翻白草化学成分的研究

                作者：刘普，李军波，李立英，余华宁，秦琳琳，尹卫平

【摘要】  　　目的研究翻白草的化学成分。方法用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱等多种柱色谱分离，得到单体化合物，用各种有机波谱鉴定化合物结构。结果分离得到6个化合物，鉴定为坡模酸(pomolic acid，1)，3-O-乙酰坡模醇(3-O-acetyl-pomolic acid, 2)，齐墩果酸(oleanolic acid，3)，2α-羟基白桦酯酸(2α-hydroxyl betulinic acid, 4), 槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖(quercetin-3-O-β- D-glucoside，5)，山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖(kaempferol-3-O-β-D-glucoside，6)。结论所有化合物均为首次从翻白草中分离得到。

【关键词】  翻白草； 化学成分； 三萜； 黄酮

　　Abstract：ObjectiveTo study the chemical constituents of Potentilla discolor. MethodsChemical constituents were isolated by repeated column chromatographies. The structures were elucidated on the basis of spectral data analysis. ResultsSis compounds,  pomolic acid(1), 3-O-acetyl-pomolic acid (2), oleanolic acid(3), 2α- hydroxyl betulinic acid (4), quercetin-3-O-β-D-glucoside(5), kaempferol-3-O-β-D- glucoside (6) were isolated from P. discolor.ConclusionAll the compounds were isolated from the plant for the first time.

　　Key words：Potentilla discolor;   Chemical constituents;   Triterpenes;   Flavonoids
   
　　中药翻白草又名鸡腿儿、鸡脚草、鸭脚参、天青地白，为蔷薇科植物翻白草Potentilla discolor Bge.的干燥全草，是一种常见中草药。翻白草性平，味甘、微苦，无毒，归肝、胃、大肠经，具有止血止痢, 清热解毒、消肿之功效，常用于赤痢腹痛、久痢不止、咳血、吐血、大便带血、崩漏、肺痈、痈肿及结核等［1，2］ 。医学研究表明，翻白草具有抗菌、止泻、抗肿瘤、免疫抑制和降血糖的作用，在民间和临床上有抗糖尿病的应用［3～5］ 。报道从翻白草中分离得到的化合物主要有黄酮类，三萜类，单宁类和一些脂肪酸和酚酸类化合物［6～8］ 。本研究报道从翻白草的醋酸乙酯提取物中分离到的6个三萜类化合物，通过有机波谱解析鉴定了各单体化合物的结构，分别为坡模酸(1)，3-O-乙酰坡模醇(2)，齐墩果酸(3)，2α-羟基白桦酯酸(4)，槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖(5)，山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖(6)，所有化合物均为首次从翻白草中分离得到的化合物。
 
　　1  仪器、试剂及药材
   
　　核磁共振仪，Bruker AVANCE 500 instrument(TMS内标)；液质联用色谱仪，Alliance 2695, Quattro Micro TM ESI (Waters)；凝胶色谱柱，Toyopearl HW-40C (Tosoh)；柱色谱和薄层色谱用硅胶均系青岛海洋化工厂生产，所用试剂均为分析纯。
   
　　翻白草P. discolor采自豫西伏牛山区(2006年8月)，由洛阳梓生生物技术公司王忠东教授鉴定，标本存放于洛阳梓生生物技术公司。

　　2    方法与结果

　　2.1  提取分离翻白草10.3 kg，阴干，粉碎，用95%的乙醇浸泡3次，1周/次。提取液减压浓缩，得浸膏2 300 g，浸膏加水混悬后，分别用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇进行萃取，得醋酸乙酯提取物450 g，正丁醇浸膏520 g。醋酸乙酯和正丁醇提取物经反复硅胶柱色谱、凝胶渗透色谱分离得到化合物1～6。

　　2.2  结构鉴定

　　2.2.1  化合物1 白色无定型粉末。ESI-MS m/z：471［M-H］ - (推出分子式C30H48O4)。1H-NMR (CD3OD): δ：0.78 (3H，s)，0.80 (3H，s)，0.93 (3H，d，J = 6.4 Hz)，0.95 (3H, s), 0.98 (3H, s), 1.19 (3H, s),1.33 (3H, s), 2.50 (1H, s, 18-H), 3.15 (1H, m, 3-H), 5.28 (1H, br s, 12-H)。13C-NMR(CD3OD) δ(C-1～30): 39.8，27.8，79.8，39.8，55.7，19.6，34.2，41.0，42.9，38.1，24.7，129.5，139.9，42.9，29.6，26.6，48.1，55.0，73.6，42.5，27.2，38.9，28.8，15.9，16.4，17.5，24.9，182.3，16.7，27.2。以上光谱数据与文献［9，10］ 报道的数据一致，因此鉴定化合物为3 β,19α-二羟基-12-烯-28-乌苏酸(pomolic acid)。

　　2.2.2  化合物2为白色无定型粉末。ESI-MS m/z: 493 ［M-H］- ( 分子式 C32H50O5 )。1H-NMR ( 300 MHz , CDCl3 ) δ: 0.73 ( 3H, s ) , 0.85 ( 3H, s ) , 0.87 ( 3H, s ) , 0.88 ( 3H, s ) , 0.94 ( 3H, s ) , 1.21 ( 3H, s ) , 1.25 ( 3H, s ) , 2.05 ( 3H, s , OAc ) , 2.54 ( 1H, s ), 4.50 ( 1H, t , J= 8.5 Hz ), 5.35 ( 1H, br s, 12-H )。13C-NMR δ(C-1～30):  37.5, 27.4, 80.9, 37.7, 55.2, 18.3, 32.6, 38.1, 47.1, 36.9, 23.0, 129.3, 137.9, 39.9, 28.2, 24.5, 47.7, 52.9, 73.1, 41.1, 25.4, 36.9, 28.0, 15.3, 16.1, 16.9, 23.7, 182.4, 25.9, 16.7;  乙酰基：21.3, 171.0。以上光谱数据与文献［11］报道的数据一致，因此鉴定化合物为3-O-乙酰坡模醇(3-O-acetyl-pomolic acid)。

