高效液相色谱法测定蒙药粘毛黄芩中黄芩苷的含量

                       作者：张金花，李占军，布仁 ，乔俊缠， 薛培凤 

【摘要】  　　目的 采用高效液相色谱法测定粘毛黄芩中黄芩苷含量。方法色谱条件为：采用C18柱,以甲醇-1%冰醋酸的水溶液（54∶46）为流动相，检测波长280 nm。结果平均回收率98.7%，RSD为0.96%。结论此法简便、灵敏、快速、可靠、重复性好，可用于粘毛黄芩药材的质量控制。

【关键词】  粘毛黄芩; 黄芩苷; 高效液相色谱法

　　AbstractObjectiveTo determine the content of Baicalin in Scutellaria viscidula Bge. by HPLC.MethodsThe separation was performed on kromasil C18 column with methyl  alcohol-1% acetic acid (54∶60) as mobile phase. The detection wavelength was 280 nm.ResultsThe average recovery was 98.7%, with RSD 0.96%. ConclusionThe method is easy, sensitive, quick, reliable and repeatable, it can be used for the quality control of Scutellaria viscidula Bge.

　　Key wordsScutellaria viscidula;  Baicalin;  Determination;  HPLC

    粘毛黄芩Scutellaria viscidula Bge.为唇形科黄芩属植物,主产于我国内蒙、山西等地区。有些地区将它作为黄芩的代用品使用,其资源丰富、质量较好,是最有利用价值的地方品种之一［1］。蒙药以其干燥根入药，谓其味苦性寒，清热解毒。主治毒热，“粘热”，肺热咳嗽，口渴［2］。粘毛黄芩根中含有黄酮类化合物：黄芩素(baicalein) 、汉黄芩素(wogonin) 、黄芩新素（neobaicalein）、粘毛黄芩素Ⅰ(viscidulin Ⅰ)、粘毛黄芩素II(viscidulin II)、粘毛黄芩素Ⅲ(viscidulin Ⅲ) 、千层纸素A(oroxylin A ) 、白杨素(chrysin) 、穿心莲黄酮（panicoin）、黄芩苷(baicalin)、汉黄芩素苷(wogonoside) ［3～5］。黄芩苷是粘毛黄芩的主要成分,为了解粘毛黄芩中黄芩苷的含量,为该蒙药材的质量控制提供依据，并为进一步了解其药理作用和合理开发提供基础资料,作者利用HPLC 法对粘毛黄芩中黄芩苷含量进行测定。

　　1  仪器与试剂

    大连依利特公司提供依利特高效液相色谱仪（P230高压恒流泵，UV230+紫外-可见检测器，EC2000色谱数据处理系统）；北京慧易德公司提供kromasil色谱柱（ kromasil100-5C-18, 5 μm, 250 mm×4.6 mm）。黄芩苷对照品（含量测定用）为药品生物制品检定所提供（批号110715-200514）；流动性所用甲醇为色谱纯试剂，水为市售娃哈哈纯净水，其他试剂试药均为分析醇。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件与系统

　　适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇∶1%冰醋酸的水溶液（54∶46）为流动相；流速1. 0 ml/ min ；柱温20 ℃；检测波长为280 nm。理论板数按黄芩苷应不低于20 000。

　　2.2  对照品溶液的制备

　　精密称取经五氧化二磷减压干燥12 h的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每毫升含20 μg的溶液。见图1。

　　2.3  供试品溶液的制备

　　称取干燥的粘毛黄芩粉末约0.3 g，精密称定，加70%乙醇40 ml,加热回流3 h，放冷，滤过，滤液置100 ml量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，摇匀，精密量取1 ml，置10ml量瓶中，加甲醇∶水（54∶46）至刻度，摇匀。见图2。

　　2.4  线性关系考察

　　称取适量黄芩苷标准品用甲醇定容置10 ml容量瓶，分别吸取0.5，1，1.5，2，2.5 ml置10 ml容量瓶，用流动相稀释至刻度。吸取上述溶液各20 μl 进样测定,以峰面积对浓度进行回归,求得回归方程为Y=84 653X+32.29,r=0.999 9，线性范围为0.011 45～0.057 25 mg/ml。

　　2.5  精密度实验　

　　取同一批号干燥的粘毛黄芩粉末, 按供试品项下方法处理后, 按上述色谱条件重复进样5 次，测得其峰面积的RSD为0.51%。

　　2.6   稳定性实验

　　精密吸取黄芩苷对照品溶液于1，2，4，6，8，12，24 h 进行测定,得黄芩苷峰面积的RSD为1.78%,可知黄芩苷溶液24 h稳定。

　　2.7  重复性实验 

　　取同一批号干燥的粘毛黄芩粉末5份, 分别按供试品项下方法处理后, 按上述色谱条件进行含量测定, 并对所得数据进行处理,黄芩苷含量的RSD为0.95%。

　　2.8  加样回收实验 

　　精密称取已测含量的干燥的粘毛黄芩粉末0.15 g (共5 份)，各精密加入没食子酸对照品适量，分别按供试品项下方法处理后,进行测定并计算回收率,结果测得平均回收率为98.7%，RSD为0.96%。结果见表1。表1  加样回收实验结果（略）

　　2.9  样品含量测定按供试品制备方法制成样品溶液，过样20 μl/次，测定峰面积，分别测定了3个产地的粘毛黄芩根中黄芩苷的含量。结果见表2。表2  样品的含量测定结果（略）

　　3 讨论

    为保证被测成分能被全部提净，实验过程中对提取溶媒、提取方法、提取时间、溶媒用量、提取次数进行了详细考察。最终确定提取方法为加70%乙醇40 ml,加热回流3 h，药材中的黄芩苷已基本提取完全。
   
　　黄芩苷(Baicalin) 是从粘毛黄芩根中提取分离出来的一种黄酮类化合物，具有清热解毒、利胆保肝等药理作用［6］。临床上用于肺热咳嗽、湿热泻痢等疾病。本实验对蒙药粘毛黄芩中黄芩苷进行了含量测定,结果显示,方法稳定可靠,重复性好,为粘毛黄芩药效的进一步研究和综合开发利用提供了新的依据。

【】
  　　［1］宋万志.药用黄芩的资源研究［J］.药学学报,1981,16(2)：139.

　　［2］朱亚民.内蒙古植物药志,第2卷［M］.呼和浩特：内蒙古人民出版社,1989：485.

　　［3］王红燕，肖丽和，刘 丽，等.粘毛黄芩根的化学成分研究［J］.沈阳药科大学学报，2003,20（5）：339,348.

　　［4］刘美兰，李曼玲，梁晓天，等.粘毛黄芩中黄酮类成分的研究［J］.中草药,1986,17(10): 438.

　　［5］于留荣，刘美兰，王孝涛.粘毛黄芩黄酮类成分的研究［J］.药学学报,1984,19（5）: 397.

　　［6］王浴生.药理与应用［M］.北京：人民卫生出版社,1983：956.