丹芩颗粒提取工艺研究

                      作者：田成旺 张铁军 王文燕

【关键词】  丹芩颗粒 正交优化 提取工艺

　　Abstract:ObjectiveＴｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ Ｄａｎｑｉｎ ｇｒａｎｕｌｅ ．MethodsＴｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ．Results Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ， ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ａｓ ｆｏｌｌｏｗs： ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｗｏ ｔｉｍｅｓ，９０ ｍｉｎｕｔｅｓ ｅａｃｈ ｔｉｍｅ ｆｏｒ Ｒａｄｉｘ Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａｅ, Ｈｅｒｂａ Ａｇｒｉｍｏｎｉａｅ ｅcｔ．； １０ ｔｉｍｅｓ ｏｆ ｗａｔｅｒ， ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｔｈｒｅｅ ｔｉｍｅｓ，９０ ｍｉｎｕｔｅｓ ｅａｃｈ ｔｉｍｅ ｆｏｒ Ｓａｌｖｉａ ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ Ｂｇｅ．ｅcｔ．； ａｔ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ １．１８ ～１．２２ ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ，ａｄｄｉｎｇ ９５％ ａｌｃｏｈｔｏ ｒｅａｃｈ ａｌｃｏｈｏｌ ｄｅｇｒｅｅ ６０％， ａｎｄ １２ ｈｏｕｒｓ ｏｆ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ．ConclusionＴｈｅ ｅｘｔｒａｃｔiｏｎ condition is stable and reasonable．

　　Key words:Ｄａｎｑｉｎ Ｇｒａｎｕｌｅ；  Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ；  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
    　
　　丹芩颗粒是天津药物研究院根据多年临床经验方研制而成的中药复方制剂，由仙鹤草、黄芩、丹参、柘树根、绞股蓝等药组成，具有益气养血、散淤止痛、解毒消肿、健脾化痰、软坚散结的功效，用于消化道肿瘤。本实验通过对处方中各味药材的化学成分进行分析，确定对仙鹤草、黄芩等药材采用乙醇提取，对丹参、柘木等药材采用水提醇沉提取法，同时采用正交实验对每个工艺过程进行了优化，确定了最佳工艺参数。

　　1  材料
   
　　高效液相色谱仪：ＬＣ －６Ａ ＨＰＬＣ （ＳＣＬ －６Ａ 系统控制器，ＬＣ－６Ａ 恒流泵，ＳＰＤ －６ＡＣ 紫外检测器，威玛龙色谱工作站）；ＫＱ２１８ 型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；ＡＲ２１４０ 型分析天平（上海奥豪斯公司）。
   
　　所有中药材由安徽省亳州市药材总公司提供，均符合《药典》２００５ 版及相关地方标准；黄芩苷和丹酚酸Ｂ 对照品由中国生物制品检定所提供，批号分别为１１０７１５ －２００２１２ 和１１１５６２ －２００３０２，供含量测定用。
   
　　甲醇、乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　２．１  醇提工艺条件的优化以药材黄芩中有效成分黄芩苷的提取转移率和提取液的出膏率作为测定指标，采用正交实验的方法对乙醇提取工艺进行了优选。

　　２．１．１  醇提液中黄芩苷的测定方法色谱条件：色谱柱为Ｄｉｏｍａｎｄ ＴＭ（２００ ｍｍ ×４．６ ｍｍ，５ μｍ）；流动相为甲醇－水－磷酸（４７∶５３∶０．１）；紫外检测波长２８０ ｎｍ；柱温为室温；流速１ ｍｌ／ｍｉｎ；进样量：１０ ｍｌ［１］。在上述色谱条件下供试品溶液中黄芩苷能与其它组分达到基线分离。

　　２．１．２   因素水平表的设计与正交实验取影响该提取过程的４ 个主要因素：乙醇浓度、溶媒量（加水倍量）、提取次数、提取时间，按Ｌ９ （３４ ）正交实验表进行实验，每个因素设计３ 个水平。因素水平表见表１。结果见表２。

　　表１  醇提工艺的因素水平（略）

　　表2  黄芩等醇提工艺正交实验及结果（略）

　　*综合评分为出膏率＋提取率
   
　　结果分析：各因素水平之间的极差大小依次为Ａ ＞Ｄ ＞Ｂ＞Ｃ，表明乙醇浓度对实验结果影响最大，其次是煎煮次数、溶剂用量，提取时间对实验结果的影响最小，最佳条件为Ａ１ Ｂ３ Ｃ２ Ｄ３ 。但Ｂ３ 与Ｂ２ 相差极小，而若选择Ｂ２ 可较Ｂ３ 节约资源，并减小需浓缩的药液体积，大大节约能源，降低成本，故选择Ａ１ Ｂ２ Ｃ２ Ｄ３作为提取过程的工艺参数。经３ 批验证实验，黄芩苷的提取率平均为９５．５１％，出膏率的平均为１７．０１％，表明该工艺基本合理可行。

