉芳，王长海，刘钰林，张姗红，刘雅，李锋

【关键词】  补肾；骨质疏松,绝经后；骨密度；雌二醇

　　Therapeutic effect of invigorating kidney on postmenopausal osteoporosis in rats
 
　　【Abstract】  AIM:  To study the therapeutic effect of invigorating the kidney on postmenopausal osteoporosis in rats.  METHODS:  Thirtytwo healthy female SD rats were  randomly separated into 4 groups:  normal group, model group, western medicine group, kidneyinvigorating group, 8  rats in each group. The postmenopausal osteoporosis model was established in the latter 3 groups by ovariectomy. One week later, rats in western medicine group were drenched with 50 mg/L nilestriol, 5 mL/week, and with 5 mL isotonic sodium chloride in other time; ones in kidneyinvigorating group were drenched with traditional Chinese medicine 200 g/L  for tonifying the kidney, 5 mL/d, equivalent volume and concentration of sodium chloride was drenched every day in the same time to normal group and model group. Eight weeks later, blood from all the rats was harvested by removing  eyeball, and left femoral bone was also taken. Bone mineral density (BMD) in femoral bone was measured by DPXPlus, and serum levels of E2 was detected by ELISA.  RESULTS: In model group compared with other groups, BMD:  normal vs model  (P＜0.01);  western medicine vs model (P＜0.01);  kidney invigorating vs model  (P＜0.01); E2:  normal vs model (P＜0.01)； western medicine vs model (P＜0.01)； kidneyinvigorating vs model (P＜0.01); normal vs western medicine (P<0.01); normal vs kidneyinvigorating (P<0.01).  CONCLUSION:  Invigorating the kidney with traditional Chinese medicine can increase  BMD, serum E2 in ovariectomized  rat models, thus exerting the therapeutic effect on postmenopausal osteoporosis.

　　【Keywords】reinforcing  kidney;  osteoporosis, postmenopausal; bone density; estradiol

　　【摘要】 目的： 研究补肾法对大鼠绝经后骨质疏松模型激素含量及骨密度等作用，揭示补肾法骨质疏松的机制. 方法： 将健康雌性SD大鼠32只，随机分成4组：正常组、模型组、西药组、补肾组，各8只. 除正常组外对其他组大鼠进行摘卵巢手术制造绝经后大鼠模型（去势后大鼠）. 术后1 wk，西药组灌服浓度为50 mg/L的尼尔雌醇，每只灌服5 mL/wk，其他时间灌服等量生理盐水；补肾组灌服浓度为200 g/L的补肾中药，每只灌服5 mL/d ;正常组和模型组每日同时灌服等量生理盐水. 投药8 wk 后进行摘眼球取血，取左侧股骨. 采用双能X线骨密度仪测量大鼠股骨骨密度（BMD）,采用ELISA法测定血清雌二醇(E2)含量. 结果：  正常组、西药组、补肾组与模型组相比，BMD和E2： P值均＜0.01. E2： 正常vs西药(P＜0.01)；正常vs中药(P＜0.01). 结论： 补肾法能够增加去势大鼠BMD、血清E2，从而对绝经后骨质疏松有治疗作用.

　　【关键词】 补肾；骨质疏松，绝经后；骨密度；雌二醇

　　0引言

　　骨质疏松症（osteoporosis, OP）是老年人多发病之一，其中，绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis， PM0)是原发性骨质疏松症中最常见的一种，患病率为30%～50% . 其发病缓慢，常被人们忽视，有人称之为无声无息的流行病［1］. 近年来我们通过大量临床实验观察，发现采用以肾为本的理论辨证论治收效甚好. 本实验我们采用中医补肾药物，治疗PMO大鼠模型，观察其对大鼠骨密度（bone mineral density, BMD）、血清雌二醇(estradiol,E2)水平的影响. 

　　1材料和方法

　　1.1材料清洁级健康雌性SD大鼠32只，8月龄，体质量（180～270）g，（由第四军医大学动物实验中心提供）.  骨松康胶囊由仙灵脾、仙茅、制川乌、 制草乌、 当归、川芎、巴戟天等药味组成，每袋9 g（第四军医大学西京药剂科生产）； 尼尔雌醇片，0.1 mg/片,（批号：国药淮字H31021648，上海华联制药有限公司生产）；大鼠血清E2的ELISA试剂盒（陕西宝航微生物工程有限责任公司提供）.  G680511 治疗仪，(青岛鑫升实业有限公司生产)； 双能X线骨密度仪DPXPlus ( Luna Corp . USA.).

