3-大豆苷元磺酸钠对大鼠脑缺血再灌注肾脏损伤保护作用的研究

                  作者：陈江林 曾靖 黄志华 叶和杨 黄真 肖海

【摘要】  目的观察3'-大豆苷元磺酸钠对大鼠脑缺血再灌注肾脏损伤保护作用的研究。方法取雄性Wistar大鼠32只，随机分为4组，每组8只，分别为假手术组，缺血再灌注组，3'-大豆苷元磺酸钠低、高剂量组。观察大鼠脑缺血再灌注后肾脏病理组织变化及有关指标改变。结果3'-大豆苷元磺酸钠对脑缺血再灌注损伤大鼠肾脏有明显保护作用，且呈一定的剂量依赖性。结论3'-大豆苷元磺酸钠对大鼠心肌缺血再灌注肾脏损伤具有一定的保护作用。

【关键词】  3'-大豆苷元磺酸钠 脑缺血再灌注损伤 丙二醛 超氧化物歧化酶

    Abstract：ObjectiveTo observe the protective effect of 3'-daidzein sulfonic sodium on renal injury after cerebral ischemia reperfusion in rats. Methods32 male Wistar rats were divided into 4 groups randomly, they are sham operation group, ischemia reperfusion group,low dose and high dose groups, 8 rats each group. The pathological change of renal tissue was observed and MDA,SOD were determined. Results3'?daidzein sulfonic sodium could decrease the content of MDA and elevate the activity of SOD in renal tissue and alleviate the pathological injury in a dose -dependent manner.Conclusion3'?daidzein sulfonic sodium has a protective effect on renal injury cerebral ischemia reperfusion in rats.

    Key words：3'-daidzein sulfonic sodium；  Impairment of cerebral ischemia reperfusion；   MDA；  SOD

    3'?大豆苷元磺酸钠(3'-daidzein sulfonate sodium DSS)是中药葛根的主要有效成分大豆苷元进行结构修饰和改性的新合成的强水溶性物质。中药葛根中葛根素和大豆苷元的药理作用研究较多。我们研究发现大豆苷元具有抗心律失常、松弛血管平滑肌、抑制胆囊收缩、耐缺氧、免疫增强和局部麻醉作用［1～5］；也有人报道大豆苷元具有抗氧化作用［6］，对由EDHF长期诱导的雄性大鼠内皮有松弛作用［7］，对体外动脉血管有松弛作用［8］。大豆苷元不溶于水，在临床中存在着生物利用度低、服用量大和显效慢等缺点，而3'?大豆苷元磺酸钠是大豆苷元进行结构修饰和改性的新的化合物［9］，水溶性强，且目前3'-大豆苷元磺酸钠的药理作用有本课题组已报道其抗心律失常、抑菌、抑制小鼠前列腺增生作用［10～12］。目前急性脑血管疾病继发肾脏损伤的现象受到人们的关注［13～15］，主要是肾小球滤过率功能受损，而肾小管受损相对较轻［16］。本课题组对3’?大豆苷元对大鼠脑缺血再灌注肾损伤的影响进行了研究。现报道如下。

    1  材料与仪器

    1.1  药物  3'?大豆苷元磺酸钠（分子式C15H9O7SNa，类白色结晶粉末，化学结构式见图1），由沈阳药科大学植化教研室提供，纯度为98%以上。实验前用双蒸水稀至所需浓度。

    1.2  动物3个月龄Wister大鼠，体重(220±20) g，雄性。由江西中医学院实验动物中心提供（动物中心许可证号2005-0001，动物合格证号：JZDW2006-076，级别：清洁级）。