　　２．２  水提醇沉工艺的优化以药材丹参中有效成分丹酚酸Ｂ 的提取转移率和提取液的出膏率作为评价指标，采用正交实验的方法对水煎煮的提取工艺进行优化。

　　２．２．１  水提液中丹酚酸Ｂ 的测定方法色谱条件：色谱柱为Ｄｉｏ?ｍａｎｄ ＴＭ （２００ ｍｍ ×４．６ ｍｍ，５μｍ）；流动相为甲醇－乙腈－水－甲酸（３０：１０∶５８∶２）；紫外检测波长２８６ ｎｍ；柱温为室温；流速１ｍｌ／ｍｉｎ；进样量１０    μｌ。在上述色谱条件下供试品溶液中丹酚酸Ｂ 能与其它组分达到基线分离。
　　
　　２．２．２  水提过程因素水平的选择及统计结果取影响水提取工艺的３ 个主要因素：水的用量、提取次数、提取时间，按Ｌ９ （３４ ）正交实验表进行实验，每个因素设计３ 个水平。因素水平见表３，结果见表４，方差分析见表5。

　　表３  丹参等水提工艺因素水平（略）

　　表４  丹参等Ｌ９ （３４ ）水提工艺正交实验及结果（略）

　　*综合评分为出膏率＋提取率

　　表5  丹参等水提工艺实验结果的方差分析（略）

　　结果分析：由表４ 数据可以看出，各因素对实验影响的大小依次为Ｃ ＞Ｂ ＞Ａ，即煎煮次数影响最大，其次为煎煮时间，最小为加水量。由表５ 可以看出，影响因素Ａ 和Ｂ 影响不显著，Ｃ 因素影响较显著，最佳实验条件为Ａ３ Ｂ２ Ｃ３ ，但Ａ３ 与Ａ２ 相差较小，而若选择Ａ２ 可较Ａ３ 少节约水资源，并减小需浓缩的药液体积， 大大节约能源，降低成本，节省时间，故应选择Ａ２ Ｂ２ Ｃ３ ，即正交表实验，丹酚酸Ｂ 的提取率平均为９１．３６％， 出膏率平均为２０．３７％，表明该工艺基本合理可行。

　　２．２．３  醇沉工艺因素水平表的设计取影响该过程的３ 个主要因素：浸膏相对密度、醇沉液的乙醇浓度、醇沉时间，按Ｌ９ （３４ ）正交实验表进行实验，每个因素设计３ 个水平。因素水平表见表６，结果见表７ ～８。

　　表６  丹参等醇沉工艺因素水平（略）

　　表７  丹参等醇沉工艺正交实验及结果（略）

　　丹酚酸B转移率=醇沉后丹酚酸B含量醇沉前丹酚酸B的含量×100%
   
　　杂质去除率（%）=醇沉前的固体量-醇沉后的固体量醇沉前的固体量×100%
   
　　综合评分（%）＝丹酚酸B的转移率＋杂质去除率

　　表8  丹参等醇沉工艺实验结果的方差分析（略）

　　结果分析：各因素对实验影响的大小依次为C> A > B ，即醇沉时间影响最大，其次为浸膏密度，最小为乙醇浓度，最佳实验条件为A3B2C1，但B1与B2相差极小，而若选择B1可较B2则乙醇的用量减少，并减小需浓缩的药液体积,大大节约能源，降低成本，节省时间，而且由方差 分析结果可知，3个因素均影响不显著，故应选择A3B1C1，即：醇沉前的浸膏相对密度为1.20，醇沉后乙醇浓度为60%，醇沉时间为12 h。经3批验证实验，丹酚酸B的转移率平均为91.60%，杂质去除率的平均为41.42%，表明该工艺参数基本合理可行。

　　3  讨论
   
　　本品为中药复方制剂，药味多，成分复杂。根据各药材的理化性质，将22种药材分成3部分，分别采用醇提、水提醇沉的提取方法。
   
　　通过正交优化实验，以有效成分转移率和出膏率为评价指标，确定了最佳工艺参数。经过3批验证实验，结果合理可行，且可控性强。

【】
  　　［1］ 国家药典委员会.药典［S］.北京：化工出版社，2005：211.