金蚧胶囊中淫羊藿苷的含量测定

【摘要】  目的：建立金蚧胶囊中淫羊藿苷的含量测定方法。方法：HPLC测定金蚧胶囊中淫羊藿苷的含量。采用YWG?C18（4.6×250mm, 5μm）色谱柱，以乙腈?水（30：70）为流动相，检测波长为270nm。结果：5批金蚧胶囊成品测定结果表明，该方法操作简便，灵敏度高，干扰少，可用于本品的质量控制。

【关键词】  金蚧胶囊； 淫羊藿苷； 含量测定

金蚧胶囊其处方来源于部颁标准中药成方制剂第14册，标准号为WS3?B?2724?97。金蚧片由金樱子、蛤蚧、淫羊藿、韭菜子、山茱萸5味药物组成，具有补肾壮阳的作用。用于肾阳虚引起的性欲减退、阳痿、遗精、早泄、夜尿、小便余沥、白带过多、腰膝酸软。淫羊藿为方用量最大的药材，其指标成分主要为淫羊藿苷。为有效控制该品种的质量，选定淫羊藿苷作为质量控制的定量指标，我们选择高效液相色谱法（HPLC）作为淫羊藿苷的定量测定的方法。

    1  方法

    高效液相色谱法  。

    2  实验仪器与试剂

    LC?2010A高效液相色谱仪， KQ?250DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，220V，250W，40KHz）；乙腈均为色谱纯，水为重蒸水；其它化学试剂均为分析纯。

    3  对照品来源与样品来源

    淫羊藿苷对照品（供含量测定用），购自药品生物制品检定所，批号101737?200312。

    4  检测波长的确定

    取淫羊藿苷对照溶液在紫外可见分光光度计进行波长扫描，测得最大吸收波长在270nm，故确定检测波长270nm。

    5  方法学考察

    5.1  色谱条件考察

    通过乙腈?水（28：72）、乙腈?水（32：68）等流动相的选择，最终确定如下色谱条件：

    色谱柱：YWG?C18（4.6×250mm, 5μm）

    流动相：乙腈?水（30：70）

    流速：1.0ml/min

    柱温：30℃

    检测波长：270nm

    分离度： tr=2(t1-t2)/(w1+w2) =2.1

    理论塔板数：N=5.54*(tr/w1/2)2=7336

    5.2  线性关系考察

    精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇使其溶解，并制成每1ml含0.03456mg淫羊藿苷的对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液1.0、5.0、10.0、15.0、20.0μl，注入液相色谱仪，以淫羊藿苷色谱峰面积积分值为纵坐标，淫羊藿苷进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，回归方程为Y=2105633.761X-6223.368,r=0.9999），表明淫羊藿苷在0.03456～0.6912μg范围内呈线性关系。 表1  线性关系考察结果

    5.3  供试品溶液制备方法考察

    根据淫羊藿苷的溶解性及相关的报道，选用甲醇、乙醇、70%甲醇作为提取溶剂，并对其进行了选择。取同一批装量差异项下的金蚧胶囊10粒（批号：20060901），除去胶囊壳，研细，分别精密称取3份，精密加甲醇、乙醇、70%甲醇25ml，称定重量，照质量标准草案含量测定项下制备供试品溶液，并进行测定。表2  提取溶剂用量的选择结果

    结果显示，甲醇、乙醇、70%甲醇的提取液中淫羊藿苷的含量，甲醇最高，所以选择以甲醇为提取溶剂。

    5.4  提取方式的选择

    参照选择回流提取和超声提取进行考察。取同一批装量差异项下的金蚧胶囊10粒（批号：20060901），研细，精密称取2份，精密加甲醇25ml，称定重量，分别回流提取30分钟和超声提取30分钟，照质量标准草案含量测定项下制备供试品溶液，并进行测定。表3  提取方式的选择结果

    结果显示，两者测得淫羊藿苷含量差别不大，考虑到超声提取操作简便，省时，故选择超声提取较为理想。

    5.5  提取时间的选择

    取同一批装量差异项下的金蚧胶囊10粒（批号：20060901），研细，精密称取3份，精密加甲醇25ml，称定重量，分别超声提取20、30、40分钟，照质量标准草案含量测定项下制备供试品溶液，并进行测定。 表4  提取时间的选择结果

    结果显示，超声提取20min时，测得淫羊藿苷含量偏低，而超声提取30、40min时测得的淫羊藿苷含量相近，故选择超声提取30min。

    5.6  空白试验

    按照金蚧胶囊制备方法，制备成药空白样品（即除去淫羊藿欲测药材后制成的成药）。取空白样品约0.25g，精密称定，照供试品溶液制备方法制备空白对照液。

    空白对照液按含量测定方法进样，色谱图上在对照品峰的相应位置无干扰峰出现，说明本品其它成分对淫羊藿苷的定量无影响。

    5.7  精密度试验

    精密吸取取同一对照品（c=0.03456mg/ml）溶液，按质量标准草案含量测定方法检验5次，每次进样10μl，测得保留时间和峰面积结果见表5。淫羊藿苷峰面积积分值的相对标准偏差均小于2%，表明仪器精密度较高，可靠性强，方法可行。表5  精密度试验结果

    5.8  稳定性试验

    精密吸取上述供试品溶液，在0h、2h、4h、6h、8h各进样10μl，测得峰面积结果见表6。淫羊藿苷峰面积积分值的相对标准偏差均小于2%，说明样品在24h内稳定。表6  稳定性试验结果

    5.9  重现性试验

    取同一批金蚧胶囊（批号：20060901），精密称定5份，按质量标准草案含量测定项下，制备供试品溶液，并依法检验，每次进样20μl，测得淫羊藿苷含量见表7。结果淫羊藿苷含量相对标准偏差均小于2%，表明方法重现性良好。表7  重现性试验结果

    5.10  加样回收率试验

    采用加样回收法，取已知含量的供试品5份（批号：20060901），精密称定，分别精密加入定量的对照品，按质量标准草案含量测定项下供试品溶液制备和含量测定方法，制备供试品溶液并进行含量测定，回收率，见表8。淫羊藿苷对照品的平均回收率为96.7%，RSD为1.62 %，说明本法回收率好，方法可行。 表8  加样回收率试验考察结果

    6  样品含量测定

    取5批样品各10粒，取内容物，研细，取粉末适量，精密称定进行含量测定。 表9  5批成品中淫羊藿苷含量测定结果

    7  小结

    5批金蚧胶囊成品测定结果表明，该方法操作简便，灵敏度高，干扰少，可用于本品的质量控制。

【文献】
  1 李家实，主编.中药鉴定学，上海：上海技术出版社.1996，95～134.