肝脂清颗粒剂对非酒精性脂肪肝大鼠空腹胰岛素含量及胰岛素抵抗的影响
【摘要】 目的：通过观察非酒精性脂肪肝大鼠胰岛素抵抗指数(IR)含量的变化，探讨肝脂清颗粒剂脂肪肝的机理。方法：采用高脂饲料复制脂肪肝模型，并以放射免疫法检测IR水平。结果：与正常对照组相比，造模组血液及肝组织中的IR升高(P＜0.01)，经防治与治疗后，阳性表达率明显降低，其差异具显著性。结论：肝脂清颗粒剂有阻断氧化应激、减轻炎性反应的作用，对于非酒精性脂肪肝作用确切。
【关键词】 肝脂清颗粒剂 非酒精性脂肪肝 模型 动物 IR
肝脂清颗粒剂由黄连、黄芩、陈皮、茯苓、冬瓜仁、海蛤粉等15味中药组成，具有健脾行气、化痰通络、软坚散结的功效，临床用于治疗和预防各种类型的脂肪肝。本研究通过观察其对非酒精性脂肪肝大鼠胰岛素抵抗指数的变化，探讨其治疗脂肪肝的机理。
1 材料和方法
1.1 材料 动物与饲料：健康雄性Wistar大鼠125只，体重(130±10)g,购于山东大学实验动物中心，鲁动质字D20021024，SPF级。大鼠普通饲料及高脂饲料(普通饲料+15%猪油、2%胆固醇、5%蛋黄粉、0.5%胆酸钠)均由山东中医药大学实验动物中心提供。
药物与试剂：肝脂清颗粒剂：由山东中医药大学附属制剂室提供。东宝肝泰片：通化东宝药业股份有限公司生产，国药准字：H22024764，批号：040302。胰岛素放射免疫分析试剂盒，购自潍坊三维生物工程集团有限公司。
主要仪器：TG328B分析天平：上海天平仪器厂。GMJ型全自动放射免疫γ计数器：江苏省电子医疗研究所；放射免疫仪：北京东恒仪器厂；匀浆器。
1.2 方法
1.2.1 动物模型的建立 采用高脂饲料喂养法建立大鼠脂肪肝模型。空白组喂以普通饲料，正常饮水。非酒精性脂肪肝组喂以高脂饲料，正常饮水。造模12周。
1.2.2 动物分组及处理方法 Wistar大鼠80只常规饲养1周后分组处理，分组采用随机方法：将大鼠分别按体重标号(1～80只)，查随机排列表，将动物编号与表中的随机数字相对应，分为8组：即正常空白组：采用普通饲料饲养，正常饮水，12周后处死；脂肪肝模型组：采用高脂饲料饲养，正常饮水，12周后处死；脂肪肝防治组：在给予高脂饲料的同时，给予肝脂清0.75g/100g体重灌胃，每日1次，连续12周后处死；正常保留组；处理方法同正常空白组，连续22周后处死；脂肪肝模型恢复组：前12周同模型组、后10周普通饲料饲养，正常饮水；肝脂清治疗高剂量组：前12周同模型组、后10周在正常饲养的同时给予肝脂清3.75g/100g体重灌胃，每日1次；肝脂清治疗低剂量组：前12周同模型组、后10周在正常饲养的同时给予肝脂清1.88g/100g体重灌胃，每日1次；东宝肝泰组：前12周同模型组、后10周在正常饲养的同时给予东宝肝泰0.1g/100g体重灌胃，每日1次。
2 结果
所有动物每隔2周后称重记录，观察并记录动物的饮食活动、毛色、死亡等情况。分别于12周末及22周末处死动物，全部称重后腹腔注射2%戊巴比妥钠(按4.5mg/kg)麻醉后腹腔静脉取血处死，称取全肝湿重并记录，取相同部位肝组织，用匀浆器匀浆，按照试剂盒要求采用化学比色法测定肝组织及血清中的胰岛素(INS)含量。
2.1 动物的一般情况 空白对照组一般情况良好，模型组动物形体肥胖，精神不振，毛色无光泽易脱落，不喜活动，防治组大鼠活动正常，精神较好；经后大鼠一般情况较模型组明显转好。
2.2 胰岛素抵抗指数(IR)的变化 分别于12周末及22周末处死动物，取血及肝匀浆，按照试剂盒要求采用放射免疫法测定肝组织INS含量,观察胰岛素抵抗指数(IR)的变化。结果见表1、表2。