　　1．2方法健康雌性SD大鼠32只随机分4组：正常组、模型组、西药组、中药组，各8只，各组大鼠分别编号，除正常组外对其他组大鼠进行摘卵巢手术制造去势大鼠模型(Ovariectomized, OVX)，用20 g/L的戊巴比妥钠按40 mg/kg作腹腔内注射麻醉,俯卧位固定于大鼠夹板上,常规消毒, 于背部一侧腰椎旁约1 cm 处,逐层切开皮肤、肌层,进入腹腔,切除卵巢,逐层缝合切口,同法处理对侧. 伤口用青霉素粉外擦,以预防感染. 术后1 wk，西药组灌服浓度为50 mg/L的尼尔雌醇(5 mg溶于100 mL蒸馏水中)，每只灌服5 mL/wk，其他时间灌服等量生理盐水；中药组灌服浓度为200 g/L的骨松康胶囊（18 g骨松康胶囊溶于90 mL蒸馏水中），每只灌服5 mL/d；正常组和模型组每日同时灌服等量生理盐水，每只灌服5 mL/d. 其间,各组动物均正常饮食,自由饮水. 投药8 wk后进行摘眼球取血，取左侧股骨.
统计学处理： 组间比较采用SPSS 10.0 软件进行方差分析以及LSDt检验.

　　2结果

　　模型组与正常组、西药组、中药组相比BMD降低（P<0.01），正常组、西药组、中药组之间进行比较无统计学差异（P>0.05）. 模型组与正常组、西药组、中药组相比血清E2水平降低(P<0.01)，西药组、中药组与正常组相比血清E2水平降低(P<0.01)，西药组与中药组则无统计学差异(P>0.05，表1).

　　3讨论
　　
　　传统医学没有OP的病名，但根据其所述临床症状及发病机制，可将其纳入“骨痿”“骨痹”“骨枯”等范畴. 关于肾与骨的关系，中医古论述颇丰，骨的强弱与肾中精气盛衰关系密切，肾中精气充盛则骨髓生化有源，骨才能得到骨髓的滋养，骨髓含量正常骨骼强健. 本实验中补肾组所用补肾复方为骨松康胶囊, 方中以淫羊藿、黄柏双补肾阴肾阳，相辅相成，共为君药；仙茅、巴戟天补肾壮阳，知母苦寒坚阴，三药共助君药之力为臣药；川乌、草乌通络止痛、温经散寒，当归、川芎养血活血、化瘀止痛，四药合用，止痛以治其标，共为佐药；炙甘草既可健脾补肾，又可缓解二乌之毒性，为使药. 纵观全方，诸药和用，阴阳双补，标本同治，温而不燥. 使用后不仅可较快地缓解疼痛，而且能逐渐改善OP的其他症状. 骨松康胶囊已应用于临床多年并取得显著疗效［2］.

　　表1骨松康胶囊对去势大鼠股骨骨密度（BMD）、血清雌二醇（E2）的影响(略)

　　有研究表明股骨颈BMD每减少一个标准差，其骨折危险性就增加2.6倍［3］. 本实验结果表明：模型组股骨BMD低于正常组(P＜0.01)，说明摘除卵巢后BMD降低，明显增加了骨折的危险性；经补肾后，BMD明显高于模型组(P＜0.01)，降低了骨折的危险性. 本实验同时也证实了补肾法提高BMD的治疗作用和西药组相近，但确切的结论尚需对更广泛部位的BMD进行测定. 发生PMO的一个重要原因就是由于雌激素的缺乏［4］，妇女一般在30～35 岁时BMD达高峰, 40 岁以后骨质开始以平均每年5% 的速度发生溶解. 皮质骨每年净脱矿物质0.13%～0.15%. 绝经后每年丢失2%～3% 的皮质骨以及5%～8% 的髓质骨(小梁骨). 绝经后3～6  a骨丢失加快, 65 岁以后丢失减慢. 目前，对于外源性雌激素抑制骨吸收，降低骨的重建率，可阻止绝经后妇女骨量丢失已得到证实. 雌激素补充疗法还可以保持腰椎、髋部、前臂等的骨量，可减少全身各部位骨折发生危险约50％［5］. 本实验结果表明：模型组血清E2低于正常组(P＜0.01)，经补肾法治疗后，血清E2明显高于模型组（P＜0.01），说明中医补肾法有类雌激素的作用.

　　【文献】

　　［1］ 章薇，金华，袁静.  养血调肝方防治绝经后骨质疏松症的研究思路［J］. 中国中医骨伤科杂志，2005，13（3）：52-53.

　　［2］ 王长海，田立民，蒋永培，等. 中药骨松康治疗老年性骨质疏松症的临床对照研究［J］. 第四军医大学学报,2003,24(11):1029-1031.

　　［3］ 姚新，苗杨林，王靖，等.  益骨汤对去势大鼠血清激素水平、骨密度和骨生物力学影响的实验研究［J］. 中医正骨，2006，18（1）：3-4.

　　［4］ 任娟，李小权，任效娥，等. 绝经后骨质疏松的预防和治疗［J］. 国外医学. 妇幼保健分册，1999，10（3）：99-102.

　　［5］ 迟晓星,崔洪斌.  大豆异黄酮对妇女更年期综合征及骨密度的作用研究［J］. 中国骨质疏松杂志，2005，11（3）：311-314.