    1.3  试剂SOD，MDA试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

    图1  3'-大豆苷元磺酸钠的化学结构式

    1.4  仪器Mettler Toledo AG135型光电天平，瑞士产品；中佳KLC?2046型低速冷冻离心机，科大创新股分有限公司中佳分公司生产；721-分光光度计，上海精密仪器有限公司生产；XDH?3心电图机，广东宝莱特医用科技股份有限公司生产；DH?140动物人工呼吸机，浙江医科大学医学仪器厂生产；电热恒温浴锅，湖北黄石医疗器械厂生产；JN-A型天平，上海第二天平仪器厂生产。

    2  方法［13］

    取雄性Wister大鼠40只，随机分为假手术组、缺血再灌注组、3'-大豆苷元磺酸钠低、高剂量组（1.0，2.0 mg/kg），每组8只。用10％水合氯醛(3 ml/kg)腹腔麻醉后，作气管插管，行人工呼吸。于左侧第3～4肋间开胸，剪开心包，暴露心脏，于肺动脉圆锥及左心房间找出冠状动脉左前降支，并用圆形无创缝合针6/0丝线置于左冠状动脉前降支起始部下2  mm处备用。除假手术组仅穿线不结扎外，其余各组均以0号线立即结扎。结扎冠状动脉左前降支使心肌缺血，以ECGⅡ导联ST段抬高0.1 mV或T波高耸、心肌颜色变暗红色为结扎成功的标志。40 min后恢复血流并持续120 min。并记录结扎前、结扎后30   min，结扎再灌后30，60，90，120 min的Ⅱ导联ECG。实验前舌下静脉注入（1.0，2.0 mg/kg）3'?大豆苷元磺酸钠溶液，缺血再灌注组及假手术组经舌下静脉注入等体积生理盐水，10 min后结扎冠状动脉左前降支前使心肌缺血，40 min后恢复血流并持续120 min，复制缺血再灌注损伤模型，实验结束后，左心室心内穿刺取血，分离血清置?70℃冰箱保存待测，测定丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD) 的活性。操作步骤按南京建成生物工程研究所试剂盒说明书进行。肾组织病检查：取左肾组织以Bouin's液固定，常规石蜡包埋，连续切片，HE染色，在光镜下观察左肾组织结构变化。评价3'?大豆苷元磺酸钠对大鼠心肌缺血再灌注肾损伤的保护作用。实验结果采用Excel 2000进行数据处理，数据以±s表示，行组间t检验。

    3  结果

    3.1  血清中超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量的影响结果表明，3’?大豆苷元磺酸钠（1.0，2.0 mg/kg）与缺血再灌注组比较。超氧化物歧化酶活性显著升高，且具有一定的剂量依赖性。丙二醛含量显著降低，且具有一定的剂量依赖性。结果见表1。表1  血清中超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量的影响与缺血再灌注组比较，*P＜0.05；**P＜0.01；n=8

    3.2  对肾脏组织病理改变取左肾组织以Bouin's液固定，常规石蜡包埋，连续切片，HE染色，在光镜下观察左肾组织结构变化。结果显示，肾脏组织病理改变与缺血再灌注组比较，3’-大豆苷元磺酸钠组充血减轻。小剂量3’-大豆苷元磺酸钠轻于缺血再灌注组，大剂量3’-大豆苷元磺酸钠基本未见有蛋白管型。说明3’-大豆苷元磺酸钠对心肌缺血再灌注大鼠肾脏具有保护作用。

    4  讨论

    急性脑血管病可并发肾脏损伤。据［15］报道急性脑血管病引起的急性肾功能衰竭发生率达11.2%。许多免疫及非免疫的实验研究均已证实氧自由基在急性肾脏损伤中有重要作用［17］。MDA是脂质过氧化物的降解产物，它的存在标志机体内有脂质过氧化过程的参与［18］。3’-大豆苷元磺酸钠对缺血再灌注后肾损伤具有明显的保护作用，能显著降低血清中的丙二醛含量，显著升高血清中超氧化物歧化酶的活性。对缺血再灌注后肾脏组织病理也具有明显的改变。其对肾脏的保护作用可能是通过清除氧自由基能力，增强机体抗氧化的能力而实现的。

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