肿瘤坏死因子?α及其-308位点基因多态性与肝病的关系

【摘要】  肿瘤坏死因子(TNF) ?α具有多种生物活性，参与多种肝病的发生，由于TNF?α的-308位点基因多态性,使得细胞因子的产量发生变化，并与疾病过程相关。现就TNF?α及其-308位点基因多态性与一些肝病的相关性作一综述。

【关键词】  TNF?α-308位点 ；基因多态性 ；肝病

　　肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF) 主要由单核巨噬细胞在病毒、炎症介质等刺激下生成的一种多肽。它可分为2类，即TNF?α、TNF?β［1］。研究发现，TNF?α是一种多功能的细胞因子，与许多疾病有关，其中它与肝病的发生、发展、结局密切相关。本文就TNF?α及其-308位点基因多态性与一些肝病的关系作一综述。
    
　　1  TNF?α的一般生物学特性
    
　　人类TNF?α基因大小为2.76 kb，由4个外显子和3个内含子组成，与MHC紧密连锁，定位于第6对染色体短臂上［1］。Wilson等［2］首先报道了TNF?α启动子转录起始位点上游第308位点(-308)存在G→A的替代，G存在时定义为常见型TNF1，A存在时定义罕见型TNF2。目前比较一致地认为TNF2可影响TNF?α启动子的活性，它在体内外促进TNF?α的产量比TNF1高。
     　　
　　TNF?α由157个氨基酸组成、分子量为17 kD的可溶性多肽，在血液中常以三聚体形式存在。TNF?α与靶细胞膜上的受体（TNFR）结合后产生非常广泛的生物学效应，包括杀细胞活性、抗病毒活性、诱导细胞间黏附分子Ⅰ及白细胞介素Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ等的表达、促成纤维细胞生长以及细胞程序化死亡、激活核转录因子?κB（NF?κB）等多种生物活性物质的信号传递［3］。
    
　　2  TNF?α与肝病的关系

　　2．1  TNF?α与病毒性肝炎的发生
     　　
　　当细胞被肝炎病毒感染后，它对TNF?α的敏感性增加并易于破坏。边中启等［4］给动物预先注入鸭肝炎病毒，然后注入TNF?α，可致动物的肝严重受损，而单用鸭肝炎病毒或TNF?α均不发生明显肝损伤。
     　　
　　各型肝病患者血清TNF?α水平上升，并与病情相关。各型肝炎、肝炎后肝硬化及原发性肝癌患者的血清学检测发现TNF?α均处于高活性状态，含量明显高于对照组，病情越重，TNF?α活性水平越高；并且发现它的含量与病毒复制活跃有关，乙型病毒（HBV）DNA或HBeAg阳性患者的TNF?α含量明显高于阴性组［4］。其原因可能有：肝炎病毒刺激机体产生大量的TNF?α，它可直接或简接地损害肝细胞。它还可增强HBV在肝内复制，而HBV复制又可刺激外周单核细胞分泌更多的TNF?α，进一步加重肝损害。
     　　
　　近年的研究还发现TNF?α可激活NF?κB［6］， NF?κB能拮抗携带肝炎病毒的肝细胞凋亡并促进它的增殖，从而引起病毒的持续复制和扩散。
    
　　鉴于TNF?α在病毒感染过程中复杂而重要的作用，TNF?α启动子多态性与病毒感染　　宿主易感性的研究最先受到广大研究者的重视，但研究的结论却是不一致的。
     　　
　　Hohler等［7］首先研究了TNF?α的-308G／A在HBV慢性感染患者、HBV急性感染自限性患者和对照者的分布情况，未发现-308G／A在各组中的分布有差异。然而近年来，Hohler的这一结论却不断受到挑战，甚至许多研究者得出了相反的结论。国内张平安等［8］对武汉地区乙肝患者和正常对照的TNF?α的-308G／A研究发现，两组人群的这位点存在基因型分布和等位基因频率的差异，乙肝患者-308 G／G基因型明显升高，相对风险率RR为3.12，这与Hohler的研究结论相反。
     　　
　　但徐旭雯等［9］在慢性重型乙肝患者研究中却发现， TNF2等位基因出现的频率明显高于正常人和慢性轻度乙肝患者及无症状携带者组，提示该位点的基因多态性与重型肝炎的发生有关。在重型肝炎患者中，血清TNF?α的检测结果进一步证实，TNF1／2杂合子的血清TNF?α水平明显高于血清TNF1／1纯合子，且预后较差。推测携带A等位基因的HBV感染者在病毒等因素的刺激下，易产生过高水平的TNF?α，引起过强的免疫应答及炎症反应，导致肝细胞严重损伤甚至大量肝细胞坏死，临床表现为重型肝炎，甚至发生各种严重的并发症。