　　2.2.3  化合物3白色无定型粉末。ESI-MS m/z: 455［M-H］-(推出分子式C30H48O3)。1H-NMR (CDCl3) δ: 0.76 (3H, s), 077 (3H, s), 0.91 (3H, s), 0.92 (3H, s), 0.93 (3H, s), 1.00 (3H, s), 1.13 (3H, s), 2.82 (1H, m，18-H), 3.22 (1H, m，3-H), 5.29 (1H, br s, 12-H)。13C-NMR (CDCl3) δ (C-1～30): 38.5，27.3，79.0，38.7，55.3，18.3，32.7，39.3，47.7，37.1，23.1，122.7，143.6，41.5，27.7，23.4，46.5，41.2，45.9，30.6，33.8，32.5，28.1，15.3，15.5，17.1，25.9，182.5，33.0，23.6。以上光谱数据与文献［11，12］报道的数据一致，因此鉴定化合物为齐墩果酸(oleanolic acid)。

　　2.2.4  化合物4白色无定型粉末。ESI-MS m/z: 471［M-H］- (分子式 C30H48O4 )。1H-NMR (CD3OD) δ: 0.77 (3H , s ), 0.90 (3H, s ), 0.95 (3H, s ), 0.98（3H, s）, 0.99（3H, s）, 1.68 ( 3H, s ) , 2.83 (1H, m), 2.91 (1H, d, J = 9.6, 3α-H ), 3.61 (1H, m, 2β-H ), 3.02 (1H , m, 19-H), 4.58 (1H, br s, 30-Ha), 4.70 (1H, br s, 30-Hb)。13C-NMR (CD3OD) δ: 48.2, 69.8, 84.5, 39.6, 56.8, 19.7, 35.5, 40.4, 51.8, 39.5, 22.2, 26.8, 39.6, 43.6, 30.7, 33.3, 57.4, 48.3, 50.5, 151.5, 31.7, 38.1, 29.2, 17.2, 16.7, 19.4, 15.2, 180.0, 110.2, 19.5。以上光谱数据与［13］报道的数据基本一致，因此鉴定化合物为2α-羟基白桦酯酸 (2α-hydroxyl-betulinic acid)。

　　2.2.5  化合物5 黄色无定型粉末。ESI-MS m/z: 463［M-H］-(推出分子式C21H20O12)。1H-NMR (DMSO-d6 ) δ: 7.59 (1H, d, J= 2.5 Hz, H-2′), 7.58 (1H, dd, J= 8.5, 2.5 Hz, H-6′), 6.85 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-5′), 6.40 (1H, d, J= 2.5 Hz, H-8), 6.20 (1H, d, J = 2.5 Hz, H-6), 5.47 (1H, d, J= 7.0 Hz, H-1″), 3.09～3.65 (6H, m, H-2″～6″) ; 13C-NMR (DMSO-d6) δ: 156.3 (C-2), 133.6 (C-3), 177.7 (C-4), 161.4 (C-5), 99.0 (C-6), 164.6 (C-7), 193.8 (C-8), 56.5 (C-9), 104.0 (C-10), 121.7 (C-1′), 115.4 (C-2′), 145.0 (C-3′), 148.6 (C-4′), 116.3 (C-5′), 121.3 (C-6′), 101.2 (C-1″), 74.4 (C-2″), 76.7 (C-3″), 70.1 (C-4″), 77.7 (C-5″), 61.1 (C-6″)。上数据与文献［14，15］报道的槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷的数据一致, 故确定化合物为槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖(quercetin-3-O-β- D-glucoside)。

　　2.2.6  化合物 6 黄色针晶(甲醇), ESI-MS m/z: 447［M-H］-(推出分子式C21H20O11)。1H-NMR (DMSO-d6) δ: 8.04 (2H, d, J = 9.0 Hz, H-2′, 6′), 6.88 (2H, d, J = 9.0 Hz, H-3′, 5′), 6.43 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-8), 6.21 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-6), 5.46 (1H, d, J = 7.5 Hz, H-1″), 3.08～3.58 (6H, m,) ;13C-NMR(DMSO-d6) δ: 156.4 (C-2), 133.2 (C-3), 177.5 (C-4), 161.2 (C-5), 98.7 (C-6), 164.1 (C-7), 93.6 (C-8), 156.3 (C-9), 104.1 ( C-10), 120.8 ( C-1′), 130.9 (C-2′, 6′), 115.1 ( C-3′, 5′), 159.9 (C-4′), 100.9 (C-1″), 74.1 (C-2″), 76.3(C-3″), 70.0 (C-4″), 77.3 (C-5″), 61.0 (C-6″)。以上数据与文献［14～16］报道的山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖苷的数据一致，故确定化合物为山萘酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(kaempferol -3-O-β-D-glucoside)。

　　3  讨论
   
　　翻白草具有较强的降血糖的作用，民间有用其泡茶饮用防治糖尿病的报道。但对翻白草具体的降血糖作用物质基础和降糖机制的研究仍未有报道。中药糖尿病不仅具有毒性低、副作用小的特点，而且具有较强的防治糖尿病并发症的作用。因此，开展对中药翻白草的研究，对于开发具有降血糖作用的中药新药有非常重要的意义。

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