从表1中可以看出:模型组有显著的IR，且IR指数明显高于正常组，统计学处理有非常显著性差异(P＜0.01)；而防治组对IR的影响显著，阻断了IR的发生，虽与正常组有差异(P＜0.05)，但与模型组比较差异非常显著(P＜0.01)。
表1 防治组对胰岛素及胰岛素抵抗指数的影响（略）
注：*与正常组比较*P＜0.05，**P＜0.01；△与模型组比较△P＜0.05，△△P＜0.01。
表2 各治疗组对胰岛素及胰岛素抵抗指数的影响（略）
注：*与正常组比较*P＜0.05，**P＜0.01；△与恢复组比较△P＜0.05，△△P＜0.01；▲与东宝肝泰组比较▲P＜0.05，▲▲P＜0.01
从表2可以看出：各治疗组均对IR有良好的治疗作用，肝脂清用药各组及东宝肝泰组模型恢复组比较均存在非常显著性差异(P＜0.05)；肝脂清高、低剂量组疗效均好于东宝肝泰组，统计学处理差异显著(P＜0.01)，肝脂清用药各组与正常组比较无显著性差异(P＞0.05)，东宝肝泰组与正常组比较均存在非常显著性差异(P＜0.01)。
3 小结与讨论
脂肪肝是指由于各种原因使肝脏脂肪代谢功能发生障碍［1］，导致脂类物质的动态平衡失调，过量脂肪在肝细胞内堆积，若其贮存量超过肝湿重的5%以上或在组织学上有１／３以上的肝细胞脂肪化，即为脂肪肝。医学认为脂肪肝的发病机理相当复杂，大致包括肝脏脂质代谢障碍、胰岛素抵抗、氧化应激和脂质过氧化反应、免疫反应与遗传因素等。其中重要环节为胰岛素抵抗、FFA的增多、TNF?α增加、丙二醛、内毒素等的蓄积，它们进一步介导肝细胞的破坏及脂质代谢障碍。
IR对脂肪肝的形成起着至关重要的作用，IR对机体的组织、器官包括肝细胞的胰岛素受体的敏感性降低，使胰岛素介导的糖氧化、贮存异生受损，以致糖代谢异常。同时IR，体内脂肪分解速度加快，脂蛋白活性下降等生成过量内脏脂肪沉积，而脂肪肝是作为内脏脂肪沉积的一种表达方式。因此打破IR，提高机体对胰岛素的敏感性是对恢复脂代谢必不可少的。
报道，无论是糖尿病、肥胖等原因所引起的非酒精性脂肪肝，还是因酒精引起的酒精性脂肪肝，均存在着胰岛素抵抗的发病机制［2］，胰岛素的主要效应器官为：肝脏、骨骼肌和脂肪组织，效应器官对胰岛素的敏感性和(或)反应性降低，则表现为IR。FFA、TNF?α的升高、CYP2E1的高表达、铁的吸收增加以及蓄积均可导致胰岛素效应降低而形成IR。而IR一旦发生，外周脂肪组织分解增加，肝脏攫取FFA增加、CYP2E1的表达增加，一些细胞因子如TNF?α、转化生长因子β、干扰素、IL?-8的分泌增加。同时，IR时脂蛋白酶的活性降低，甘油三酯合成增多，而分解、清除降低，造成高脂血症及脂质肝内蓄积。从而造成了IR与脂质蓄积的恶性循环，因此，消除IR是预防脂肪肝的重要环节之一［3］。
实验结果显示：正常组与肝脂清防治组抵抗指数均无明显差异；模型组抵抗指数显著高于正常组，说明存在着胰岛素抵抗；肝脂清两治疗组抵抗指数明显下降，与正常组无明显差异；东宝肝泰对胰岛素抵抗有治疗作用，但效果不如肝脂清。而本实验结果表明，肝脂清可提高胰岛素的敏感性，打破并有效清除胰岛素抵抗(IR)，恢复正常糖脂代谢，从而达到预防脂肪肝的目的。
【文献】
［1］李 锋，范建高，蔡晓波，等.非酒精性脂肪性肝病致代谢异常［J］.肝脏，2006，11(1)：7-11.
［2］范建高，曾民德.脂肪性肝病［M］.北京：人民卫生出版社，2005:77.
［3］叶 放，赵文霞.中医对非酒精性脂肪肝的研究现状［J］.中西医结合消化杂志，2003，11(1)：60-62.