　　2．2  TNF?α与肝硬化的发生
     　　
　　TNF?α是肝纤维化形成的关键细胞因子。以CCL4造模，发现TNFα受体缺陷的转基因小鼠的肝几乎没有纤维化的病理组织学改变，且前胶原和TNF?α合成均显著减少［10］。肝炎后肝硬化患者TNFα水平较肝炎期高，并且失代偿期患者TNF?α水平较代偿期明显增高［11］。TNF?α作为炎症介质参与肝纤维化的形成及发展，并与肝损害程度呈正相关。
     　　
　　TNF?α一方面可介导一系列炎症细胞因子的分泌，并通过炎症反应来增加转化生长因子β，刺激细胞外基质(ECM)合成增加；并能上调肝细胞蛋白水解酶抑制物的合成，引起ECM的降解减少。从而导致ECM过度沉积形成肝纤维化。另一方面TNF?α可促进肝星状细胞增生并向肌成纤维细胞（MFb）转化［12］。
     　　
　　林菊生等［13］发现携带TNF2等位基因的个体在乙肝后发生肝硬化比不携带者的危险性增加1.17倍；Tokushige等［14］报道携带TNF2等位基因者在丙肝后发生肝硬化的危险性高5.1倍。国内外研究比较一致地认为TNF?α-308G→A多态性与乙肝、丙肝后肝硬化的遗传易感性相关。Czaja 等［15］报道携带TNF2等位基因在I型自身免疫性肝炎患者比正常对照者多见，并更容易进展到肝硬化，这提示TNF?α的多态性与I型自身免疫性肝炎的易感性及疾病的进程有一定的关系。

　　2．3  TNF?α与肝癌的发生
     　　
　　1975年，Carswell等人发现TNF?α除了对肿瘤细胞本身具有细胞毒性之外,它也能摧毁实体瘤周围的血管上皮组织,并且通过血栓的形成,阻断肿瘤的血液营养供应,最终导致肿瘤的出血性坏死、消退或消失。自从1984年成功获得TNF?α克隆，此后它被广泛应用与肿瘤的临床，然而其疗效并不理想。
     　　
　　近来的研究表明，TNF?α对肿瘤的作用呈双向性，既可杀伤肿瘤细胞亦可促使肿瘤细胞生长和浸润。
     　　
　　TNF?α是癌发生过程中必要的细胞因子。在胆素诱导下，TNF受体1基因敲除鼠的肝肿瘤发生下降。说明TNF?α参与了肝细胞再生，肝肿瘤的发生［16］。在肿瘤促进剂作用下，TNFα基因敲除鼠到第19周还没形成皮肤癌，第20周有10%成癌，而正常鼠已100%成癌 ［17］。
     　　
　　肿瘤病人的血清中TNF?α水平明显升高。瘤症病人的单核细胞和多种恶性肿瘤病人的血清中均可检测到高水平的TNF?α。肝癌患者血清TNF?α水平明显高于肝炎后肝硬化患者，且随肝癌的有效治疗血清TNF?α水平逐渐下降，而随病情进展血清TNF?α水平明显上升［11］。Nakazaki报道，肝细胞肝癌、转移性肝癌和胃肠癌三组病人的血清TNF 水平不同， 前两者高于后者和正常人对照组，并且肝癌复发与否与血清TNF水平有关 故认为TNF是肝癌一个标志物，在癌变中起一定作用［18］。
     　　
　　TNF?α促肿瘤生长作用的可能证据有: ①当TNF?α作用于体外培养的肿瘤细胞时，肿瘤细胞克隆面积和细胞计数均增加［19］；②在肿瘤微环境中可检出高表达的TNF，且在分子水平上有TNF的DNA合成及RNA表达增多，此时肿瘤细胞增殖旺盛；③ TNF?α≤104 U/L能有效地诱导血管内皮生长因子(VEGF)的表达,促进新生血管的形成，为肿瘤的生长供应营养物质 ［20］；④ TNF?α可激活NF?κB进而抗肿瘤调亡，导致肿瘤细胞无限生长［6］。
     　　
　　Sheng YH等［21］在对74例原发性肝癌患者和289例健康对照检测TNF?a -308位点的多态性。发现TNF2等位基因在病例对照中分布差异有显著性OR=3.5。提出TNF2是肝癌的一个危险因素。也有学者提出长期慢性炎症并携带TNF2等位基因的患者会增加肝癌发生的危险性。而Yue W［22，23］ 等发现TNF?a-308位点基因多态在日本携带HBV、HCV的肝癌患者与非肝癌患者的分布差异无显著性,认为TNF?a-308位点的基因多态与肝癌的发生无关。
     　　
　　综上所述， TNF?α与多种肝病相关。TNF?α的-308位点的多态性可影响TNF?α的表达量,从而参与相关的疾病发展过程。但其与疾病的相关性报道不尽相同,可能与人种、地区差异有关,有待进一步研究。对此研究的不断深入，对进一步了解TNF?α在肝病中的作用具有深远意义。

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