三黄片中黄芩苷和盐酸小檗碱的含量测定

【摘要】  目的：观察高效液相色谱法(HPLC)测定三黄片中黄芩苷和盐酸小檗碱的含量。方法：采用HPLC法对方中黄芩苷和盐酸小檗碱同时测定。结果：采用波长265nm可同时测定两种组分。结论：本法测定结果准确，操作简便。

【关键词】  HPLC法 @三黄片 黄芩苷 盐酸小檗碱

　　三黄片中含有大黄、盐酸小檗碱、黄芩浸膏等成分。黄芩苷、盐酸小檗碱是处方中起主要药理作用的成分，药典标准中对黄芩苷和盐酸小檗碱只作了定性鉴别。我们用HPLC法同时测定了三黄片中黄芩苷和盐酸小檗碱的含量，方法准确、简便，可用于本品质量控制。

　　1  仪器与试剂
   
　　HP?1100高效液相色谱仪(美国)，SB5200超声振荡器，TU?1200紫外分光光度计；黄芩苷对照品和盐酸小檗碱对照品均由药品生物制品检定所提供；三黄片(河南三门峡门第三制药厂)；甲醇、乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

　　2  方法与结果

　　2.1  色谱条件  大连依利特产Hypersil C18色谱柱，4.6mm×150mm,5μm；流动相：甲醇?乙腈0.025mol/L磷酸溶液(用三乙胺调节PH 3.0±0.1)=25：20：55，流速0.8ml/min；紫外检测波长为265nm；柱温35℃。

　　2.2  供试品溶液及对照品溶液的制备  供试品溶液的制备：取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取1.8g，置100ml量瓶中，加50%甲醇适量，超声处理25min，用50%的甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。对照品溶液的制备：精密称取黄芩甙和盐酸小檗碱对照品适量，用50%的甲醇溶解并定容，制成含黄芩甙130μg/ml，盐酸小檗碱32μg/ml的混合对照品溶液。

　　2.3  线性关系的考察  分别精密量取对照溶液5，10，15，20，25μl过样，以进样量X(μg)为横坐标，以对照品峰面积积分值Y为纵坐标绘制标准曲线。得回归系数：黄芩苷y=449.99x+2513.78,r=0.993，线性范围：0.65-3.27μg；盐酸小檗碱y=114.18x+5354.55,r=0.996，线性范围：0.16-0.81μg。

　　2.4  精密度试验  精密量取对照品溶液10μl注入色谱仪，重复测定5次，黄芩苷和盐酸小檗碱对照品溶液的峰面积积分值的RSD分别为1.2%和1.0%。

　　2.5  加样回收率试验  称取已测知含量的同批样品5份，分别精密加入对照品溶液，按供试品溶液的制备方法并适当稀释，测定含量，回收率，结果黄芩苷的平均回收率为99.0%，RSD为0.73%；盐酸小檗碱的平均回收率为99.3%，RSD为0.67%。

　　2.6  样品测定  结果见表1。

　　表1  样品中黄芩苷和盐酸小檗碱含量测定结果（略）

　　3  小结

　　3.1  实验中比较了甲醇?磷酸溶液，乙脯?磷酸溶液等多种流动相体系，结果发现只有本实验的流动相比例，黄芩苷和盐酸小檗碱可同时测定，且达到完全分离。黄芩苷保留时间为3.4min，盐酸小檗碱保留时间为4.6min。柱效均在4000以上，分离度为4.97。

　　3.2  为了使盐酸小檗碱有较好的响应值，采用波长265nm可同时测定两种组分的含量。

【】
  　　［1］魏 宝，胡 嵘，徐多多，等.高效液相色谱法测定肺清颗粒中黄芩苷含量［J］.长春中医药大学学报，22(1)：51-52.

　　［2］孙尚志，张青青，张 辉.高效液相色谱法测定妇康灵胶囊中盐酸小檗碱含量［J］.长春中医药大学，2007，23(2)：71-72.