参芪王浆养血口服液中10?羟基?2?癸烯酸(10?HAD)的含量测定

【摘要】  　　目的：测定参芪王浆养血口服液中10?羟基?2?癸烯酸(10?HAD)的含量。方法：用高效液相色谱法，以ODSC18柱(150mm×4.5mmID,5μm)为固定相，甲醇?0.03mol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调pH2.5-2.7)(50：50)为流动相，检测波长为210nm。结果：10?羟基?2?癸烯酸在0.225～0.675μg范围内呈现良好线性，相关系数r=0.9999。平均加样回收率95.27%，RSD为1.36%(n=6)。结论：本方法简便、准确、重现性好。

【关键词】  参芪王浆养血口服液；10?羟基?2?癸烯酸；高效液相色谱法；

　　参芪王浆养血口服液是由人参、蜂王浆、黄芪、当归、蜂蜜及辅料组成。本文以参芪王浆养血口服液中的主要有效成分10?羟基?2?癸烯酸为指标，采用高效液相色谱法，以甲醇、磷酸二氢钠溶液为流动相，测定其含量，该法简便、准确、精密度高、重现性好，为控制质量标准提供了可靠的依据。

　　1  仪器与试剂
   
　　日本岛津LC?10Avp系列高效液相色谱仪，SPD?10Avp紫外检测仪；CLASS?VP数据处理机；对照品异秦皮啶(批号：0812?200003，供含量测定用，由药品生物制品检定所提供)；甲醇色谱纯，水为注射用水，其他试剂均为分析纯。参芪王浆养血口服液由吉林敖东药业集团延吉股份有限公司提供(批号060501、060502、060503、060604、060605、060606、061201、061202、061203、06124)。

　　2  色谱条件
   
　　色谱柱：Kromasil C18柱(150mm×4.6mmID，5μm)；流动相：甲醇?0.03mol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调pH2.5～2.7)(50：50)为流动相，检测波长：210nm；柱温：30℃；流速1.0ml/min；灵敏度：0.08AUFS。

　　3  线性范围的考察
   
　　精密称取10?羟基?2?癸烯酸对照品适量约10mg，置25ml容量瓶中，加甲醇稀释制刻度，摇匀，再精密吸取1ml置10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，配成每1ml含40μg的溶液，精密吸取10?羟基?2?癸烯酸(45μg/ml)对照品溶液5、7.5、10、12.5、15μl注样。记录色谱图，测定其峰面积，结果见表1。

　　表1  10?羟基?2?癸烯酸对照品测定结果（略）

　　结果表明，在0.225-0.675μg范围内，10?羟基?2?癸烯酸峰面积值与进样量有良好的线性关系。

　　4  精密度试验
   
　　精密吸取样品(061201)供试液10μl，重复进样5次，测定其峰面积，10?羟基?2?癸烯酸峰面积值的RSD=0.83%,结果平均值为2106148，RSD为0.83%(n=5)，试验结果表明，精密度良好。

　　5  稳定性试验
   
　　取样品(061201)供试液分别于0、4、8h，进样10μl，测得样品中10?羟基?2?癸烯酸峰面积值的RSD=0.69%，结果表明，样品供试液在8h内稳定性良好(n=5)。

　　6  重现性试验
   
　　按拟定的含量测定方法，对同一批样品(061202)制备样品供试液，测得峰面积值并含量，其10?羟基?2?癸烯酸峰面积值的RSD=1.40%；10?羟基?2?癸烯酸含量的RSD=1.36%。试验结果表明，本方法重现性良好。

　　7  回收率试验
   
　　精密量取已知含量的样品(061203)10ml，分别加入10?羟基?2?癸烯酸(0.853mg/ml)对照品溶液4.0、5.0、6.0ml按上述样品制备方法和色谱条件，制备加样回收供试品溶液并注入高效液相色谱仪，计算回收率，结果平均回收率为95.27%，RSD为1.36%。结果表明，回收率在95%～100%之间，回收良好。

　　8  样品测定
   
　　对照品溶液的制备：精密称取10?羟基?2?癸烯酸对照品适量，加甲醇制成每1ml中含40μg的溶液，即得。供试品溶液的制备：精密量取供试品20ml，置25ml容量瓶中，加入1mol/L盐酸溶液3ml，加水至刻度，充分摇匀，放置30min。精密吸取该溶液1ml，置分液漏斗中，加水20ml，用二氯甲烷萃取4次每次20ml，合并二氯甲烷，减压回收二氯甲烷，残渣用甲醇定容至10ml，摇匀，溶液用0.45μm微孔滤膜过滤，即得。测定法：分别精密吸取10?羟基?2?癸烯酸(42μg/ml)对照品溶液与10批样品供试液各10μl，按上述色谱条件测定，结果见表2。

　　表2  样品测定结果（略）

　　9  讨论

　　9.1  检测波长的选择  利用UV?2401PC型紫外分光光度仪，10?羟基?2?癸烯酸对照品，在200-400nm波长下进行紫外扫描，结果在210nm波长处有最大吸收，因此选择210nm为检测波长。

　　9.2  提取溶剂的选择  10?羟基?2?癸烯酸溶于氯仿、乙醚、石油醚、二氯甲烷等。曾用4种提取溶剂分别进行萃取，在相同条件下进行测定，结果每1ml样品中10?羟基?2?癸烯酸含量分别为0.38，0.32，0.31，0.42mg。用二氯甲烷萃取时，分层快，界面清晰，有利于快速测定，而且含量最高，故选用二氯甲烷为提取溶剂。

　　9.3  提取次数考察  照样品测定项下的测定方法，分别用水饱和醋酸乙酯提取1，2，3，4，5，6次依法测定。测定结果分别为0.28，0.35，0.40，0.43，0.42，0.43mg/ml，结果表明提取4次以后，10?羟基?2?癸烯酸基本提尽。

　　9.4  流动相的选择  本文曾用多种流动相，提高流动相的酸性可以改善色谱峰的峰形，但pH值太低影响色谱柱，故加入缓冲液，用磷酸调pH值，达到最佳分离效果。结果表明，本方法简便，准确，可靠，重现性好，方法可行［1-3］。

【】
  　　［1］赵亚华，蜂王浆中10?羟基?2?癸烯酸快速测定［J］.公共卫生，2004，(10)：11.

　　［2］吴 禾.高效液相色谱法测定珍贝素及蜂王浆中10?羟基?2?癸烯酸的含量［J］.药物分析杂志，1998，(3)：69.
　　
　　［3］张莉萍.高效液相色谱法测定蜂王浆中10?羟基?2?癸烯酸的含量［J］.中国中药杂志，1990，15(3)：30.