两性霉素B中的铁含量测定

                          作者：杜晓霞 武仲涛 孟坚 宋如 张健 

【摘要】  目的 测定两性霉素B中的铁含量。方法 两性霉素B完全灰化后灰分用稀盐酸溶解，所得溶液中的Fe(III)在酸性条件下与硫氰酸钾生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，利用比色法测定铁含量。结果 配合物在波长500nm处有最大吸收，Fe(III)浓度在0.1～2.0μg/ml范围内服从Beer定律，标准曲线回归方程为：Y=0.1766X+0.0159，相关系数r=0.9995，变异系数1.23%，回收率98%～103%。结论 本实验将药典中铁的限量检查法与比色法结合，建立了铁的定量检查法，该法操作简便、快速、准确，结果令人满意。

【关键词】  两性霉素B； 灰化； 铁； 硫氰酸盐法； 比色法； 测定

两性霉素B是从链丝菌培养液中分离得到的多烯大环内酯类抗真菌药，为全身性深部真菌感染的首选药。两性霉素B原料药稳定性较差，研究表明铁含量高是影响其稳定性的主要因素，因此铁含量的控制是两性霉素B杂质控制的重要指标。药典中硫氰酸盐法仅可用于铁的限量检查，无法确知其含量［1］。本实验将硫氰酸盐法与比色法结合，可准确测得两性霉素B中铁的含量，本法重复性好，结果令人满意。

    1  材料与方法

    1.1  材料与仪器

    Fe(III)储备液(0.1mg/ml)  准确称取0.4317g NH4Fe(SO4)2·12H2O(分析纯)置500ml容量瓶中，加水溶解后加硫酸(分析纯)2.5ml，加水至刻度，摇匀。

    Fe(III)标准液(20μg/ml)  精密量取Fe(III)储备液20ml至100ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀。

    硫氰酸钾(分析纯)；过硫酸钾(分析纯)；硫酸(分析纯)；硝酸(分析纯)；盐酸(分析纯)；以上所用水均为纯化水。

    7230分光光度计上海精密仪器有限公司；AEDD微电脑红外线加热仪菏泽市控温技术研究所；箱式电阻炉北京太光节能技术有限公司。

    1.2  实验方法

    取两只25ml容量瓶，分别加入10ml供试品溶液，依次分别加入5.0ml硫酸(1mol/L)，2.0ml过硫酸钾(5%)，其中一只加入5.0ml硫氰酸钾(4mol/L)，另一只不加作为空白，分别用纯化水定容，摇匀。用1cm比色皿在室温下与波长500nm处测定吸光度。

    1.3  样品处理

    准确称取1g两性霉素B于坩埚中，先在红外线加热仪上加热炭化至无烟。移入箱式电阻炉中，于550℃灰化1h。冷却，加入2ml浓硝酸，水浴蒸干，再移入箱式电阻炉中，于550℃灰化4h［2］。冷却，加5.0ml(1+9)盐酸溶解，移入100ml容量瓶中，加纯化水至刻度，摇匀，得供试品溶液。

    1.4  标准曲线绘制

    取10个100ml容量瓶，分别加入0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、10.0、15.0、20.0和25.0ml Fe(III)标准液，加水至刻度，摇匀。对于每种浓度的溶液分别精密量取10.0ml两份，加入两只25ml容量瓶中，按实验方法进行显色操作。此溶液分别含铁0、0.08、0.16、0.24、0.32、0.40、0.80、1.20、1.60和2.00μg/ml。室温下在1cm比色皿中于500nm处测定吸光植。以吸光度为纵坐标，溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。

    2  结果与讨论

    2.1  显色原理    加入过硫酸钾可将溶液中的铁全部氧化为Fe(III)，在酸性溶液中Fe(III)与硫氰酸根生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，可利用比色法测定溶液中铁离子含量［3］。

    2.2  最大吸收波长的选择

    按实验方法显色操作，根据试剂空白对配合物的吸收曲线，测定知硫氰酸铁的最大吸收波长为500nm。因此本实验选择500nm为吸收波长。

    2.3  配位离子的形成速度及稳定性

    室温下硫氰酸铁可快速形成并很快达到稳定，因为显色过程中加入氧化剂过硫酸铵可防止由于光线使硫氰酸铁还原后分解褪色，配位离子在1h内稳定，1h后配位离子溶液变黄，吸光度降低。本实验进行显色操作后立即测定，结果理想。

    2.4  标准曲线

    标准曲线如图1。回归方程为：

    Y=0.1766X+0.0159  r=0.9995

    线性范围0.1～2.0μg/ml。

    2.5  样品处理方法确定

    样品处理直接影响测定的准确度。本实验选择硝解法、高温灰化法等各种方法对样品进行处理，根据实验数据确定本实验样品处理方法，实验精密度和准确度理想。

    2.6  方法精密度的考察

    随机抽取一批两性霉素B样品按实验方法处理后，进行显色操作，做三批平行实验，结果如表1，相对图1    标准曲线

    标准偏差1.23%，方法精密度高。

    2.7  方法准确度的考察

    随机抽取三批两性霉素B样品，按实验方法处理后进行显色操作，同时做加样回收实验，结果如表2，回收率98%～103%，方法准确度高。

    3  小结

    两性霉素B完全灰化后用稀盐酸溶解，所得溶液中的Fe(III)在酸性条件下与硫氰酸根生成红色可溶性硫氰酸铁配位离子，利用比色法测定铁含量，标准曲线回归方程：Y=0.1766X+0.0159，相关系数r=0.9995，变异系数1.23%，回收率98%～103%。本实验方法将药典中铁的限量检查法与比色法结合，定量检测铁含量，操作简便，结果准确可靠。表1 精密度实验(  表2  样品测定及加样回收实验

【】
  ［1］ 中华人民共和国药典委员会. 药典［S］. 2005.二部:附录ⅧG.

［2］ 吕绪东. 灰化酸溶法测定奶粉中金属元素含量［J］. 哈尔滨商业大学学报(版)，2003，19(4)：501～504.

［3］ 刘文英. 药物分析［M］.第5版. 北京：人民卫生出版社，2003：32～34.